静脉注射人参皂苷Rb1在小鼠心脏组织分布

郝成欣

摘 要：该文采用静脉注射给药途径，研究人参皂苷Rb1在小鼠心脏组织的分布。用等体积的水饱与正丁醇萃取小鼠心脏组织匀浆液，在经过减压干燥之后使用甲醇进行溶解，采用高效液相色谱法，测得预处理的心脏样品中的人参皂苷Rb1在心脏组织分布广泛，滞留时间长，5 min达吸收高峰。720 min后逐渐自体内消除，对其发挥抗心肌缺血再灌注损伤，减弱血管内膜增生程度等药效提供参考理论依据。

关键词：静脉注射 人参皂苷Rb1 心脏组织分布 高效液相色谱

中图分类号：R7 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2015）02（c）-0252-02

人参皂苷Rb1是二醇系皂苷，其含量较为丰富，多年来学者们致力于研究其药理作用，作用显著且广泛。此外，人参皂苷Rb1具有抗心肌缺血再灌注损伤，减弱血管内膜增生程度，促智，脑缺血损伤保护，神经损伤保护，抗肝脏热缺血再灌注损伤，抗肿瘤，性功能促进等多种药理活性[1-7]。

近年来，对静脉注射人参皂苷Rb1在小鼠体内药物代谢动力学研究文献较少[8]。杨柳等[9]进行人参皂苷Rb1在大鼠尿中排泄的研究采用的是高效液相色谱-飞行时间串联质谱。而Tsutomu Odani，Hisayuki Tanizawa，and Yoshio Takino（均為日该研究者）通过采用薄层色谱法监测了人参皂苷Rb1经静脉注射以及口服两种途径在大鼠体内的分布，发现其胃肠道吸收率低。

该文将预处理后的小鼠心脏采用HPLC法测定其分布[10]，具有分离效能好，分析速度快，灵敏度及特异性高的优点，对人参皂苷Rb1发挥抗心肌缺血再灌注损伤等药理作用提供参考依据，具有广阔的前景。

1 资料与设备

1.1 试剂与药品

甲醇，乙腈是由TEDIA COMPANY.INC公司生产的色谱纯试剂；甲醇（分析纯）为重庆沃裕科技有限公司提供；人参皂苷Rb1对照品（纯度：98%）由上海经科化学科技有限公司提供。

1.2 仪器

SHZ-D（Ш）循环水式真空泵，Hettich Vniversal 16R低温冷冻离心机，旋转蒸发仪，Agilent 1100型分析-半制备液相，FA1204B电子分析天平。

1.3 动物

健康小鼠，体重35～40 g，吉林省白城市省所提供。

2 实验方法

2.1 色谱条件

CenturySILBDSC18柱，50 mm×2.1 mmI.D.，5 ?m粒径；流动相：乙腈：水（28：72）；流速：1.00 mL/min；检测波长：205 nm；柱温：室温。

2.2 给药方案与样品采集

选取健康小鼠18只，小鼠体重为35～40g，在做实验之前并未使用任何药物。选用普通的饲料进行喂养，同时，饮食和饮水自由。在吉林省白城市白城医学高等专科学校药理实验室进行动物临床实验。注射用浓度为6 mg/mL的人参皂苷Rbl溶液，给药以8 mg/kg的剂量静脉注射，与给药前﹙0 min﹚与给药后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min，每次3只，处死动物，解剖心脏，组织浮血使用0.9%生理盐水冲去，并用滤纸将吸其干，最后保存在–40 ℃冰箱。

2.3 样品预处理

心脏组织匀浆和其处理方法如下。

先对心脏组织称重，然后剪碎、研磨，按1 mL/200 mg组织重量用Gilson移液器加入生理盐水匀浆。用等体积的水饱和正丁醇取匀浆液，萃取3次（水饱和正丁醇配置方法为正丁醇∶水=5：1混合），萃取液经85 ℃减压干燥之后使用1 mL甲醇进行溶解，稀释2～5倍后通过0.22 ?m微孔滤膜后进行HPLC检测。

3 实验结果

3.1 色谱条件确定

首先对于人参皂苷Rb1标准品，精密称取1.00 mg，使用甲醇定容1 μL，此时浓度为100?g，然后经甲醇稀释，使其浓度变为50?g，取该标准溶液20 mL通过0.22?m微孔滤膜，通过改变HPLC中流动相乙腈：水的比率对标准品适宜的出峰时间进行控制，从而最终确定色谱条件。该研究是采用HPLC的流动相∶乙腈∶水（28∶72）；流速∶1.00 mL/min；检测波长∶205 nm。这里，人参皂苷Rb1标准品出峰时间是18.59 min，高度为2.1 mAU。（见表1）

3.2 对小鼠空白（0 min）心脏行HPLC检测

研究发现，心脏组织中的成分分离都是在4.9 min以内，人参皂苷Rb1受到的干扰较小。（见表2）

3.3 将小鼠给药后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min的心脏组织样品进行HPLC检测

每个时间点取小鼠3只，静脉注射人参皂苷Rb1后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min按2.2的方法对小鼠的心脏组织做处理，各取样20 ?mL过0.22 ?m微孔滤膜后进行HPLC检测。将小鼠心脏组织中人参皂苷Rb1检测曲线绘制成对比图。最高为5 min心脏组织，此时吸收高度是6.1 mAU，曲线随时间推移，骤然下降，30 min吸收高度为3.2 mAU。60 min、120 min、240min吸收高度分别为3.1 mAU、2.8 mAU、2.7 mAU。720 min后，曲线明显下降，吸收高度为1.1 mAU（见图1）。

3.4 讨论

该研究对小鼠静脉注射人参皂苷Rb1，由实验得心脏组织样品检测曲线图易知，在静脉注射后的6个时间点，人参皂苷Rb1都有分离，5 min即达到高峰，之后明显下降，30 min、60 min、120 min、240 min曲线基本保持水平状态，720 min后已明显下降，逐渐从体内消除。其心脏组织药物浓度特点如下。

5 min心脏组织中Rb1浓度>30 min心脏组织中Rb1浓度>60 min心脏组织中Rb1浓度>120 min心脏组织中Rb1浓度〉240 min心脏组织中Rb1浓度>720 min心脏组织中Rb1浓度。

人参皂苷Rb1标准曲线是根据实验确定的色谱条件制定的，其出峰时间约18.50 min左右，对小鼠静脉注射人参皂苷Rb15 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min后处理的心脏组织样品进行HPLC检测，其在18 min左右也得到分离，对照标准曲线，表明该药物在心臟组织中分布广泛。

根据小鼠心脏组织中人参皂苷Rb1检测曲线，小鼠静脉注射后，药物在心脏组织中分布迅速，浓度高，滞留时间比较长，对人参皂苷Rb1抗心肌缺血再灌注损伤、心肌细胞损伤保护、减弱血管内膜增生程度等药效学研究提供参考理论依据，具有重要的意义。

参考文献

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