鹌鹑高尿酸血症动物模型脂代谢研究

马 丽，曾贵荣，2，张妙红，邓 青，张 丹，罗术佳，潘善庆，姜德建，王小青

（1.湖南省药物安全评价研究中心，长沙 410331；2.北京协和医学院药用植物所，北京 100193）

鹌鹑高尿酸血症动物模型脂代谢研究

马 丽1，曾贵荣1，2，张妙红1，邓 青1，张 丹1，罗术佳1，潘善庆1，姜德建1，王小青1

（1.湖南省药物安全评价研究中心，长沙 410331；2.北京协和医学院药用植物所，北京 100193）

目的研究鹌鹑高尿酸血症动物模型及脂代谢。方法采用高脂饲养鹌鹑30d后，灌胃给予腺嘌呤（50mg/只），连续7d，建立鹌鹑高尿酸血症模型，观察22d后，取血检测血尿酸、黄嘌呤氧化酶、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、总胆固醇（CHO）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、肝脂酶（HL）、脂蛋白脂酶（LPL）、腺苷脱氢酶（ADA）脂质代谢指标，取关节和肾脏进行组织病理学检查。结果模型对照组动物血尿酸均明显升高（P＜0.01），CRE、BUN、TG、LDL、XOD均有明显升高（P＜0.05或P＜0.01），血清CHO、LPL、ADA、HDL含量明显降低（P＜0.05）。造模后动物足趾关节明显肿大，周围软组织肿胀。X光显示足趾骨密度减低，部分关节面破坏呈溶骨性破坏。病理学检查可见关节滑膜增生，有大量炎症细胞浸润，部分被纤维结缔组织替代，肾脏组织肾小管及间质可见尿酸盐结晶，部分小管轻度扩张，肾间质纤维增生，并伴有大量炎症细胞浸润。结论该模型具有关节肿大、肾脏尿酸盐沉积等肾脏损伤，且伴有脂代谢紊乱，其病理机制与XOD、ADA相关脂代谢酶活性有关。

鹌鹑；高尿酸血症；脂代谢

痛风（gout）是长期嘌呤代谢障碍、血尿酸增高引起组织损伤的一组异质性疾病。临床特点是：高尿酸血症（hyperuricemia）、痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积、特征性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和肾尿酸结石形成［1］。本研究通过建立一种稳定持久的高尿酸血症的动物模型，同时研究该模型脂代谢相关指标的变化。

1 材料和方法

1.1 动物

普通级迪法克鹌鹑，雄性，30日龄，购于北京市德岭鹌鹑养殖场，在湖南省药物安全评价研究中心普通级环境饲养【SYXK（湘）2010-0008】，动物检疫合格证：1100063965。

1.2 试药及试剂

腺嘌呤（批号：71016588；Sigma公司产品）；尿酸检测试剂盒（批号：108274，日本和光纯药工业株式会社产品）；CRE测定试剂盒（批号：901892，日本和光纯药工业株式会社产品）；BUN测定试剂盒（批号：909104，日本和光纯药工业株式会社产品）；TG测定试剂盒（批号：010568，日本和光纯药工业株式会社产品）；黄嘌呤氧化酶（批号：120305，美国RD公司产品）；脂蛋白脂酶（批号：111225，美国RD公司产品）；肝脂酶（批号：120224，美国RD公司产品）；腺苷脱氢酶（批号：120315，美国RD公司产品）。

1.3 仪器及器材

MR-96A酶标仪（深圳迈瑞公司生产）；柯达72型X光机（柯达公司）；自动生化分析仪（日本日立公司生产）；RM2235型石蜡切片机、TP1020型全自动脱水机、HI1220型烤片机、HI1210型摊片机、EG1150H+C型组织包埋机、DFC 420C型病理成像系统（德国Leica公司生产）。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0进行统计分析，计量资料采用均数±标准差（±ss），评价时考虑统计学差异和生物学意义。

1.5 方法［2-4］

1.5.1 造模与分组

普通级迪法克鹌鹑30只，雄性，30日龄，体重164.2～210.4g，以上动物按血尿酸兼顾体重随机分成2组，分别为空白对照组、模型对照组，每组15只，空白组给予标准鹌鹑饲料（玉米60％、麸皮15％、鱼粉3％、豆粨15％）喂养，模型对照组给予高钙鹌鹑饲料（玉米54％、麸皮2％、鱼粉7％、豆粨30％）喂养，摄食约33g/只/日，自由饮水，连续喂养30d，然后模型对照组灌胃腺嘌呤混悬液（50mg/只），灌服体积1mL/只，每天1次，连续7d，连续观察22d。分别于造模后第11、22天翅下静脉采血测定尿酸值，末次采血后取材。

1.5.2 检测指标：

①血尿酸③采用影像学X光照射进行摄片观察骨趾软组织变化。③第11天，第22天取血测定血尿酸。末次给药采血测定肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、总胆固醇（CHO）黄嘌呤氧化酶（XOD）、鸟脂蛋白脂酶（LPL）、鸟肝脂酶（HL）、腺苷脱氢酶（ADA）。

2 结果

2.1 鹌鹑高尿酸血症模型血清尿酸、肾功能及相关脂代谢酶的影响

如表1～3所示，与正常对照组比较，模型对照组动物第11、22天血尿酸显著升高（P＜0.01），模型对照组动物肾功能指标CRE、BUN、TG、LDL、XOD均有显著升高（P＜0.05或P＜0.01），血清CHO、LPL、ADA、HDL含量显著降低（P＜0.05）。

表1 鹌鹑高尿酸血症模型血尿酸的含量Tab.1 Quail high uric acid hematic disease model of blood uric acid levels

表2 鹌鹑高尿酸血症模型肾功能、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、胆固醇含量Tab.2 Quail high uric acid hematic disease model of kidney，triglyceride，low density lipoprotein cholesterol（HDL）content

表3 鹌鹑高尿酸血症模型相关血脂代谢酶活性的影响Tab.3 The quail high uric acid hematic disease model related lipid metabolic enzyme activity

2.2 组织病理学

2.2.1 关节X摄片及组织病理学检查

如彩插5图1所示，造模型后，模型对照组动物足趾关节明显肿大，X光摄片显示模型对照组足趾骨头部骨密度减低，边缘可见小碎骨片，关节面破坏，第四趾末结趾骨呈溶骨性破坏，周围软组织肿胀。病理观察可见模型对照组动物关节滑膜增生，有大量炎症细胞浸润，部分被纤维结缔组织替代，软骨细胞排列不规则，簇集、层次紊乱。

2.2.2 肾脏组织病理学检查

如彩插5图2所示，模型对照组肾脏组织肾小管及间质可见尿酸盐结晶，部分小管轻度扩张，肾间质纤维增生，并伴有大量炎症细胞浸润。

3 讨论

目前痛风的发病率日益增高，已成为当今世界尤其是中老年的常见病。鹌鹑作为禽类与人的嘌呤核苷酸代谢途径相似，建立高尿酸血症模型具有明显的优势。本研究采用灌胃给予腺嘌呤配合高脂饲料建立鹌鹑高尿酸血症模型，采用X光和组织病理及血尿酸动态监测模型，研究发现造模后动物关节明显肿大，组织病理学检查可见关节纤维结缔组织增生及炎症细胞浸润，肾脏有不同程度的炎症细胞浸润，提示该种方法建立典型的通风模型是成功的。腺嘌呤是一种含氮杂环嘌呤类化合物，给予大量腺嘌呤后，能干扰正常的嘌呤代谢致血尿酸升高，其代谢途径与人类相近，造模型方法类似于人类过量高蛋白饮食导致嘌呤核苷酸代谢紊乱诱发的高尿酸血症相符合［5］，XOD在嘌呤代谢中催化次黄嘌呤使之转化为黄嘌呤，并催化黄嘌呤使之转化为尿酸，调控尿酸生产的最终环节，是尿酸代谢过程中的关键酶，控制嘌呤核苷酸分解代谢的关键酶有腺苷脱氨酶（ADA）和XOD，ADA占优势地位［6］，ADA参与尿酸生成，可催化次黄嘌呤核苷酸和脱氧次黄嘌呤核苷的生成，再经过嘌呤核苷磷酸化酶的作用生成次黄嘌呤，最终经XOD作用生成尿酸［7］。模型组动物ADA活性呈现较低水平，肝脂酶（HL）在肝细胞中合成，肝脂酶与脂蛋白脂酶（LPL）是清除血浆脂蛋白中所含TG的限速酶，主要催化血浆乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯和磷脂水解，HL缺乏可使血浆胆固醇和TG升高，能使乳糜微粒和VLDL、低密度脂蛋白中的甘油三脂分解减少，进入肝细胞内的乳糜微粒和LDL中的甘油三脂和脂肪酸含量增加，肝细胞内甘油三脂合成增加，导致甘油三脂在肝细胞内堆积［8-10］。综上所述，本研究建立鹌鹑高尿酸症模型有关节肿大、肾脏尿酸盐沉积等肾脏损伤，且伴有脂代谢紊乱，与临床发病症状类似，对研究抗痛风药物提供了稳定的动物模型。

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Lipid metabolism study quail high uric acid hematic disease animal model

MA Li1，ZENG Gui-rong1，2，ZHANG Miao-hong1，DENG Qing1，ZHANG Dan1，PAN Shan-qing1，JIANG De-jian1，WANG Xiao-qing1
（1.Hunan Center for Drug Safety Evaluation，Changsha 410331，China；2.Institute of Medicinal Plant Beijing Union Medical College，Beijing 100193，China）

ObjectiveTo study quail high uric acid hematic disease animal model and lipid metabolism.MethodsQuail were used high fat feed after thirty days，gastric gavage adenine（50mg/only）seven days in a row.Quail high uric acid hematic disease animal model was set up.Observed in twenty-two days，blood was tested blood uric acid，xanthine oxidase，creatinine（CRE），urea nitrogen（BUN），triglycerides（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-c），hight densitry lipoproteon（HDL），xanthine oxidase（XOD），hepatic lipase（HL），lipoprotein lipase（LPL），adenosine dehydrogenase（ADA）lipid metabolism index，joints and kidneys for histopathological examination.ResultsModel control group animals blood uric acid were significantly increased（P＜0.01），CRE，BUN，TG，LDL and XOD were significantly increased（P＜0.05or P＜0.01），serum CHO、LPL、ADA、HDL content significantly decreased（P＜0.05）.Animal toes jointed obvious swollen after building，surrounding soft tissue swelling.X-ray showed toes bone density decrease，part of the joint surface damage is dissolved bony destruction.Pathological examination showed joint synovial hyperplasia，therewas a lot of inflammatory cells infiltration，part is replaced by fibrous connective tissue，Kidney tissue renal tubule and interstitial visibled urate crystals，part of the tubular mild expansion，renal interstitial fibers hyperplasia，accompanied by a large number of inflammatory cells infiltration.ConclusionThe model has swollen joints，kidney urate deposition kidney injury associated with lipid metabolism disorders，pathological mechanisms and XOD increased ADA.

Quail；Hyperuricemia；Lipid metabolism

R-332

A

1671-7856（2015）11-0017-04

10.3969.j.issn.1671-7856.2015.11.005

科技部新药创制重大科技专项（2011ZX09401-301-1）.

马丽（1983-），女，硕士，主要从事新药安全性评价研究。E-mail：muwukuhe@126.com。

王小青，女，硕士，助理研究员，主要从事新药安全性评价研究。

﹞2015-10-21