肉仔鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定与药敏试验

2015-05-30肖玲

家禽科学 2015年8期

肖玲

摘要：本文对肉仔鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定与药敏试验进行了研究。通过对一例肉仔鸡大肠杆菌病原菌进行分离培养、涂片镜检和细菌的生化反应试验，并对分离菌进行了鉴定，确诊肉仔鸡大肠杆菌感染。对分离株大肠杆菌进行了药敏试验，结果表明：分离株对美克和康诺极度敏感，对优克特、大安和氟欣康药物呈现中度敏感，对杆宁、安泰、奇诺和喘泰产生了耐药性。

关键字：肉仔鸡；大肠杆菌病；分离鉴定；药敏试验

中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2015）08-0049-02

近年来随着肉仔鸡养殖业的不断发展，大肠杆菌病在肉仔鸡养殖场中不断发生，给肉仔鸡养殖业带来巨大的经济损失。通过对部分规模化养殖场和市场养殖户所送检的病料进行研究，得知该病的发病率逐渐上升，临床抗生素的滥用导致的耐药菌株的不断产生，给预防和治疗工作增加了难度，值得我们高度重视。

大肠杆菌病发病率如此高又难以防治是由其危害特点所决定的[1]：抗原构造复杂和血清型极多是其主要原因；传染途径多样；发病季节不定性；耐药现象普遍存在；病原混感性疾病不断产生。

为了控制大肠杆菌病的流行，并防止耐药菌株的产生，临床用药之前要先进行病原菌的分离鉴定和药敏试验，根据药敏试验的结果，筛选出对病原菌高度敏感的药物应用于临床，提高药物的治疗效果，控制大肠杆菌病的流行。

本文现对一例患有大肠杆菌病的肉仔鸡进行了大肠杆菌的分离鉴定，并对其进行了药敏试验，现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料与器材病料：肉仔鸡养殖场送检的疑似患有大肠杆菌病的病鸡。器材：普通滤纸，打孔器，带棉塞的小瓶，高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，洁净箱，冰箱，天平，灭菌注射用水，显微镜，载玻片，酒精灯，吸水纸，平皿，接种环，注射器，离心管，镊子，棉签等。

1.1.2 培养基普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、三糖铁琼脂斜面培养基、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、醋酸铅琼脂培养基、葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、麦芽糖发酵管、甘露醇发酵管、蔗糖发酵管等。

1.1.3 染色液及试剂革兰氏染色液、甲基红指示剂、V-P指示剂、吲哚试剂、香柏油、二甲苯。1.1.4 抗菌药物美克、优克特、杆宁、氟欣康、康诺、大安、安泰、奇诺、喘泰。

1.2 试验方法

1.2.1 准备药敏纸片，配制抗菌素药液，制备药敏纸片，分离培养病原菌。

1.2.2 革兰氏染色镜检。用接种环取上述麦康凯培养基中的典型菌落与载玻片上压印或涂抹成一薄层，自然干燥。染色镜检过程：结晶紫染色1～2min—水洗—碘液媒染1～2min—水洗—95%酒精脱色0.5～1min—水洗—石炭酸复红染色2～3min—水洗—滤纸吸干—镜检[2]。

1.2.3 进行细菌生化试验、糖发酵试验、甲基红试验、吲哚试验、V-P试验、硫化氢试验。

1.2.4 三糖铁斜面接种试验。用灭菌接种环从待检菌纯培养中挑取单个菌落，先涂布于培养基斜面，再穿刺底层，后放置37℃恒温箱中培养24 h后，观察斜面、底面的颜色变化、是否产气以及硫化氢的产生情况。

1.2.5 药敏试验。用接种环取培养的菌落1～2个放入盛有lml灭菌生理盐水的小离心管内。用灭菌注射器混均匀，以无菌棉签蘸取菌液，在管壁上挤压，除去多余液体后，均匀涂布于营养琼脂平板表面，在室温下干燥5min，待平板表面稍干即可放置药敏纸片。用无菌镊子取药敏纸片平放于琼脂平板表面，并轻压使其紧贴上面，贴牢后不能再移动，并做好标记和记录。纸片应贴得均匀，各纸片中心距离不小于2.5cm，纸片距平板内缘不少于15mm，一张位于中心。将粘贴好的平板于室温下放l0min左右，再倒置于37℃培养箱中培养16～18h后，取出观察结果。

2 结果与分析

2.1 病原菌分离结果肉仔鸡养殖场送检的病料在麦康凯培养基上长出中等大小、边缘整齐、稍隆起、表面光滑、湿润、直径1.5～2mm、粉红色的圆形菌落。在营养琼脂上形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、近似灰白色的菌落，符合大肠杆菌的特征。

2.2 染色镜检结果分离菌株经革兰氏染色，镜检可见有粗短、两端钝圆的中等大小杆菌，多单个散在，个别成双排列，无芽孢，为革兰氏阴性，符合大肠杆菌的特征。

2.3 生化反应结果结果见表1。

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2.4 药敏试验结果结果见表2。

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3 结论

通过上述试验得知，从该肉仔鸡分离到的病原菌为大肠杆菌，分离菌株对美克和康诺表现极度敏感，对杆宁、安泰、奇诺和喘泰产生了耐药性。

参考文献：

[1] 褚玉玺，隋绍辉，王淑俄，等.鸡大肠杆菌病的危害特点[J].四川畜牧兽医，2001（28）：11.

[2] 姚火春，杜兴念，方定一，等.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业出版社，2006（2）：16-17.