红景天苷在急性坏死性胰腺炎缺血病理过程中的作用研究

李杰清，牛桂芬，孙健波

红景天苷在急性坏死性胰腺炎缺血病理过程中的作用研究

李杰清，牛桂芬，孙健波

目的 通过观察大鼠胰腺缺血模型中红景天苷的作用，探讨红景天苷对胰腺炎缺血改变的机制。方法 200只Wistar大鼠随机分为3组，假手术组(50只)、对照组(75只)及试验组(75只)，通过血管阻断方法建立胰腺缺血模型。假手术组行开腹关腹手术,对照组建立大鼠胰腺急性缺血模型，试验组建立缺血模型后给予静脉注射红景天苷。检测各组血淀粉酶、血栓烷素B2(TXB2)、白细胞介素8(IL-8)的水平。结果 大鼠缺血模型建成后，试验组4 h血淀粉酶水平开始下降，在8 h及12 h时点与对照组对比，差异有统计学意义(P<0.05)；在8 h及12 h时点，试验组TXB2水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组12 h内TXB2水平呈现持续升高趋势，试验组4 h后TXB2呈现下降趋势，与对照组对比，在12 h时点差异有统计学意义；对照组12 h内IL-8水平持续升高，试验组在12 h时点开始下降，与对照组对比，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 中药红景天苷对大鼠ANP缺血损伤有明显改善作用，能够降低炎性因子及胰酶水平。

红景天苷；急性坏死性胰腺炎；血栓烷素B2；白细胞介素8

0 引言

急性坏死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis,ANP) 发病凶险，病情进展迅速，其发病病理学基础是胰酶在胰腺内激活后诱发胰腺组织的自身消化，导致水肿、出血及坏死等炎症反应[1]。由于ANP过程中炎症因子的释放，导致患者心脏、肺、肾脏等多器官的损害，死亡率可达20%～25%[2-3]。对ANP发病机制及治疗研究的焦点集中在改善缺血胰腺血运及毒素清除方面。红景天苷提取自红景天根茎，具有抗氧化、改善微血管循环、提高氧自由基活性等药理作用[4]，临床目前应用于心脑血管病及肿瘤治疗方面，在胰腺炎中的研究较少，但有研究报道红景天对急性重症胰腺炎肾损伤中具有保护作用。本研究采用动物试验，建立大鼠急性重症胰腺炎模型，观察红景天苷在改善胰腺血运、降低胰酶活化物水平的相关作用，探讨其机制，并指导临床用药。

1 材料和方法

1.1 仪器及试剂 超微量分光光度计(NanoPhotometer Pearl)(德国Implen)、125I-血栓烷素B2(TXB2)放射免疫分析试剂盒购自南京凯基生物公司、125I-白细胞介素8放射免疫分析试剂盒购自美国Sigma公司。红景天苷采用微波破壁法自高山红景天根茎提取(中国医科大学药理学实验室提供)。

1.2 研究方法

1.2.1 试验分组 雄性Wistar大鼠(购自中国医科大学实验动物中心)200只，体重(243.2±7.4)g，随机分为3组，假手术组(50只)、对照组(75只)及试验组(75只)。假手术组行开腹手术，显露胰腺及腹主动脉，对照组及试验组通过血管阻断方法建立胰腺缺血模型。

1.2.2 大鼠胰腺缺血模型的建立 麻醉采用乙醚吸入，麻醉成功后取腹部正中切口开腹，显露胰腺及腹主动脉，血管夹完全阻断腹腔干起始处，阻断时间为10 min，胰腺出现充血、水肿、出血及坏死等改变后打开血管夹，即建成大鼠胰腺缺血模型[4]。

1.2.3 研究方法 缺血模型建立成功45 min后给予试验组大鼠静脉注射中药红景天苷4.5 mg/kg，对照组及假手术组分别静脉给予生理盐水4.5 mg/kg，各组在恢复胰腺血运0、2、4、8、12 h各时点采用断颈法分批处死大鼠,采静脉血测血淀粉酶、TXB2、IL-8水平。

1.3 观察指标及测定方法

1.3.1 血清淀粉酶的测定 取静脉血2 mL，应用超微量分光光度计，采用淀粉酶快速比色法测血清淀粉酶含量。

1.3.2 血浆TXB2及IL-8测定 取静脉血2 mL，加消炎痛-EDTA-Na2液0.1 mL，4 ℃离心分离血浆，采用放射免疫分析方法测血浆TXB2及IL-8水平。

2 结果

2.1 大鼠血淀粉酶的变化 大鼠缺血模型建成后，血清中淀粉酶含量开始升高，0 h及2 h时点三组间淀粉酶水平比较差异无统计学意义(P>0.05);在2～4 h对照组血淀粉酶水平继续升高，4 h达到高峰，与试验组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；试验组4 h血淀粉酶水平开始下降，在8 h及12 h时点与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组不同时点血淀粉酶比较(U/L)

注：*与对照组比较，P<0.01

2.2 血浆TXB2含量的变化 与假手术组比较，建模2 h后，对照组及试验组血浆中TXB2的含量均显著增高，差异有统计学意义(P<0.01)，0 h、2 h及4 h时点对照组TXB2水平与试验组比较差异无统计学意义(P>0.05)；在8 h及12 h时点，试验组TXB2水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组12 h内TXB2水平呈现持续升高趋势，试验组4 h后TXB2呈现下降趋势，见表2。

表2 不同时间各组TXB2值比较(pg/mL)

注：*与对照组比较，P<0.05

2.3 血浆IL-8含量的变化 在0、2、4、8 h各时点，对照组及试验组血浆IL-8与假手术组比较，均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组与试验组比较，在12 h时点差异有统计学意义，试验组低于对照组。对照组12 h内IL-8水平持续升高，试验组在12 h时点开始下降，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 再灌注不同时间各组IL-8比较(pg/mL)

注：*与对照组比较，P<0.05

3 讨论

ANP病程进展迅速，病死率高，有研究认为，微循环障碍及毛细血管通透性改变在ANP发病过程中起到重要作用[5]，其病理过程的后果是胰腺自身消化，胰酶及炎性因子释放，导致全身炎症反应的一系列综合征[6-8]。血淀粉酶是诊断胰腺炎的最主要指标，血淀粉酶升高是由于主胰管阻塞或微胰管阻塞反流入血，微血管灌注障碍也是血淀粉酶升高的主要原因[9]。血淀粉酶入血后导致全身炎症反应及胰腺自身消化破坏，进而诱发环氧化酶通过TXA2和PGI2合成酶激活TXA2、PGI2大量释放[10]。TXA2激活后导致血管痉挛加重，微小血栓形成加速，导致胰腺进入充血坏死阶段。红景天苷(Salidroside)是中医临床上的常用中药，具有活血祛疲，通经止痛的功效。近年来，国内外学者对中药红景天苷在心、肝、肺、脑等多种组织器官的缺血再灌注损伤中的作用做了大量的研究[11-12]。但对于红景天能否减轻急性胰腺炎肾脏的缺血损伤尚无文献报道。本研究显示，大鼠缺血模型建成后，血清中淀粉酶含量开始升高，2 h之内三组间淀粉酶水平比较差异无统计学意义，在2 h后，胰腺炎模型组血淀粉酶水平继续升高，4 h达到高峰，而应用红景天苷组4 h血淀粉酶水平开始下降，在8 h及12 h时血淀粉酶明显低于未干预组，未干预组血淀粉酶仍在持续升高，给予红景天苷后试验组血淀粉酶下降明显，在急性发作期有明显的改善胰腺微循环作用。建模2 h后，对照组及试验组血浆中TXB2的含量均显著增高，在8 h及12 h时点，给予红景天苷后，试验组TXB2水平明显下降，与对照组比较，差异有统计学意义。表明红景天苷能够降低TXB2水平，从而减轻胰腺及外周组织微血管痉挛，改善胰腺血运，清除炎性因子及氧自由基[13-14]。试验组IL-8及TXB2均较对照组下降，淀粉酶的下降幅度更为明显，实验结果提示中药红景天苷可能通过拮抗氧自由基，改善TXB2/IL-8比例失调，减轻胰腺炎的缺血损伤，证明中药红景天苷对急性胰腺炎期间的组织细胞具有保护作用。

综上所述，红景天苷作为重要的扩血管及抗氧化剂在ANP进程的早期发挥重要的改善微循环、降低胰酶及清除炎性因子的作用，对ANP的治疗作用可以进一步研究。

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Effect of salidroside on ischemia in acute necrotizing pancreatitis

LI Jie-qing,NIU Gui-fen,SUN Jian-bo

(Department of General Surgery,The Fourth People′s Hospital of Shenyang,Shenyang 110021,China)

Objective To observe the effect of salidroside on ischemia in rats with acute necrotizing pancreatitis (ANP) model and discuss the mechanism.Methods Two hundred Wistar rats were divided into three groups randomly: sham operation group(n=50),control group(n=75) and experiment group(n=75).Rats in control group and experiment group were made to acute necrotic pancreatitis model by artery blocking and the sham operation group were treated by abdominal incision,and the rats in experiment group were treated with salidroside i.v .Blood sample was drawn at 0,2nd,4th,8th,12th h after reperfusion,and the levels of blood amylase,TXB2,IL-8 were detected.Results At the 4th h,blood amylase began to decrease in experiment group,compared with control group at the 8th and 12th h,the differences were significant(P<0.05);At 8th h and 12th h, TXB2in experiment group was significantly lower than that in control group (P<0.05);TXB2in control group increased at 12th h and TXB2in experimental group began to decrease at 4th h,compared with control group,the difference was significant at the 8th h(P<0.05);IL-8 in control group increased in 12 h and IL-8 began to decrease at 12th h,compared with control group IL-8 decreased significantly at the 12th h(P<0.05).Conclusion Salidroside could protect ischemia injury in rats with ANP and decrease the levels of amylase,TXB2and IL-8.

Salidroside;Acute necrotizing pancreatitis;TXB2;Interleukin 8

2014-10-24

沈阳市第四人民医院普外科,沈阳 110021

10.14053/j.cnki.ppcr.201503014