小型种猪场伪狂犬病的净化

党晓鹏，宁明正

(1.陕西金冠牧业有限公司，陕西西安710018；2.陕西省蒲城县龙阳畜牧兽医站，陕西蒲城715507)

某农户小型种猪场疑似感染伪狂犬病病毒，为了检测出野毒感染猪，净化伪狂犬病，提高猪群健康水平，采用PRV gE抗体ELISA检测试剂盒，对该场免疫了猪伪狂犬病基因缺失疫苗的猪群进行5次野毒感染检测；同时应用实时荧光PCR检测试剂盒，对有临床症状的新生仔猪进行PRV病原检测。经过连续监测、综合防控并适时淘汰，该猪场的PRV野毒感染率降为1.72%，发病仔猪伪狂犬病毒野毒阳性率均降为零。猪场新生仔猪成活率提高，猪群基本无PRV感染，净化效果良好。

猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一种急性传染病，我国将其列为二类传染病。该病在猪群中呈暴发性流行，母猪和种公猪临床主要表现为繁殖障碍，新生仔猪多伴有神经症状，感染率可高达100%；育肥猪感染后表现为慢性症状，或呈隐性感染。康复病猪长期带毒排毒，成为本病的主要传染源，猪群整体生产性能低下，妊娠母猪以流产、木乃伊、死胎、弱仔增多等为主要症状。

农户小型种猪场 （基础母猪100头左右）在猪病净化方面难度较大，猪场卫生隔离消毒防疫等设施较差，种猪来源复杂多样，猪瘟（HC）、猪Ⅱ型圆环病毒 （PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪传染性胸膜肺炎（APP）、副猪嗜血杆菌病（HPS）等混合感染普遍，感染猪及带毒猪淘汰措施难以执行等。但针对猪伪狂犬病的净化条件目前已基本具备，一是有商品化基因缺失疫苗免疫接种，二是有可区分疫苗免疫抗体与野毒感染抗体的PRV gE抗体ELISA试剂盒和检测PRV病原的实时荧光PCR检测试剂盒，在此基础上结合消毒隔离等生物安全措施，逐步淘汰阳性感染猪，引入阴性种猪，在2～3年的时间里完全可以将猪伪狂犬病彻底净化。国内许多大型规模化种猪场已经据此方法完成了伪狂犬病的控制与净化，成功地清除了伪狂犬病。本试验用PRV gE抗体ELISA检测试剂盒，对猪场的伪狂犬病野毒感染情况进行抽样检测，应用实时荧光PCR检测试剂盒，对表现有临床症状的仔猪进行实时荧光PRV病原检测。然后根据抗体和病原检测结果制定切实可行的净化方案。

通过科学严格的疫苗接种，连续对猪群进行5次抽样检测，包括PRV gE抗体和疑似病仔猪病原检测，隔离饲养乃至淘汰阳性猪，加强饲养管理卫生消毒等技术措施，使得该猪场的PRV野毒感染率由45.45%逐步降低至1.72%，发病仔猪伪狂犬病野毒阳性率由48.28%降至0%，基本净化了伪狂犬病。

1 材料与方法

1.1 试验材料

陕西蒲城某种猪场。存栏种公猪7头，能繁母猪135头。年出售商品仔猪近2000头。将猪群分组：哺乳仔猪、保育猪、中大猪、后备母猪、空怀母猪、妊娠母猪及种公猪。种公猪逐只采样，其他每组分别抽样20%。

1.2 基因缺失疫苗

采用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗(gE、TK基因缺失)。

1.3 检测试剂盒

伪狂犬病gE缺失ELISA诊断试剂盒，购自武汉科前公司；猪伪狂犬病病毒(gE基因)实时荧光PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨公司。

1.4 PRV

gE抗体检测在2014年的3月、6月、9月、12月和2015年3月各采集血样1次，按照PRV gE抗体检测试剂盒说明书要求检测 PRV野毒感染抗体。

结果判定：在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立条件是阴性对照孔平均OD630nm值与阳性对照孔平均OD630nm值之差≥0.4。

S=样品孔OD630nm值，N=阴性对照孔平均OD630nm值。

若S/N比值≤0.6，样品判为PRV抗体阳性。

若S/N比值≤0.7但＞0.6,该样品必须重测，如果结果相同，则过一段时间后重新采集血样进行检测。

若S/N比值＞0.7,样品判为PRV抗体阴性。

1.5 PRV核酸检测

对疑似PR发病仔猪剖检，采集淋巴结组织，处理后用猪伪狂犬病病毒(gE基因)实时荧光PCR检测试剂盒进行病原检测，操作方法按照试剂盒说明书进行。

结果判断：被检样品ct值≤30并出现特定的扩增曲线为PRV野毒阳性，被检样品30＜Ct＜37并出现特定的扩增曲线，需要重新取样提取DNA，扩增后进行结果判定，如仍为可疑，则判定为阳性；被检样品ct值＞37时，判定为阴性；对于某些未呈现S型曲线，但本底值较高的样品，判为阴性。

1.6 免疫程序

2014年3月以来，选用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗(gE、TK基因缺失)进行全群免疫。仔猪3日龄滴鼻免疫，8周龄再肌注免疫1次；种公母猪每3个月免1次，后备母猪配种前免疫2次。

1.7 综合防控措施

加强猪场管理，严格门禁制度，人员车辆出入猪场必须严格消毒。对猪舍饲养设施设备、猪场内外环境进行定期消毒。所有死亡猪只，流产胎儿及死胎等，进行焚烧深埋等无害化处理。加强猪场的环境卫生和灭鼠、灭蚊工作，禁止在猪场饲养其他动物。根据免疫监测情况对阳性猪只进行隔离饲养或淘汰。由于初期猪群阳性率较高，猪场老板从经济角度考虑不同意一次性淘汰过多，而是先淘汰发病猪，带毒猪继续监测观察；后期阳性率较低时清除阳性猪。 坚持自繁自养，健康猪与带毒猪严格隔离饲养。选用优质配合饲料，饮水清洁卫生，粪尿污物及时清洗，圈舍定期消毒。

2 结果

2.1 PRV

gE抗体检测结果见表1。猪群gE野毒抗体的阳性率由首次检测的45.45%降至第5次检测的1.72%，说明猪群伪狂犬病野毒抗体逐步降低，净化初步成功。最后一头阳性带毒猪建议猪场尽快淘汰，半年后应再复查一次。

表1 PRV gE野毒抗体检测结果

2.2 PRV核酸检测结果见表2

表2 PR病毒核酸检测结果

在净化之初，对有临床症状的仔猪进行PRV野毒实时荧光PCR检测，结果表明猪场新生仔猪及保育猪群呈现感染状态，阳性率达48.28%。采取净化方案后，猪群健康状况趋于良好。第2次检测时，发病仔猪群伪狂犬病野毒阳性率已降至27.78%；到2015年3月，仔猪群抽样结果显示阳性率已经为0%，且再无新的伪狂犬病仔猪出现。

3 讨论

我国预防猪伪狂犬病主要采取免疫接种的方式，首选疫苗为猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗。伪狂犬病gE抗体ELISA检测试剂盒能区分伪狂犬病野毒和疫苗毒所产生的抗体，通过检测可判断猪只是否感染伪狂犬病野毒。猪伪狂犬病病毒(gE基因)实时荧光PCR检测试剂盒可对病料进行病原检测。通过五次连续监测结果表明，农户小型种猪场在实施科学免疫接种的基础上，结合抗体和病原检测，严格隔离、淘汰、净化，完全能够清除野毒感染,使种猪场成为伪狂犬病阴性猪场。