RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达和临床意义①

孙宏建，侯志凌，曹洪涛，段笃文

(1.佳木斯市中心医院，黑龙江 佳木斯 154002；2.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达和临床意义①

孙宏建1，侯志凌2，曹洪涛1，段笃文1

(1.佳木斯市中心医院，黑龙江 佳木斯 154002；2.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：检测RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达，分析两者在结直肠癌发生、发展中的作用、关系。方法：免疫组化法检测83例患者肿瘤组织以及26例癌旁正常组织中HuR及TTP的表达。结果：蛋白HuR在肿瘤细胞质中的表达明显高于癌旁正常组织细胞质中的表达，而蛋白TTP在肿瘤组织中的表达则明显低于癌旁正常组织中的表达。经Spearman 等级相关分析HuR和TTP表达呈负相关性(P<0.05)。结论：在结直肠癌的发生发展过程中，信使RNA的稳定因子HuR表达上调，而信使RNA的降解因子TTP下调或缺失。在结直肠癌的发生过程中可能起拮抗作用。胞质HuR蛋白的表达可促进肿瘤发生发展。

结直肠癌；RNA结合蛋白；人组织抗原R；锌指蛋白36

信使RNA的降解是调控许多与肿瘤相关基因的表达的重要机制。许多恶性肿瘤相关基因的信使RNA 的3′非翻译区(3′untranslated region，3′UTR)含有保守的AU 重复序列(AU-rich element，ARE)，该序列可以与RNA 结合蛋白HuR及TTP结合，发生相互作用共同调控肿瘤的发生发展[2，3]。本文采用免疫组织化学方法，检测83例结直肠癌以及26例癌旁正常组织中RNA 结合蛋白HuR及TTP的表达水平，探索两者在结直肠癌发生、发展中相互关系，并发掘HuR和TTP对结直肠癌监测、诊断及治疗可能具有的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院外科于2008-01～2012-11部分结直肠癌手术标本共83例：其中男47例，女36例，年龄35～75岁，中位年龄55岁；Dukes分期：A期11例，B26例，C期32例，D期14例；证实有淋巴结转移28例，无转移55例，另取距离肿瘤3cm以上的癌旁正常组织26例作为对照组。全部病例术后病理诊断明确、临床资料完整且均为第一次手术治疗的患者。

1.2 试剂

19F12 HuR 单克隆抗体，N-18、G-20 TTP多克隆抗，二抗来自SP-9000免疫组织化学检测试剂盒。

1.3 免疫组织化学方法

石蜡切片经常规脱蜡至水中, 将切片置于3%的过氧化氢溶液中10min以阻断内源性过氧化氢酶活性，高压修复,封闭液室温封闭1h，一抗按说明书稀释后滴加并4℃过夜,次日滴加二抗,室温孵育30min，PBS/TBS洗3次，每次5min，滴加辣根酶标记链霉卵白工作液室温孵育30min，DAB显色, 苏木素复染, 切片置于80%、95%、95%、100%酒精脱水，脱水,中性树胶封片。用缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定

由两位观察者采用双盲法在高倍镜下进行观察，每张切片随机选取5个视野，每个视野下计数200个细胞，共计数一千个细胞。细胞阳性的染色定义是：细胞的结构清晰，阳性颗粒的定位良好，背景与着色对比清晰，阳性表达标准均参照Essapen[4]的评判标准,肿瘤细胞>10%着色即为阳性。其中HuR蛋白阳性反应为棕黄色颗粒在肿瘤细胞核及胞质中均有分布，而TTP蛋白则主要分布于胞质中。

1.5 统计学方法

采用SPSS for windows 16.0统计学系统软件进行处理，其中计数资料采用χ2检验进行检验，两种RNA结合蛋白HuR和TTP在结直肠癌中表达的相关性则运用Spearman等级相关分析，均以P<0.05差异为具有统计学意义。

2 结果

2.1 RNA结合蛋白HuR和TTP的表达情况

显示HuR和TTP在肿瘤组织以及癌旁组织中均有表达(图1～4)。两者在肿瘤组织以及癌旁正常组织细胞质中的表达见表1～2。

图1 结肠癌组织中HuR高表达

图2 癌旁正常组织中HuR低表达

图3 结肠癌组织中TTP低表达

图4 癌旁正常组织中TTP高表达

表2 TTP在肿瘤组织及癌旁正常组织细胞中的表达

2.2 RNA结合蛋白HuR和TTP在结直肠癌中表达的相关性分析

在本次研究中结果显示83例肠癌患者中癌组织胞质HuR和TTP均阳性表达者仅1例胞质HuR和TTP均阴性表达者48例，有统计学意义。提示结直肠癌中胞质RNA结合蛋白HuR和TTP表达呈负相关，见表3。

表3 RNA结合蛋白HuR和TTP在结直肠癌中表达的相关性

3 讨论

在我国大肠癌发病率及死亡率占全部恶性肿瘤的第 4 位,仅次于胃癌、食管癌和肺癌等常见恶性肿瘤[5]。结肠癌患者死亡的最主要原因就是结肠癌向周围组织的侵袭和转移[6]。RNA结合蛋白HuR和TTP及其表达与肿瘤的发生、发展及转移是近年来的研究热点。HuR蛋白能够识别并结合很多靶基因信使RNA中的AREs，稳定靶基因的信使RNA从而抑制信使RNA的降解，参与靶基因的转录后调控，调节肿瘤细胞的生长增殖、分化、信号的转导、转录及翻译、血管的新生、蛋白质转运、细胞的凋亡以及其新陈代谢等多种生理生化过程[7]。蛋白TTP能与多种靶基因信使RNA的ARE结合，促进多种靶基因的信使RNA降解[8]。TTP蛋白还通过调节介导炎性的细胞因子的降解，抑制相关炎症基因的表达，从而发挥着一定的抗肿瘤作用。另外，TTP蛋白介导了许多和增殖有关的基因信使RNA的降解，或许有潜在的抑制许多恶性肿瘤异常增殖的作用[9]。

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孙宏建 (1982～) 男，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生，主治医师。

R735.3+5；R735.3+

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1008-0104(2015)01-0091-02

2014-05-30)