CXCL12及CXCR7在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义①

任凤伟，范宗宪

(佳木斯大学附属第一医院耳鼻喉科，黑龙江 佳木斯 154003)

CXCL12及CXCR7在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义①

任凤伟，范宗宪

(佳木斯大学附属第一医院耳鼻喉科，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：探讨趋化因子CXCL12及趋化因子受体CXCR7在鼻内翻性乳头状瘤(NIP)中的表达情况，及其在该病的发生、发展中的意义。方法：采用免疫组织化学染色方法检验44例鼻内翻性乳头状瘤(NIP)，32例慢性肥厚性鼻炎(CHR)及15例鼻鳞状细胞癌(NSCC)组织中趋化因子CXCL12及趋化因子受体CXCR7的表达情况。结果：(1)CXCL12在CHR、NIP、NSCC中表达阳性率分别为6.25%，54.54%，86.67%，呈递增型；(2)CXCR7在CHR、NIP、NSCC中表达阳性率分别为9.38%，52.28%，93.3%，呈递增型；(3)spearman秩相关分析显示两者在鼻内翻性乳头状瘤中的表达呈正相关(rs=0.762,P<0.05)。结论：CXCL12和CXCR7均参与NIP的发生、发展过程,并且二者在NIP的发生、发展过程中起协同作用。

鼻内翻性乳头状瘤；趋化因子CXCL12；趋化因子受体CXCR7；免疫组织化学

鼻内翻性乳头状瘤(NIP)为鼻腔及鼻窦常见的良性肿瘤。术后复发率与其他良性肿瘤比较高，在5%～47%。反复手术易诱发恶变，恶变率为7%[1]。现本病病因及恶变诱因有待明确[2]。近年来，研究发现其发病可能与HPV、EB病毒感染，慢性炎症刺激，过敏反应等有关。根据本病的发生部位，侵及范围选择适当的手术径路及手术方式，并且对有伴随恶性病变者采取放射治疗及化学治疗等综合治疗方法，不仅能够增加治愈比率，而且可有效的降低肿瘤再生[3]。但是否能够长时期控制本病的复发及降低恶变率，还需要不断地进行长期随访和研制出行之有效的药物控制本病的继续发展。趋化因子CXCL12及其受体CXCR7在与多种肿瘤密切相关。本实验采用免疫组织化学方法检验趋化因子CXCL12及其受体CXCR7在实验组(鼻内翻性乳头状瘤)、对照组(慢性肥厚性鼻炎及鼻鳞状细胞癌)组织中的表达情况，并对CXCL12及CXCR7的表达情况进行分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本

实验组：收集佳木斯大学附属第一医院耳鼻咽喉科2010-07～2014-10手术切除的44例鼻内翻性乳头状瘤(NIP)组织。对照组：①收集佳木斯大学附属第一医院耳鼻咽喉科2013-12～2014-09手术切除的32例慢性肥厚性鼻炎下鼻甲黏膜(CHR)组织。②收集佳木斯大学附属医院耳鼻咽喉科2008-06～2014-10手术切除的15例鼻鳞状细胞癌(NSCC)组织。

1.1.2 试剂

主要试剂：兔抗人CXCL12多克隆抗体，兔抗人CXCR7多克隆抗体(以上试剂购自武汉三鹰生物技术有限公司)。即用型免疫组化S-P试剂盒(试剂购自福建迈新生物技术有限公司)等。

1.2 方法

1.2.1 采用SABC免疫组织化学法

用常规石蜡切片做CXCL12和CXCR7 的免疫组织化学方法检测。PBS液代替一抗为阴性对照，同一张切片非染色部位作为阳性部位自身对照。

1.2.2 结果判断

结果判定人员为2名对患者的临床资料不知情的病理科医师，两名医师同时进行光学显微镜观察。对阳性细胞百分数和细胞质染色强度两个方面进行判断。根据阳性肿瘤细胞占总的观察细胞的百分比率分类：0分为≤10% ；1分为11%～50%；2分为51%～75%；3分为>76% 。细胞质染色强度分类：0分为无色；1分为黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色(肿瘤细胞胞质与背景染色相对比 )。二项记分相乘， 0～1 分为阴性，≥2分为阳性，其中 2 分为弱阳性(+)，3～4分为中等阳性()，5～6 分为强阳性()。

1.3 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件包进行处理，对实验结果进行χ2检验和Spearman秩相关分析，以P<0.05作为差异有统计学意义标准。

2 结果

2.1CXCL12在CHR、NIP、NSCC中的表达

CXCL12在组织中的阳性表达为主要在胞质中出现细胞质内出现黄色、棕黄色或棕褐色着色颗粒。在32例CHR组织中2例阳性表达，阳性率6.25%，44例NIP组织中24例阳性表达，阳性率54.54%，15例NSCC组织中13例阳性表达，阳性率86.67%。CXCL12在CHR、NIP、NSCC中的表达两两比较，进行χ2检验后，均有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1～2。

表1 CXCL12在CHR、NIP、NSCC中的表达

图1 CXCL12在鼻内翻性乳头状瘤组织中呈中等阳性表达×200

图2 CXCL12在慢性肥厚性鼻炎组织中部分弱阳性表达×200

2.2CXCR7在CHR、NIP、NSCC中的表达

CXCR7在组织中的阳性表达为主要在胞质出现黄色、棕黄色或棕褐色着色颗粒。在32例CHR组织中3例阳性，阳性率9.38%，44例NIP组织中23例阳性表达，阳性率52.28%，15例NSCC组织中14例阳性表达，阳性率93.3%。CXCR7在CHR、NIP、NSCC中的表达两两比较，进行χ2检验后，均有统计学意义(P<0.05)。见表2、图3～4。

表2 CXCR7在CHR、NIP、NSCC中的表达

图3 CXCR7在鼻腔鳞状细胞癌组织中呈强阳性表达×200

图4 CXCR7在慢性肥厚性鼻炎组织中部分弱阳性表达×200

2.3 在NIP中CXCL12和CXCR7表达的相关性

见表3。CXCL12阳性表达的24例NIP组织中,CXCR7阳性表达20例，在20例CXCL12阴性表达的NIP组织中，CXCR7阴性表达17例，两组表达一致性较高，数据Spearman秩相关分析后，得相关系数rs=0.762，故CXCL12和CXCR7之间的表达呈正相关。

表3 NIP中CXCL12与CXCR7表达相关性

3 讨论

鼻腔和鼻窦乳头状瘤(papilloma)是一种较为常见的来源于上皮组织良性肿瘤，约占全部鼻腔及鼻窦肿瘤的0.5%～4%。本病的临床特征：较易复发，造成周围组织结构破坏，并形成骨质重构，且与鼻腔鳞状细胞癌密切相关[4]。本病发病年龄在6～89岁，以中年男性患者(50～70岁，平均54岁)多见。患者最常以单侧鼻塞就诊，其次以流涕，头痛及鼻出血就诊。少数患者还可以出现嗅觉减退及面部疼痛。本病多累及单侧，极少双侧受累。肿瘤生长部位一般位于鼻腔，以鼻腔外侧壁常见，其次累及上颌窦和筛窦，极少位于额窦，蝶窦和中隔。鼻内翻性乳头状瘤原发部位通常只有一个，多部位来源的极少见。本病治疗主要以早诊断，手术彻底，远期疗效较好[5]。

鼻腔内翻性乳头状瘤虽然属上皮组织来源的良性肿瘤，但因其较其他良性肿瘤复发率高，较易恶变，且生物学特点为侵袭性生长，预后需长期的随访才可以知其生物学转归的特征，故被归于边缘性肿瘤，亦或称之为交界性肿瘤。肿瘤的发生，生长，侵袭，恶变，转移等过程需要多种因素的共同作用。笔者查阅资料发现肿瘤与趋化因子之间的研究呈逐年增多的趋势。趋化因子是能吸引白细胞发生定向运动的化学物质[6]。趋化因子(chemokine)根据其半胱氨酸排列顺序将其分为 4 大类：CXC、CC、C、CX3C，相对应的受体为CXCR、CCR、CR、CX3CR。趋化因子是分泌蛋白家族成员之一，是一类能使细胞产生定向移动的小分子分泌蛋白，可由多种细胞产生。能使参与炎症及免疫反应的白细胞发生趋化作用，定向移动至病变部位。CXCL12又称基质细胞衍生因子1(stromalcell-derivedfactor1，SDF-1) 或前B细胞刺激因子(pre-Bcellstimulatoryfactor，PBSF)，是CXC家族中的一份子。CXCL12与其他趋化因子区别是：趋化因子CXCL12是由基质细胞在无外界炎症等刺激时持续产生并表达。研究显示，趋化因子CXCL12可调节胚胎形成，动员干细胞和促进肿瘤恶性进展。CXCL12广泛地表达于人类多种细胞和组织中,包括免疫细胞、脑、心脏、肾、肝、肺和脾等[7]。其生理功能的发挥需要与相应的配体相结合，2005年以前，人们一直认为，CXCL12只能与受体CXCR4特异性结合，从而发挥生物学效应。但自学者Balabanian等[8]发现CXCL12不仅可以与趋化因子受体CXCR4结合，且可以与CXCR7更为紧密的结合，并发挥生理学作用。

趋化因子受体一般为七次跨膜受体，大多数受体其中一个胞内链偶联G蛋白，介导配体激起的信号级联反应[9]。趋化因子受体CXCR7活化后发挥生物学功能的作用机制与CXCR4不同，并不产生钙离子内流现象，而是通过清除配基发挥作用。这是一种与达菲抗原趋化因子受体(antigenreceptorforchemokine,DARC)、D6 等非典型性趋化因子结合物的作用类似的效应，故被归入“诱骗受体(decoyreceptor)”之列。CXCR7与CXCL12的亲和力比CXCR4与CXCL12亲和力高很多[10]。趋化因子受体CXCR7不仅仅可以与CXCL12相结合，且可以与CXCL11结合，但紧密程度远不及CXCL12[11]。

近年来CXCR7在肿瘤的发生，发展及恶变中的病理生理功能研究逐渐增多。研究显示，在涎腺腺样囊性癌,口腔鳞癌，乳腺癌、肺癌(包括鳞癌与腺癌)、横纹肌肉瘤、宫颈癌、肾癌、食管癌、黑色素瘤原位灶都有CXCR7的高表达[12～14]，上述结果都证实趋化因子受体CXCR7与肿瘤的关系密切，可能参与肿瘤的发生及发展过程。Burns等[11]通过实验证实肿瘤细胞与内皮细胞的黏附能力与CXCR7的表达情况正相关。另外有实验证实CXCR7可促进肿瘤血管的生成。与综合上述研究结果及其他研究成果资料表明CXCR7在肿瘤发生、发展中的作用主要包括以下几个方面：①可能有促进肿瘤细胞的增殖。②抑制肿瘤细胞的死亡的作用。③促进肿瘤组织血管的生成以增加肿瘤组织的血液供应。④增加肿瘤细胞与周围组织的黏附能力。

本实验对收集的44例鼻内翻性乳头状瘤，32例慢性肥厚性鼻炎术中切除的鼻甲黏膜，15例鼻腔鳞状细胞癌组织分别进行免疫组织化学染色，结果发现趋化因子CXCL12在三者中的表达阳性率逐渐增高，受体CXCR7与CXCL12表达趋势高度一致，且在鼻内翻性乳头状瘤中表达呈正相关。实验结果提示：①趋化因子CXCL12及其受体CXCR7均参与鼻内翻性乳头状瘤的发生发展过程。②趋化因子CXCL12及受体CXCR7在鼻内翻性乳头状瘤乳头状瘤向恶性肿瘤(鼻腔鳞状细胞癌)转变中可能起协同作用。故有望将CXCL12/CXCR7生物学轴作为鼻内翻性乳头状瘤治疗的新靶点，临床应用受体抑制剂以减缓鼻内翻性乳头状瘤的生长，减少复发，并抑制其恶变，给鼻内翻性乳头状瘤患者带来福音。

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The expressions of the CXCL12 and the CXCR7 in nasal inverted papilloma

RENFeng-wei，FANZong-xian

(E.N.T.Department, Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China)

Objective: To explore the expression of chemotactic factor CXCL12 and chemokine receptor CXCR7 in nasal inverted papilloma (NIP)and their effect in the occurrence and development of NIP. Methods: The expressions of CXCL12 and CXCR7 in tissue samples of 44 cases of NIP, 32 cases of Chronic hypertrophic rhinitis(CHR) and 15 cases of nasal prickle cell carcinoma (NSCC) were detected by using immunohistochemistry methods.Results:①The expression positive rate of the CXCL12 in CHR,NIP and NSCC is 6.25%，54.54%，86.67%，it’s show an increasing tend step by step.②The expression positive rate of CXCR7 in CHR, NIP and NSCC were 9.38%, 52.28%, 93.3%, which showed an increasing tend.③Spearman rank correlation analysis showed that both expressions in the inverted papilloma of the nasal turn sexual were positively correlated(rs=0.762,P<0.05). Conclusion: The result suggested that the CXCL12 and CXCR7 both participated in the genesia and growth of NIP. They both jointly contributed to the formation of the NIP.

nasal inverted papilloma; chemotactic factor CXCL12; chemokine receptor CXCR7；immunohistochemical

佳木斯大学研究生科技创新项目，编号：LM2014_017。

任凤伟(1986～)女,黑龙江鹤岗人,在读硕士研究生。

范宗宪(1963～)男,黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。E-mail:renfengwei1986@163.com。

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1008-0104(2015)01-0044-03

2014-12-09)