黄蜀葵花总黄酮定量研究

钱芳　张芹

【摘要】目的：用高效液相色谱法测定黄蜀葵花总黄酮中金丝桃苷的含量。方法：色谱柱：依利特-C-18-柱（250×4.6 mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，流速：1.0ml/min，检测波长：360nm，柱温：30℃。结果：金丝桃苷在11.4059～364.99μg/ml范围内与峰面积的积分值呈现良好的线性关系（r=1.0000），平均加样回收率97.14%，RSD1.86%（n=6）。结论：HPLC法简便易行、结果准确、重复性好，可用于测定黄蜀葵花总黄酮中金丝桃苷含量。

【关键词】黄蜀葵花总黄酮；HPLC法；金丝桃苷

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2015）23-0014-02

黄蜀葵花为锦葵科秋葵属黄蜀葵（Abelmoschus manihot L·Medic）的干燥花。黄蜀葵花含丰富的黄酮类化合物，可用于治疗缺血性心脏病和缺血性脑血管病。黄蜀葵花总黄酮对缺氧损伤、急性心肌缺血具保护作用，并对不完全缺血性脑损伤有一定的保护作用[1-4]。有研究表明，主要由金丝桃苷为主的黄酮醇苷及其苷元组成黄酮类成分[5]。文献[6-8]报道的金丝桃苷的含量测定方法多为等度HPLC法，对于黄蜀葵花中金丝桃苷的有效分离检测不易实现。本试验将梯度HPLC法用于测定黄蜀葵花总黄酮中金丝桃苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪：Agilent1100，G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A VWD检测器，Agilent ChemStation，美国安捷伦公司；1/10万电子分析天平：BP-211D型，德国Sartorius；超声波清洗器：KQ-1000E，江苏昆山超声仪器公司；电热鼓风干燥箱：101-1A型，江苏南通市沪通制药机械设备公司；数显型恒温水浴锅：HH-4，江苏金坛荣华仪器公司。

1.2 试药 金丝桃苷对照品（批号111521-201205），中国药品生物制品检定所购买，含量测定用； 黄蜀葵花总黄酮（批号141009、141010、141011），本实验室制备；液相色谱所用试剂：色谱纯；水：超纯水；其它试剂：分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：依利特C-18-柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液，进行梯度洗脱：0～35min（16∶84），35～37min（30∶70）， 37～53min（30∶70），53～55min（16∶84），55～60min（16∶84）；检测波长：360nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min；进样量10μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取金丝桃苷对照品，精密称定，甲醇溶解制成1ml含729.98μg的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取黄蜀葵花总黄酮100mg，置于25ml量瓶中，加入甲醇，超声30min，放冷，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 系统适应性试验 取供试品溶液、对照品溶液，进样10 μl，在上述液相色谱梯度洗脱条件下，液相色谱图中，金丝桃苷达基线分离，理论板数按金丝桃苷计在10000以上，分离度大于2.0。（见图1）

2.4 线性关系考察 取上述对照品溶液，用甲醇分别稀释至364.99、182.495、91.2475、45.6238、22.8119、11.4059μg/ml，在高效液相色谱仪中，注入不同浓度的对照品溶液10μl，测定。经线性回归，得金丝桃苷回归方程y=21.93x+27.36，r=1.0000，金丝桃苷在11.4059～364.99μg/ml范围内，同峰面积的积分值呈良好线性关系。

2.5 精密度试验 同一对照品溶液，精密吸取10μl后，注入液相色谱仪，重复测定6次，以峰面积计算，RSD为0.58%（n=6）。

2.6 稳定性试验 同一供试品溶液，于0、2、4、6、8、12h进样，测定峰面积，RSD为0.84%（n=6），结果表明：供试品溶液12h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批号（141009）的黄蜀葵花总黄酮，约100mg，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液，测定，以金丝桃苷含量计算，RSD为1.21%（n=6）。结果表明，重复性较好。

2.8 加样回收率试验 根据加样回收率试验的要求，取已知含量的黄蜀葵花总黄酮（141009）约50mg，共6份，精密称定后，加入金丝桃苷对照品，依法制备供试品溶液，液相色谱仪中注入精密吸取的10μl，测定，计算，平均回收率为97.14%，RSD为1.86%。

2.9 样品含量测定 取3批黄蜀葵花总黄酮，每批2份，根据上述方法，制备供试品溶液，进样，测定，计算结果如下。见表2。

3 讨论

试验中曾参考药典[9] ：以乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）为流动相，结果分离效果不好，又尝试乙腈-0.1%磷酸溶液，不同比例等度洗脱系统，金丝桃苷未能有效分离，且分析时间过长。通过反复试验，最后以乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0～35min（16∶84），35～37min（30∶70）， 37～53min-（30∶70）-，53～55min（16∶84），55～60min（16∶84），实现了较好的分离效果。

HPLC法测定黄蜀葵花总黄酮中金丝桃苷含量简便易行、结果准确、重现性好，可用于其质量控制。

参考文献

[1]李春梅，安雅婷，王涛，等.中药黄蜀葵花化学成分的分离与鉴定（Ⅲ）[J].沈阳药科大学学报，2011，28（7）：520-525.

[2]范丽，郭岩，陈志武，等.黄蜀葵花总黄酮预处理对家兔心肌缺血再灌注损伤的影响[J].中国药理学通报，2006，22（1）：106-109.

[3]李庆林，王成永，彭代银，等.黄蜀葵花总黄酮对心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2006，12（2）：39-42.

[4]刘爽，江蔚新，吴斌.黄蜀葵化学成分及药理活性研究进展[J].中国现代中药，2010，12（8）：5-9.

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[7] 韩霖，刘妍如，杨建云，等. 贯叶连翘提取物中金丝桃苷含量的RP-HPLC法测定[J]. 时珍国医国药，2012，23（10）：2432-2434.

[8] 杨海丽.HPLC法测定加味水陆丸中金丝桃苷的含量[J].中医药导报， 2014，20（3）：72-73.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：287.

（收稿日期：2015.09.08）