成都市健康体检妇女人乳头状瘤病毒感染及基因亚型分析

刘玉萍，沈太敏，帅 平，陈 军，唐 静(四川省医学科学院·四川省人民医院健康管理中心，四川 成都 610072)

成都市健康体检妇女人乳头状瘤病毒感染及基因亚型分析

刘玉萍，沈太敏，帅 平，陈 军，唐 静
(四川省医学科学院·四川省人民医院健康管理中心，四川 成都 610072)

目的 目的 了解成都市已婚妇女宫颈人乳头状瘤病毒(HPV)感染情况和基因亚型分布。方法 分析2012年10月至2013年9月在我院行健康体检的1482例妇女的HPV感染情况以及亚型和年龄分布情况。结果 1482例宫颈筛查标本中，HPV阳性标本197例(13.29%)。单一型别HPV感染率为11.47%，混合型别HPV感染率为1.82%。197例HPV感染者中共有19种HPV亚型被检出，高危型以52、58为主，其次为16、68型，阳性率分别为21.31%、10.00%和9.13%、6.96%。中国人群常见型CP8304阳性率为11.74%。60岁及以上的妇女HPV及高危型HPV感染阳性率最高，其次为20～29岁年龄组，阳性率最低的为40～49岁年龄组妇女。结论 本地区HPV感染率较高，感染主要亚型是52、58、16型，以单一感染为主，此分布特点对本地区HPV感染、宫颈癌及癌前病变的防治有重要意义。

人乳头状瘤病毒；基因分型；分子流行病学

宫颈癌发病率仅次于乳腺癌，为女性第2位恶性肿瘤，严重危害女性健康，是导致妇女死亡的主要恶性肿瘤之一。目前流行病学、分子生物学、临床资料等众多研究已证实人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染与宫颈癌的发生、发展密切相关，HPV感染是宫颈癌发生的必要条件[1，2]，几乎所有的宫颈癌组织中可以检测到人乳头状瘤病毒[3]。在不同国家和地区，HPV基因分布的流行病学存在差异，了解和弄清这种差异，对于HPV感染的预防与治疗及制定宫颈癌、癌前病变等的预防措施，具有非常重要的意义。本文对成都部分地区妇女HPV感染情况作一调查研究，期望为本地区宫颈癌的防治提供重要的数据资料与参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年10月至2013年9月在我科进行健康体检者1482例，年龄21～77岁，其中年龄20～29岁84例、30～39岁480例、40～49岁657例、50～59岁189例，60岁及以上72例。受检者均为已婚且无宫颈手术史者，由妇科医生严格按照规范操作进行，所有标本采集过程经本人同意。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 取宫颈脱落细胞标本，采用扩阴器充分暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去。将宫颈刷伸入宫颈口处，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针转3～5圈。慢慢抽出宫颈刷，将其放入装有细胞保存液的标本管中。在管口处将多余的刷柄折断，将刷头留在样本管中。旋紧管盖，做好标记。以上标本均于4 ℃保存，1周内测定。

1.2.2 HPV-DNA亚型检测 采用HybriMax医用核酸分子快速杂交基因分型盒(凯普生物科技有限公司)，运用基因扩增技术及导流杂交原理，通过反向点杂交检测扩增产物与包被有型特异性探针膜杂交结果，采用碱性磷酸酶系统定性检测，从而对21种HPV基因型(包括13种高危亚型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型、5种低危亚型6、11、42、43 和44型和3种中国人群常见亚型53、66和CP8304型)进行分型检测。

1.3 统计学方法 应用统计软件包SPSS 13.0对数据进行统计处理。率的比较采用χ2检验。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染率 1482例宫颈筛查标本中，共有197例HPV阳性标本，感染率为13.29%。197例HPV感染者中单一型别HPV感染率为11.47%(170/1482)，混合型别HPV感染率为1.82%(27/1482)，其中2种HPV基因型感染率为1.42%(21/1482)，3种HPV基因型感染率为0.40%(6/1482)。

2.2 HPV各基因亚型分布情况 197例HPV感染者中共检出HPV亚型19种，高危型51和低危型43未被检出。高危型以52、58为主，其次为16、68型，阳性率分别为21.31%、10.00 %和9.13%、6.96%；低危型以11、6型为主，阳性率分别为2.61、2.17%；中国人群常见型CP8304阳性率为11.74%，见表1。

表1 197例阳性样本HPV亚型感染分布情况

2.3 HPV感染年龄分布 年龄≥60岁HPV感染阳性率最高(占23.61%)；其次为20～29岁(占19.05%)；阳性率最低的年龄为40～49岁(10.05%)。各年龄组间比较，差异有统计学意义(χ2=16.022，P= 0.003)。高危型HPV感染阳性率最高的是≥60岁(占18.06%)；其次为20～29岁(占15.48%)；阳性率最低的年龄为40～49岁(占8.07%)。各年龄组间比较，差异有统计学意义(χ2=11.134，P= 0.025)，见表2。

表2 不同年龄段HPV及高危型HPV阳性比较 [n(%)]

3 讨论

HPV属于乳头瘤病毒科的一员，是宫颈癌发生的必要条件，属双链闭环的小DNA病毒，包含约8000个碱基对。其中包括8个早期开放读码框架(E1-E8)、2个晚期读码框架和1个非编码长控区。在早期开放读码框架中，E6和E7基因对细胞生长刺激最为重要，E6、E7编码的E6、E7蛋白分别与抑癌基因p53和Rb结合，引起细胞增殖失控，抑癌基因对DNA的损伤修复功能丧失，导致癌前病变及癌症的发生。而晚期读码框L1和L2基因分别编码HPV的主要和次要衣壳蛋白，组装成HPV的衣壳。至今已发现100余种不同亚型的HPV[4]，根据生物学特征和致癌潜能，HPV被分为高危型和低危型，高危型与癌及癌前病变相关，低危型主要与轻度鳞状上皮损伤和泌尿生殖系统疣相关。高危型HPV包括16、18、31、33、34、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73和82等型别，低危型HPV包括6、11、40、42、43、44、54、61、72、81和89等型别[5]。本文采用的是HybriMax医用核酸分子快速杂交基因分型盒，运用基因扩增技术及导流杂交原理，对21种HPV基因型(包括13种高危亚型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 和68型、5种低危亚型6、11、42、43 和44型和3种中国人群常见亚型53、66 和CP8304型)进行分型检测。

本研究中，该人群HPV感染率为13.29%。HPV在自然人群中的感染率为1.4%～27.3%，一般人群的HPV感染率浮动于10%上下[6]。有研究表明我国北京地区HPV感染率为15.38%，山西省地区HPV感染率为14.8%。与本研究结果基本一致。197例HPV感染者中单一型别HPV感染率为11.47%，混合型别HPV感染率为1.82%。说明本地区已婚女性宫颈细胞中HPV感染以单一型别感染为主，混合型别感染为辅。

在HPV亚型检测中，最常见的基因型为16型[7]。中国地区常见类型为16、52、58等。高危型52、58，在世界其他地区较为少见，而在中国却较为常见，而且HPV52、58的阳性率南方地区较北方高。本研究结果显示，197例HPV感染者中共有19种HPV亚型被检出，高危型51和低危型43未被检出。高危型以52、58为主，其次为16、68型，分别占21.31%、10.00 %和9.13%、6.96%，这与杨光建等研究一致[8]。HPV16型居于52、58型之后，这可能为成都地区特点，也可能与样本的量及选择有关。

研究显示，HPV感染率在年轻妇女呈一高峰[9]。另一观点认为，在年轻妇女与年长妇女有两个HPV感染高峰，在年龄小于25岁的妇女(16.7%)及年龄大于60岁的妇女(23.0%)中，观察到两个HPV感染高峰[10]。与本文研究一致。年龄大于60岁妇女HPV感染增高的原因可能是，随年龄增长体内原有的免疫力逐渐消失或激素水平变化导致潜伏期病毒复活。而20～30岁女性感染概率高，可能是由于青年女性性生活频繁，免疫系统未被致敏，易受HPV感染。本文研究显示，HPV感染阳性率最低的年龄为40～49岁，这可能是因为随着年龄的增高，性生活频率减低，感染概率下降。

HPV感染是全球性的大问题，对女性宫颈癌防治尤为重要。目前有两种HPV疫苗已被美国FDA认证上市：Cervarix疫苗用于预防HPV16和18型感染引起的宫颈癌前病变和宫颈癌；Gardasil疫苗用于预防HPV16、18、11和6型感染引起的生殖器疣、不典型性病变、癌前病变及癌症。HPV基因分布的流行病学在不同国家、不同地区存在差异，HPV感染完整的流行病学资料非常缺乏，因此建立不同地区间HPV基因分布的数据库迫在眉睫。根据这种分布的不同，开发针对性的、有效的HPV疫苗，对于HPV感染的预防与治疗、宫颈癌及癌前病变的预防和治疗均有重要意义。

[1] de Sanjose S，Quint WG，Alemany L，et al.Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer：a retrospective cross-sectional worldwide study[J].Lancet Oncol，2010，11(11)：1048-1056.

[2] Giorqi Rossi P，Chini F，Bisanzi S，et al.Distribution of high andlow risk HPV types by cytological status：a population based studyfrom Italy[J].Infect Agent Cancer，2011，6：2.

[3] Arbyn M，Castellsagué X，de Sanjosé S，et al.Worldwide burden of cervical cancer in 2008[J].Ann Oncol，2011，22(12)：2675-2686.

[4] 耿建祥，王旭波.人乳头瘤病毒检测及其临床应用[M].北京：人民卫生出版社，2009：381-427.

[5] Woods R Sr，O'Regan EM，Kennedy S，et al.Role of human papillomavirus in oropharyngeal squamous cell carcinoma：A review[J].World J Clin Cases，2014，2(6)：172-193.

[6] Wheeler CM，Hunt WC，Cuzick J，et al.A Population-based Study of HPV Genotype Prevalence in the United States：Baseline Measures Prior to Mass HPV Vaccination[J].Int J Cancer，2013，132(1)：198-207.

[7] Ripabelli G，Grasso GM，Del Riccio I，et al.Prevalence and genotype identification of human papillomavirus in women undergoing voluntary cervical cancer screening in Molise，central Italy[J].Cancer Epidemiol，2010，34(2)：162-167.

[8] 杨光建，刘远富，邹晓红，等.成都市龙泉驿区女性宫颈人乳头瘤病毒感染亚型筛查结果分析[J].实用医院临床杂志，2012，9(2)：87-89.

[9] Datta SD，Koutsky LA，Ratelle S，et al.Human papillomavirus infection and cervical cytology in women screened for cervical cancer in the United States，2003-2005[J].Ann Intern Med，2008，148(7)：493-500.

[10]王千秋，齐淑贞.生殖道人乳头瘤病毒感染的流行与防治[J].实用医院临床杂志，2009，6(2)：37-41.

Human papillomavirus infection in uterine cervix and subtype analysis among health examination women in Chengdu

LIUYu-Ping，SHENTai-Min，SHUAIPing，HENJun，TANGJing
(CenterofHealthManagement，SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital，Chengdu610072，China)

SHENTai-Min

Objective To evaluate the prevalence of human papillomavirus(HPV)infection and subtype distribution among health examination women in Chengdu.Methods A total of 1，482 samples were collected from health examination women for HPV subtype analysis between October 2012 and September 2013.The overall HPV prevalence，infectious status of various subtypes and age distribution were compared and analyzed.Results Among the 1，482 women，197 cases were infected with HPV.The overall HPV prevalence was 13.29%.The single HPV infection rate was 11.47%.The multiple infection rates were 1.82%.Among 21 genotypes of HPV，19 genotypes were detected and the main high-risk genotypes were HPV52，58，16 and 68.The highest HPV prevalence rate was found in women at and over 60 years old followed by those aged from 20 to 29.The lowest HPV prevalence rate was found in women aged from 40 to 49.Conclusion The infection rate of HPV was high in Chengdu.The main genotypes were HPV 52，58 and 16，which were primarily in a single infection.The distribution character has an important value in the prevention and treatment of HPV infection，cervical cancer and precancerous lesions.

Human papillomavirus；Genotypes；Molecular epidemiology

四川省卫生厅科研基金资助项目(编号：110204)

沈太敏

R711.3

A

1672-6170(2015)06-0052-03

2015-06-04；

2015-07-09)