高效液相检测注射用甲硫氨酸维B1杂质的方法建立

刘红

哈药集团生物工程有限公司

高效液相检测注射用甲硫氨酸维B1杂质的方法建立

刘红

哈药集团生物工程有限公司

目的：采用高效液相色谱法建立注射用甲硫氨酸维B1杂质的检查方法。方法：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.005mol/L庚烷磺酸钠，磷酸调节pH值至2.8）-甲醇（85：15）；检测波长为201nm；流速为1.0ml/ min。结果：本方法专属性试验、最小检测限试验、耐用性试验均符合方法学试验要求。结论：该测定方法操作简便、准确度高、可靠、操作性强，可作为注射用甲硫氨酸维B1的有关物质的测定，以控制其质量。

高效液相色谱法；甲硫氨酸；维B1；杂质

甲硫氨酸维B1属肝病辅助用药，主要用于改善肝脏机能，对多数肝脏疾病，包括急慢性肝炎、肝硬化以及脂肪肝有一定疗效；也可用于肝内胆汁郁积，酒精、巴比妥类、磺胺类药物中毒时的辅助治疗等。本文采用HPLC法对其可能产生的有关物质进行分离测定，该方法可作为注射用甲硫氨酸维B1的有关物质测定方法，其方法国内尚未见相关报道。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；MS105型精密电子天平（梅特勒）；注射用甲硫氨酸维B1（规格：甲硫氨酸100mg与维生素B1 10mg。自制，批号：20141001、20141002、20141003)；甲醇、磷酸为色谱纯，磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠均为分析纯，水为注射用水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Dikma C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.005mol/L庚烷磺酸钠，磷酸调节pH值至2.8）-甲醇（85：15）；流速：1.0ml/min；柱温25℃；检测波长：201nm；进样量：20μl。

2.2 检查方法

取本品适量，精密称定，约相当于甲硫氨酸50mg，置50ml量瓶中，加水约30ml，超声振摇使溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度。作为对照溶液。分别精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品溶液色谱图中除辅料峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）；杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%）。

2.3 专属性试验及吸收波长的确定

照2.2检查方法中供试品溶液配制方法，制得供试品溶液。另取本品处方制剂的空白辅料适量，按上述方法制备成空白辅料溶液。

酸破坏溶液：取本品，加水适量使其溶解，再加入0.1mol/L盐酸溶液1ml，室温放置120min后，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，按上述方法稀释制备成酸破坏溶液。同时不加本品制成空白酸破坏溶液。碱破坏溶液：取本品，加水适量使其溶解，再加入0.1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置120min后，用0.1mol/L盐酸溶液中和至中性，按上述方法稀释制备成碱破坏溶液。同时不加本品制成空白碱破坏溶液。氧化破坏溶液：取本品，加水适量使其溶解，再加入0.5%过氧化氢溶液1ml，室温放置30min后，按上述方法稀释制备成氧化破坏溶液。同时不加本品制成氧化破坏溶液。高温破坏溶液：取本品，置于100℃条件加热3天后，按上述方法稀释制备成高温破坏溶液。光照破坏溶液：取本品，置于4500± 500lx光照条件下照射15天后，按上述方法稀释制备成光照破坏溶液。

取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。同时用二极管阵列检测器在200nm～400nm波长范围内扫描。

结果表明：本有关物质检查方法条件下，空白辅料溶液不干扰主峰及杂质峰的检出。能够有效检出各破坏性试验溶液中产生的降解产物。且降解产物峰均能与主成分峰达到基线分离，表明本方法对相关降解产物检查的专属性较好。通过二极管阵列检测器扫描，本品有关物质检查波长确定为201nm。

2.4 最小检测限考察

取本品适量，照2.2检查方法中供试品溶液配制方法，制得供试品溶液，并进行梯度稀释，按检查方法色谱条件进行检查。结果表明，当信噪比约3：1时，该检查方法最小检测限为12ng。

2.5 耐用性试验

取本品适量，按检查方法色谱条件，分别变动条件为流速± 0.2ml/min，柱温±5℃，考察各变动条件下有关物质检查结果变化情况。

结果表明：有关物质检查结果均无明显变化，该有关物质检查方法耐用性良好。

2.6 溶液稳定性试验

取同一批样品，照2.2检查方法中供试品溶液配制方法，制得供试品溶液。参照检查方法色谱条件测定，分别于0,1,2,4,8h，取20μl进样，记录色谱图。结果甲硫氨酸和维生素B1的峰面积基本不变，杂质情况无明显变化。表明该检测溶液在8h内稳定性良好。

2.7 有关物质检查

取本品，按“2.1”、“2.2”项下方法制备溶液并进行检查。结果三批供试品有关物质检查结果见下表

由上表可知，三批供试品中有关物质均符合规定。

3.讨论

综上所述，本检查方法是检查注射用甲硫氨酸维B1杂质的一个准确、可靠、操作性强的方法，对于该品种的杂质控制及产品稳定性研究有一定的参考意义。

[1]甲硫氨酸质量标准.中国药典2010年版二部[S].157.

[2]纪宇,刁勇,王晨霞.高效液相色谱法测定甲硫氨酸维B1注射液的含量[J].中国生化药品杂志,2005,26(4)：228-229.

[3]黄榕珍.高效液相色谱法测定甲硫氨酸维B1注射液中甲硫氨酸和维生素B1的含量[J].海峡药学，2005,17(5)：42-45.

刘红（1978-），女，黑龙江哈尔滨市，本科，哈药集团生物工程有限公司，质量检测中心，化验员，工程师。