正交试验法优选葛根配方颗粒的提取工艺

杜远东

【摘 要】 目的：研究优化葛根配方颗粒的提取工艺，为探索与改进中药饮片的临床应用形式提供依据。方法：采用传统汤剂煎煮方法制备葛根对照药物；筛选、确定葛根提取的溶媒，然后按正交L9（34）设计，对浸泡时间、溶剂用量、提取时间、提取次数四个因素进行试验研究，以葛根素含量与出膏率为指标，予以综合评价（直观分析和方差分析）。结果：最佳提取工艺为：12倍量的60%乙醇浸泡1h，提取2次，每次1.h。结论：通过正交试验优选葛根配方颗粒的提取工艺，稳定、合理、重现性好，能有效的提取葛根素，且适于大生产，可作为葛根配方颗粒的提取工艺。

【关键词】 葛根；提取工艺；正交试验

【中图分类号】R284.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-817（201）1-001-02

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata （Wild.） Ohwi或甘葛藤P. thomsonii Benth的干燥根，其主要活性成分为异黄酮类化合物，如葛根素、大豆素、大豆苷等。葛根配方颗粒是葛根饮片经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药颗粒剂[1]。将葛根饮片制备为颗粒剂，可以有效地去除植物纤维等无活性成分，增加稳定性，易储存，服用方便。

1 材料与仪器

1.1 材料 葛根（西安盛兴饮片厂）；葛根素对照品（批号：0766-200611，中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱级）；超纯水（实验室自制）。

1.2 仪器 Waters高效液相色谱仪（Waters269 Separations Module，Waters2996 PAD检测器），含在线真空脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱；梅特勒GB204电子天平；SB3200D超声波清洗机（宁波新茎生物科技股份有限公司）；101型电热鼓风干燥箱（北京科伟永鑫实验仪器设备厂）；艾柯-Advanced-06型超纯水机（成都唐氏康宁科技发展有限公司）。

2 方法与结果

2.1 提取方法

2.1.1 采用传统工艺提取 称取100g药材，加入水量没过药材面1～2cm即可，浸泡0.h，用武火煎煮至沸腾，然后改用文火煎煮，30min/次，提取2次，合并药液，浓缩，定容至20ml，备用。

2.1.2 水沸后提取 称取100g药材，加入沸水中，水量以没过药材面1～2cm即可，武火煮沸后，改用文火，30min/次，提取2次，合并药液，浓缩，定容至20ml，备用。

2.1.3 水提 称取药材100g，分别加入10、8倍量的水提取，第一次提取1h，第二次提取30min，滤出药液，合并药液，浓缩，定容至20ml，备用。

2.1.4 60%乙醇提取[2] 称取100g药材，加入倍量的60%乙醇回流提取，第一次提取1.h，第二次提取1 h，滤取药液，合并药液，减压回收乙醇，定容至20ml，备用。

2.1. 9%乙醇提取 称取100g药材，加入倍量的9%乙醇回流提取，第一次提取1.h，第二次提取1 h，滤取药液，合并药液，减压回收乙醇，定容至20ml，备用。

2.2 高效液相色谱测定含量

2.2.1 色谱条件[3] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水（2∶7）；检测波长：20nm。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取葛根素标准品10.4mg，加30%的乙醇定容至0ml，稀释倍，制成2mg/0ml的对照品溶液，用微孔滤膜过滤，备用。

2.2.3 供试品溶液 吸取各样品溶液2ml，用30%的乙醇定容至100ml，用微孔滤膜过滤，备用。

2.2.4 结果 由表1可知，60%乙醇提取所得的葛根素含量最高，因此溶剂选择60%乙醇。

2.3 正交设计试验优选葛根提取工艺 选取浸泡时间（A）、加醇量（B）、提取时间（C）、提取次数（D）四个水平，以葛根素含量与干膏收率为指标的进行正交试验，优化葛根提取工艺。按“2.2的方法测定葛根素含量，因素水平、正交试验、正交试验结果、直观分析、方差分析的结果见表2、3、4、、6。

以干膏收率与葛根素含量的综合评分为考察指标，直观分析表（表）中极差R值最小的为误差项。对各因素进行直观分析，A因素：K2>K3>K1； C因素：K2>K3>K1。D因素：K2>K3>K1；B因素干膏收率为K1>K3>K2；含量测定为K2>K3>K1 ，综合考虑，B因素选K3。根据以上结果分析得出工艺为A2B3C2D2，即为用60%乙醇，12倍的量，浸泡1h，提取2次，每次1. h。

2.4 验证试验 分别称取20g葛根药材，按优选最佳工艺条件进行3次验证试验，结果见表7。

3 结论

正交试验结果表明，该优选工艺合理、稳定、重现性好，为葛根配方颗粒的生产工艺奠定了基础。

参考文献

[1] 顾志平，陈碧珠，冯瑞之.中药葛根及其同属植物资源的利用和评价[J].药学学报，1996，31（）： 3.

[2] 匡海学.中药化学[M].1版.北京：中国中医药出版社，2003：178.

[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（第一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010： 313.

（收稿日期：201.04.21）