采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子RalGDSRas结合结构域的空间结构

黄雪英　雷明　沈阳　张巍　刘艳丽　刘珂　赵浩斌　祁超

摘 要 Ras结合结构域（RBD）是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子（RalGDS）家族成员C端的高保守区，通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC1 screens相关的悬滴法设盘结晶，按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶GluC（w/w）的结晶溶液（2 mol/L （NH4）2SO4， 0.2 mol/L NaAc， 0.1 mol/L HEPES， 5% MPD， pH 7.5）中，晶体3天长成可组装大小。利用X射线晶体衍射技术解析了人RalGDS的Ras结合域（RalGDSRBD）的晶体结构，对比鼠和人RalGDSRBD，主要是Ras结合区的C端不同。人RalGDSRBD通过Glu838和Glu840在RalGDS和Ras蛋白间形成氢键， 而在同一位点，鼠RalGDSRBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人RalGDSRBD结构中含ββαββαβ型三维结构的泛素样构象， 一个单体的C端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构。

关键词 鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子（RalGDS）； Ras结合结构域（RBD）； Ras蛋白endprint