3种中药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

杨庆芳+杨康林+姚静+蒋春茂

摘要：14日龄健康、非免疫罗曼蛋公鸡240羽，随机均分为8组，用鸡新城疫疫苗首次免疫和二次免疫前3 d、当日及后3 d，试验组分别灌胃0.5 mL高、低剂量黄芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板蓝根多糖（IRPS）溶液，空白对照组和免疫对照组灌胃等量生理盐水。各组分别于首免后连续4周随机取鸡10羽称量体质量、测定抗体效价和T淋巴细胞增殖变化。结果表明，3种中药多糖均可促进鸡体质量增加，提高新城疫HI抗体效价，促进外周血T淋巴细胞增殖，其中低剂量的IRPS效果最好。

关键词：黄芪多糖（ASP）;淫羊藿多糖（EPP）;板蓝根多糖（IRPS）;新城疫疫苗;抗体效价;T淋巴细胞

中图分类号： S858.312.4 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）04-0220-02

收稿日期：2015-01-06

基金项目：西藏自然科学基金（编号：ZJ2013018）;江苏农牧科技职业学院“凤凰人才工程”。

作者简介：杨庆芳（1975—），女，山西介休人，硕士，讲师，主要从事动物医学教学及科研工作。E-mail：474861982@qq.com。

通信作者：蒋春茂，教授。E-mail：1836340739@qq.com。

多糖是自然界含量丰富的重要生物大分子之一，与蛋白质、核酸和脂类构成了最基本的4类生命物质[1]，其结构和功能受到了广泛关注，成为继蛋白质和核酸之后探索生命的第三个里程碑[2]。近年来研究发现，中药多糖作为中药的活性成分，其最重要的功能是具有免疫调节活性[3]。本研究从黄芪、淫羊藿和板蓝根3种中药中提取多糖，作为佐剂配合新城疫疫苗免疫雏鸡，测定鸡增重率、血清抗体效价和外周血T淋巴细胞增殖的动态变化，旨在为中药多糖类免疫增强剂开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

黄芪、淫羊藿和板蓝根购于当地医药公司，分别用水提醇沉法提取黄芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板蓝根多糖（IRPS），硫酸-蒽酮法测定多糖含量分别为68.5%，63.8%和53.4%。各多糖按净含量用去离子水稀释为高剂量（H，8 mg/mL）及低剂量（L，4 mg/mL）浓度，常规高压消毒、备用。

1.2 试验动物与分组

选择健康、非免疫1日龄罗曼蛋公鸡240羽，随机分为8组，分别为空白对照组（BC组）、免疫对照组（IC组）及各中药多糖免疫组（ASPH组、ASPL组、EPPH组、EPPL组、IRPSH组和IRPSL组），每组30羽。饲养至14日龄，除BC组用生理盐水滴鼻、点眼外，IC组和中药多糖免疫组均用新城疫Ⅳ苗滴鼻、点眼免疫（2羽份/羽）进行首免，于28日龄时二免。首免和二免前3 d、当日及后3 d，中药多糖免疫组同时分别灌胃高剂量和低剂量ASP、EPP和IRPS，每羽0.5 mL。

1.3 样本采集与项目测定

分别于首免后7、14、21、28 d，每组随机取鸡10羽，称量、记录体质量，计算增重率;分别于免疫后7、14、21、28 d翼下静脉采血0.5 mL，分离血清，用微量血凝抑制法（HI）测定抗体效价[4];心脏采集抗凝血（抗凝剂为柠檬酸钠），采用MTT法[5]，在酶联免疫仪上测定吸光度D570 nm，作为T淋巴细胞增殖指标。

1.4 数据处理

运用SPSS软件对试验数据进行差异性统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同日龄鸡增重率的变化

由表1可见，免疫后7 d时，各组鸡增重率无统计学差异（P>0.05）;免疫后14 d时，各给药组增重率显著高于空白对照组（P<0.05），但与免疫对照组不存在显著差异（P>005），且免疫对照组与空白对照组间也无统计学差异存在（P>0.05）;免疫后21 d和28 d，除ASPH组外，其他各给药组增重率均显著高于免疫对照和空白对照组（P<0.05），但免疫对照和空白对照组无统计学差异存在（P>0.05）。

2.2 不同日龄鸡血清抗体效价的变化

由表2可见，免疫后7 d和14 d时，各免疫组抗体效价无显著差异存在（P>0.05），但均显著高于空白对照组（P<0.05）;免疫后21 d和28 d时，中药多糖免疫组抗体效价均显著高于免疫对照和空白对照组（P<0.05）;其中21 d时，ASPH、ASPL组和IRPSL组抗体效价显著高于其他给药组（P>005）;28 d时，除IRPSH剂量组外，其他各给药组间无统计学差异（P>0.05）。表明，适当浓度的中药多糖可提高疫苗免疫的抗体效价，但以ASPL和IRPSL的免疫增强效果较好。

2.3 不同日龄鸡外周血T淋巴细胞增殖的变化

由表3可见，免疫后7 d，除ASPH和ASPL组外，其他给药组D570 nm值显著高于空白对照组和免疫对照组（P<0.05）;各给药组相比，除ASPH组外，其余各组均无显著差异（P>005）。免疫后14、21、28 d，各给药组D570 nm值均显著高于空

表1 各组鸡免疫后不同日龄增重率变化

组别

首免后不同时间增重率（%）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC组 89.48±3.84a 176.31±4.72b 273.19±4.87b 347.46±5.64b

IC组 87.53±2.56a 185.48±3.92ab 277.38±3.37b 339.52±4.68b

ASPH组 85.62±3.49a 192. 87±4.46a 296.84±4.66a 392.65±5.71abendprint

ASPL组 88.17±3.20a 194.42±3.67a 306.58±4.59a 416.37±4.28a

EPPH组 92.36±4.74a 190.49±3.26a 305.36±4.48a 412.41±5.57a

EPPL组 89.44±3.58a 184.74±3.78a 312.47±5.32a 430.66±5.62a

IRPSH组 86.74±3.72a 196.58±4.83a 310.58±5.67a 405.06±5.27a

IRPSL组 88.46±2.07a 198.26±4.35a 319.46±5.23a 420.37±4.79a

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。表2、表3同。

表2 各组鸡免疫后不同日龄血清HI抗体效价变化

组别

首免后不同时间HI抗体效价（log2）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC组 2.67±0.34c 2.53±0.26c 2.45±0.33d 2.41±0.27d

IC组 3.76±0.47ab 4.67±0.35ab 5.76±0.24c 4.83±0.41c

ASPH组 3.82±0.35ab 4.85±0.33ab 7.35±0.43a 5.66±0.35ab

ASPL组 4.02±0.51a 5.38±0.36a 7.85±0.54a 6.18±0.41a

EPPH组 4.13±0.62a 5.23±0.45a 6.72±0.52b 5.54±0.26ab

EPPL组 4.26±0.57a 4.97±0.29ab 6.92±0.44b 5.73±0.35ab

IRPSH组 3.80±0.45ab 5.28±0.36a 7.26±0.36ab 5.46±0.42b

IRPSL组 3.94±0.31ab 4.75±0.46ab 7.63±0.49a 6.27±0.37a

表3 各组鸡免疫后不同日龄淋巴细胞增殖的动态变化

组别

首免后不同时间吸光度（D570 nm）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC组 0.195±0.022bc 0.196±0.015c 0.187±0.024d 0.214±0.016d

IC组 0.189±0.017bc 0.195±0.014c 0.261±0.021c 0.304±0.021c

ASPH组 0.217±0.025b 0.259±0.016b 0.338±0.035b 0.393±0.024b

ASPL组 0.224±0.019ab 0.281±0.017ab 0.386±0.041a 0.445±0.048a

EPPH组 0.235±0.037a 0.274±0.026b 0.352±0.046ab 0.412±0.036ab

EPPL组 0.267±0.029a 0.326±0.014a 0.389±0.029a 0.427±0.031a

IRPSH组 0.237±0.033a 0.277±0.028b 0.361±0.027ab 0.419±0.023ab

IRPSL组 0.257±0.048a 0.318±0.027a 0.415±0.026a 0.452±0.046a

白对照组和免疫对照组（P<0.05）;各给药组相比，免疫后 14 d 时各低剂量组间无显著差异，各高剂量组及ASPL间也无显著差异（P>0.05）;免疫后21 d和28 d时，除ASPH组外，各给药组间无统计学差异（P>0.05）。

3 讨论

许多研究表明，中药多糖具有促生长作用。王学斌等研究表明，APS粉剂和APS注射液具有促进雏鸡生长的作用[6]。梁英等研究也表明，饲粮中添加适量的黄芩多糖，可提高肉仔鸡的生长性能[7]。本试验结果表明，除ASPH组外，其他各给药组鸡增重率显著增加。可能较高剂量的ASP与脂肪络合抑制脂肪吸收，进而降低了鸡的生长性能[8]。

血清抗体效价反映机体B淋巴细胞介导的特异性体液免疫应答。抗体效价越高，鸡对抗病毒的能力增强，鸡群抗感染能力也越强[9]。本试验结果表明，适量的中药多糖能显著增强雏鸡的体液免疫，提高ND疫苗特异性抗体效价，增强鸡抗ND感染的能力，该结果与邱妍等[10]和Wang等[11]的研究结果一致。

T淋巴细胞是机体免疫调节枢纽，其增殖反映机体细胞免疫水平[12]。T细胞的免疫活性与机体抗病毒能力相关，当T细胞活性功能降低时，各种细胞因子（如白介素、干扰素及肿瘤因子等）生成减少，且T辅助性淋巴细胞辅助B细胞抗体生成作用受到影响[13]。本试验结果表明，3种中药多糖均可促进T淋巴细胞增殖，并呈现一定的量效和时效关系，表明适量的中药多糖能促进T淋巴细胞增殖。

本试验以已经应用于动物生产中的黄芪多糖为参照，观察了EPP和IRPS的免疫增强作用，结果表明，中药多糖的促生长和免疫调节作用呈现一定的量效关系，低剂量IRPS的促增重和免疫增强作用最好，高剂量IRPS和EPP也具有一定的促增重和免疫增强作用。因此，在应用和开发中药多糖时，需进行进一步的有效剂量筛选。

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