HPLC测定苗药半截烂中芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的含量△

2015-06-06胡志平

中国民族医药杂志 2015年3期

胡志平杜江

(贵阳中医学院药学院，贵州贵阳 550002)

半截烂(Arisaema rhizomatum C.E.C.Fisch)为天南星科天南星属多年生草本，根茎入药。有大毒，辛、温，解毒止痛、祛风除湿。苗族民间多用于风湿疼痛、肢体麻木、跌打损伤、无名肿毒、劳伤疼痛、结核性溃疡、痈疽疔毒初期等症，并将其列为以毒攻毒的“攻毒药”范畴。在苗医著名的“弩药”处方中半截烂也是常见的主要药物之一[1]。近年研究发现，半截烂在镇静、镇痛、抗惊厥、抗肿瘤、抗炎、抗心律失常方面均有明显疗效，但因其有毒且活性部位或成分不明确，严重制约了半截烂的开发应用，由于半截烂被苗族和土家族广泛的用于治疗风湿和类风湿病且疗效确切，因此近年来半截烂在防治风湿和类风湿关节炎等方面的活性受到越来越多的重视，所以对半截烂进行质量及活性方面的研究具有重要的意义[2]。目前的研究提示，半截烂中所含的黄酮类成分可能与其活性紧密相关[3]，而其中的芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷具有抗肿瘤和抗氧化等活性。故选择芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷作为指标性成分进行含量测定。

本课题组对半截烂有效物质成分进行了较为深入的研究，并从中首次分离出17个单体化合物。我们选择其中的芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷作为半截烂中的指标成分进行质量研究，采用HPLC法建立其含量测定方法[4]，为其今后的开发利用打下良好的基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器:Agilent1100系列高效液相色谱仪(自动进样器，紫外检测器，四元泵:美国，安捷伦公司)，梅特勒－托利多New classic型电子天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司)，KQ5200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药:乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂开发中心)，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷对照品由购于西南麦克斯药品纯度大于98%。

半截烂药材采自贵阳近郊，经贵阳中医学院孙庆文副教授鉴定为天南星科天南星属半截烂(Arisaema rhizomatum C.E.C.Fisch)的干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:色谱柱 phenomenex－C18(4.6×150mm，5μm)流动相为乙腈－0.05%磷酸(20:80);检测波长为350nm;流速 1.0mL/min;柱温 35℃;进样量 20μL;分离度大于 1.5。

2.2 对照品溶液的制备:取芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷对照品适量，精密称定，置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品浓度为0.02mg/mL。

图1 对照品溶液

2.3 供试品溶液的制备:取半截烂生药约1.0004g精密称定重量，用甲醇10mL，超声提取2次，30min/次，放冷，滤过，合并滤液。蒸干，用甲醇定容至1mL，过0.45ul的微孔滤膜即得供试品。

图2 供试品溶液

2.4 线性关系实验:精密吸取对照品溶液1ul，2ul，3ul，5ul，7ul，分别进样，于350nm处测定芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的峰面积。以进样量(μg)为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)计算回归方程，芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的回归方程为Y=3058927.58X+61.97，结果表明芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷在0.2～0.14μg范围内线性关系良好。