针对测定长白楤木种子中总酚含量的优选方法研究

何芳　张宁

摘 要：长白 木（Aralia continentalis Kitagwa）种子具有休眠的特性[1]，在自然条件下萌发困难，本论文主要研究筛选测定长白 木种子中总酚含量的适宜方法。试验结果表明，用50%丙酮溶液做提取剂，单宁酸做标准样品测定长白 木种子中总酚含量效果较好。

关键词：长白 木；种子休眠；总酚含量

种子休眠是具有正常活力的种子在适宜的环境条件（光照、温度、水分和氧气等）下仍不能萌发的现象。对植物本身来说是一种有益的生物学适应性，具有重要的生态学意义，但是却给我们的苗木生产带来一定的困难。本论文主要研究筛选出对长白 木种子中酚类物质含量测定的适宜方法，为寻找长白 木种子休眠解除过程中，酚类物质含量的变化规律，生产上使用破眠技术提供理论上支持[2]。因此，本研究具有重大的理论和实践意义。

1 材料与方法

1.1 材料

试验采用2008年8月采收的长白 木成熟饱满的种子。

1.2 方法

本次试验采用Folin-Ciocalteu方法测定长白 木种子中总酚含量，主要原理是依据多酚类化合物及含有极易氧化羟基的还原性物质在碱性环境条件下与福林试剂反应生成蓝紫色的化合物，并在可见光范围内具有稳定的强烈吸收，一定条件下服从朗伯-比尔定律，利用此现象选择合适的基准物质绘制标准曲线。从而测定多酚类化合物的总含量。

1.2.1 有机溶剂的筛选及标准品的筛选

样品的粉碎：用高速粉碎机将长白 木种子粉碎样品溶液的制备：分别用乙醇和丙酮提取，处理浓度分别为30%、50%、70%。

（1）乙醇溶剂的提取：精确称取3份磨碎的长白 木种子1.0g，放在3个50ml锥形瓶中，分别加入不同浓度的乙醇10ml，声波提取30min，收集上清液，滤渣再提取两次，合并提取液，然后将上清液在4℃离心10min，用移液枪精确量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸馏水定容。

（2）丙酮溶剂的提取：精确称取3份磨碎的长白 木种子1.0 g，放在3个50ml锥形瓶中，分别加入不同浓度的丙酮10ml，声波提取30min，收集上清液，滤渣再提取两次，合并提取液，然后将上清液在4℃离心10min，用移液枪精确量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸馏水定容。

标准曲线的建立：

（1）单宁酸标准曲线的建立：分别准确量取单宁酸标准液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于试管中，各加6ml水，摇匀，再加0.5ml福林试剂，充分摇匀。1min之后，加入20%碳酸钠溶液1.5ml，混匀定容。在75℃反应10min，于298nm波长下比色，测定吸光度，建立标准曲线。

（2）没食子酸标准曲线的建立：分别准确量没食子酸标准曲线的建立：分别准确量取没食子酸标准液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于试管中，各加6ml水，摇匀，再加0.5ml福林试剂，充分摇匀。1min之后，加入20%碳酸钠溶液1.5ml，混匀定容。在75℃反应10min，于265nm波长下比色，测定吸光度，建立标准曲线。

（3）香草醛标准曲线的建立：分别准确量取香草醛标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于试管中，各加6ml水，摇匀，再加0.5ml福林试剂，充分摇匀。1min之后，加入20%碳酸钠溶液1.5ml，混匀定容。在75℃反应10min，于299nm波长下比色，测定吸光度，建立标准曲线。

样品的测定：

用移液枪精确量取1ml样品溶液于试管中，加入6ml蒸馏水，0.5ml福林试剂和1.5ml20%碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至刻度，混匀，75℃水浴10min，冷却，在标准液的最大吸收值处测定吸光度。实验做三次重复。

1.2.2 长白 木种子内总酚含量的测定

样品溶液的制备：

精确称取磨碎的长白 木种子1.0g，放在50ml锥形瓶中，加入50%的丙酮10ml，声波提取30min，收集上清液，滤渣再提取两次，合并提取液，然后将上清液在4℃离心10min，用移液枪精确量取上清液5ml于25ml的容量瓶中，用蒸馏水定容。

标准曲线的建立：

单宁酸标准曲线的建立：

分别准确量取单宁酸标准液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml于试管中，各加6ml水，摇匀，再加0.5ml福林试剂，充分摇匀。1min之后，加入20%碳酸钠溶液1.5ml，混匀定容。在75℃反应10min，于298nm波长下比色，测定吸光度，建立标准曲线。

样品的测定：

用移液枪精确量取1ml样品溶液于试管中，加入6ml蒸馏水，0.5ml福林试剂和1.5ml20%碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至刻度，混匀，75℃水浴10min，冷却，在标准液的最大吸收值处测定吸光度。实验做三次重复。

总酚含量（%）=×100%

2 结果与分析

2.1 标准样品筛选

总酚的检测方法中常用到的标准品因作物不同而不同，因此实验采用单宁酸、没食子酸和香草醛为标准品进行总酚含量的检测，实验采用50%丙酮提取种子内的总酚，单宁酸、没食子酸、香草醛做标准品测定总酚含量进行显著性分析，单宁酸做为标准品测定总酚含量极显著高于其它两种标准品种。

2.2 不同溶剂、不同浓度对种子内总酚提取效果研究

不同溶剂、不同浓度提取测定长白 木种子内总酚含量，丙酮的提取液中总酚含量均极显著的高于乙醇提取液中总酚含量，用30%丙酮和50%丙酮提取总酚含量极显著的高于70%丙酮处理，且30%丙酮提取与50%丙酮提取二者之间达到显著性差异，未达到极显著性差异。由此可以看出本试验提取总酚的适宜有机溶剂为丙酮，适宜浓度为50%。不同标准品检测结果比较可以看出，丙酮对种子中总酚的提取效果均好于乙醇提取效果，且以50%丙酮提取效果较好。

3 结论与讨论

以50%丙酮做提取剂，单宁酸做标准品检测长白 木种子内总酚含量为优选方法。通过文章研究可知，单宁酸做为标准品测定种内总酚含量极显著高于香草醛、没食子酸做标准品。50%丙酮对长白 木种子进行提取，测得种子内总酚含量最高。因此，用50%丙酮溶液做提取剂，以单宁酸做标准样品检测的灵敏度较高，是本次实验测定长白 木种内总酚含量的优选方法。

参考文献

[1]方志荣，苏智先，胡进耀，等.珙桐种子几种呼吸代谢酶活性及果实不同组织总酚含量测定[J].绵阳师范学院学报，2008，27（5）：70-73.

[2]杨晓玲，张培玉，郭明军.山楂种子酚类物质含量与休眠的关系[J].园艺学报，1997，24（4）：393-394.