WISP-2及FGFBP1在非小细胞肺癌中的表达①

阎红娥，秦 越，鲍文华，孙云晖

(佳木斯大学附属第一医院呼吸内科，黑龙江 佳木斯 154003)

WISP-2及FGFBP1在非小细胞肺癌中的表达①

阎红娥，秦 越，鲍文华，孙云晖

(佳木斯大学附属第一医院呼吸内科，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：研究WISP-2及FGFBP1在非小细胞肺癌中的表达情况，并剖析两者之间的相互关系，及评估两种因子与非小细胞肺癌患者在相关的临床参数之间的关系。方法：采用IHC-P法对经病理证实为NSCLC患者40例，取其癌组织标本及远离癌肿5cm的组织标本40例作为对照组。所有患者在术前未经经放、化疗、激素的应用及其它抗癌治疗。结果：①NSCLC中WISP-2的阳性表达率25例(62.5%)明显低于对照组的阳性表达率33例(82.5%)，NSCLC中FGFBP1的阳性表达率30例(75%)明显高于对照组的阳性表达率12例(30%)。②WISP-2(+)FGFBP1(+)13例、WISP-2(-)FGFBP1(+)12例、WISP-2(+)FGFBP1(-)13例、WISP-2(-)FGFBP1(-)2例，两因子表达呈负相关，差异具有统计学意义(χ2=4.95，P<0.05)。③WISP-2与FGFBP1在年龄及性别的阳性表达率不具有统计学意义(P>0.05)，而其他临床参数均具有统计学意义(P<0.05)。结论：在NSCLC中，WISP-2呈低表达而FGFBP1则相反，两者呈负相关，且WISP-2与FGFBP1在年龄及性别的阳性表达无相关性而在其他临床参数之间关系密切，可以作为临床诊断的参考指标，也可以为NSCLC的临床治疗提供新的思路。

WISP-2；FGFBP1;非小细胞肺癌

WISP-2(CCN5)是CCN家族就在近年来发现的一个新成员，即Wnt-1有道分泌蛋白2，其具体作用尚未明确及生物学相关特征报道较少，但近年来的相关研究发现，WISP-2基因与某些肿瘤的发生发展有着紧密的关系，因此组织学类型不同表达也不相同。有数据相关研究表明WISP-2基因具有双向调节的作用，因此近年来成为CCN家族的主要研究热点。FGFBP1最初是在表皮的鳞状细胞癌株(A431)的培养基液中分离出来得到的,目前认为它与成纤维细胞生长因子家族(FGFs)有着密切的关系。FGFBP1的作用即是结合未活化的FGFs至细胞外基质(ECM)中，使其从ECM上解离并活化后提呈至FGFs受体，从而发挥其生物学的功能。近年来的研究发现，在人类不同癌组织中，均发现FGFBP1呈现高表达，其对肿瘤细胞的增殖及血管组织的生成具有正向调控的作用，充分的证实了FGFBP1可能在恶性肿瘤的发生发展过程中起到了非常重要的作用。 本实验应用了IHC-P原理来检测两因子在NSCLC中的表达研究，并分析两者之间的相互关系，及评估两因子与NSCLC患者在相关的临床参数之间的关系，从而为NSCLC提供新的临床诊断及治疗。

1 材料与方法

1.1 材料采集

随机选取2013-12～2014-05佳木斯大学附属第一医院病理科经病理诊断证实共40例NSCLC病人的石蜡标本，并以远离癌肿5cm的组织标本40例作为对照组。其中腺癌20例，鳞癌17例，其它3例，患者平均年龄45～70岁(男26例女14例)，根据临床分期Ⅰ～Ⅱ期22例Ⅲa期18例及组织高分化7例中分化12例低分化21例伴有淋巴转移24例无转移16例，以及个人因素吸烟23例不吸烟17例。排除所有患者在术前未经经放、化疗、激素的应用及其它抗癌治疗。

1.2 诊断依据

NSCLC2014年NCCN指南采用了根据WHO肺癌组织学分类及国际抗癌联盟(UICC)2009年第七版肺癌最新的TNM分期。依据肿瘤大小、附近淋巴结及远处转移的信息进行标准分期。

1.3 实验方法

严格应用IHC-P检测法，将肿物及正常肺组织做石蜡包埋且切片5μm厚，脱蜡、水化、修复等常规操作，最后在光镜下观察。同时用已知组织切片在同条件下染色作为阳性对照，方法严格参照产品说明。

1.4 实验试剂

WISP-2抗体、FGFBP1抗体、化学超敏SP试剂盒、DAB显色剂，均以已知阳性片做阳性对照。(以上试剂均拟够于北京博奥森生物技术有限公司)。

1.5 统计学方法

采用SPSS18.0软件对数据进行χ2检验行显著性分析，校验水准以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

见表1～3。

表1 WISP-2和FGFBP1在40例NSCLC组织中的表达(n=40)

注：在NACLC中WISP-2的阳性表达率明显低于对照组(χ2=4.01，P<0.05),而FGFBP1则相反(χ2=16.24，P<0.05)，差异均具有统计学意义。

表3 WISP-2和FGFBP1在40例NSCLC组织中临床参数之间的关系

注：WISP-2与FGFBP1的阳性表达率在年龄及性别不具有统计学意义(P>0.05)，其他临床参数均具有统计学意义(P<0.05)。

表2 WISP-2和FGFBP1在NSCLC组织中表达的相关性

注：两者表达呈负相关，差异具有统计学意义(χ2=4.95，P<0.05)。

3 讨论

人类肿瘤一般是经过一个多阶段的过程形成的，而这个过程大约需数十年之久。肿瘤的形成首先由正常细胞在外界及自身等因素的刺激下逐渐变异并获得成具有肿瘤特性的细胞，这种独具特性导致了正常细胞增殖失控，最终演变为恶性的肿瘤细胞[1]。肿瘤细胞具有侵入正常组织及远处转移器官的能力，通过自身丰富的血管以获得足够的氧气及营养物质[1]。近年来除肿瘤经典的特征外还发现了一些新的特征[1]，因此，梁珊珊等证实肿瘤的形成是一个复杂的过程，肿瘤细胞所具有的特征性的机制及时序取决于亚型及类型的不同而变化[1]。近年来随着肺癌的发病率逐渐增高，已成为威胁了人类生命健康的最常见的恶性肿瘤[2]，而非小细胞肺癌是肺癌最为常见的肿瘤，它按组织学类型分为腺癌、鳞癌﹑大细胞未分化癌﹑鳞腺癌(较少见)。越来越多的数据显示肺癌的发生发展不仅与外界环境、吸烟等因素相关[3]且重要的是与自身基因因素即原癌基因的过度激活和(或)抑癌基因的失活等有着紧密的关系。

WISP-2又名-2/CCN5，是CCN家族在近年来发现的一个新成员，CCN家族间在基因及蛋白上有着相似的生物学功能即细胞的增殖、分化、迁移及黏附等过程[4]。因WISP-2在基因即核苷酸序列结构上因缺少C′末端的结构模块并且仅含有半胱氨基酸28个，所以可编码多种多样重要的病理生理过程。研究显示WISP-2在人及小鼠的不同组织类型中几乎均有表达，说明WISP-2可能具有多功能的调控作用。且相关研究结果阐明了在某些癌组织中呈低表达，表现为抑癌基因，是肿瘤增殖的负性调节因子[5]。因此在某些肿瘤细胞中WISP-2的表达下调与肿瘤的进展有重要关系，WISP-2的缺失可能是导致肿瘤细胞增长失控的原因[6]。

FGFBP1即FGF-BP，是肿瘤细胞近年研究的热点之一，可作为FGFs(成纤维细胞生长因子)的载体蛋白而发挥其生物学功能且有着密切的关系。刘爱环等证实FGFs在细胞的生理与生物学过程中发挥着重要的功能及在肿瘤的生长过程中也起着特别重要的调节作用[7]，因此此推测FGFBP1的表达与肿瘤的发生发展有着紧密的关系，且相关研究结果阐明了[8]在某些癌组织中呈高表达，具有中致癌基因，是肿瘤增殖的正性调节因子。

本实验应用IHC-P的原理，组织标本采用石蜡切片，以利于染色及对照观察，结果显示：在NSCLC中WISP-2阳性表达率明显低于对照组的阳性表达率 ，而FGFBP1则相反，说明WISP-2呈低表达而FGFBP1则相反。国外学者JiHyangKim[9]等利用DNA芯片研究胆囊癌的差异基因结果证实了差异基因的分类涉及细胞周期蛋白、细胞增殖(FGFBP1)、细胞黏附(WISP-2)等，其中FGFBP1属于上调基因，WISP-2属于下调基因，同时杨智[10]利用PT-PCR及Westernblot对胆囊癌研究证实了两因子表达呈负相关性，符合本实验研究的结果。WISP-2与FGFBP1临床参数的表达中显示WISP-2在高分化的腺癌，临床Ⅰ-Ⅱ期伴有淋巴转移的病例中明显增高，而FGFBP1在低分化的鳞癌，临床Ⅲa期伴有淋巴转移的病例中明显增高，且两者吸烟的阳性表达率明显相反，有相关研究结果显示FGFBP1的表达具有组织特异性，在大多数不同来源的鳞癌细胞株及头颈部的鳞癌患者的组织中均有表达，而在正常成熟的组织中几乎未见表达[11]。而本实验所有结果同时证实了以上相关的研究结果。总而言之，本次实验研究证明了NSCLC中WISP-2呈低表达而FGFBP1则相反，两者呈负相关，且WISP-2与FGFBP1在年龄及性别的阳性表达无相关性而在其他临床参数之间关系密切，提示我们WISP-2与FGFBP1可能能够作为非小细胞肺癌临床诊断及治疗中的新靶点。

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Expressions of WISP-2 and FGFBP1 in non-small cell lung cancer

YANHong-e,QINYue,BAOWen-hua,SUNYun-hui

(Respiratory Department of Internal Medicine, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

Objective: To investigate the expression of WISP-2 1 and FGFBP1 in NSCLC (non-small cell lung cancer); and to analyze the relationship between them and their relationship with NSCLC patients in relevant clinical parameters. Methods: 40 NSCLC patients with heart surgery resection of thoracic operation of the First Affiliated Hospital of Jiamusi University from 2013 December -2014 year in May were selected. The cancer tissue specimens and 5cm away from the tumor tissue specimens of 40 cases were chosen as control group. All patients didn’t apply chemotherapy, hormone and other anti-cancer treatment before operation. Results: ①The positive expression of WISP-2 in non small cell lung cancer rates in 25 cases (62.5%) was significantly lower than that of normal tissues in 33 cases (82.5%). The positive expression of FGFBP1 in non small cell lung cancer rates in 30 cases (75%) was significantly higher than that of the positive expression rate of normal tissues in 12 cases (30%). The Difference between these two groups in positive rate were statistically significant(P<0.05). ②Therewere13casesWISP-2 (+)FGFBP1 (+), 12casesWISP-2 (-)FGFBP1 (+)，13casesWISP-2 (+)FGFBP1 (-), 2casesWISP-2 (-)FGFBP1 (-).Theexpressionsofthetwofactorwerenegativelycorrelated,withsignificantdifference(χ2=4.95,P<0.05). ③WISP-2andFGFBP1hadnostatisticalsignificanceinageandsex(P>0.05).Otherclinicalparameterswerestatisticallysignificant(P<0.05). Conclusion: In NSCLC, the expression of WISP-2 is low, but FGFBP1 is on the contrary. They were negatively correlated. The positive expressions of WISP-2 and FGFBP1 in age and sex were irrelevant, but are closely related among other clinical parameters, which can be used as reference index for clinical diagnosis, also can provide new ideas for clinical treatment.

WISP-2；FGFBP1; non small cell lung cancer

阎红饿(1956～)女，黑龙江佳木斯人，学士，主任医师，硕士研究生导师，主要研究方向：肺癌的分子发病机制。

秦越(1986～)女，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生。E-mail：qinyue0416@163.com。

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1008-0104(2015)02-0099-03

2014-11-18)