CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1蛋白表达对甲状腺肿瘤病理诊断作用分析

郭健 张世豪 延丽雅 陈辉娥

CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1蛋白表达对甲状腺肿瘤病理诊断作用分析

郭健 张世豪 延丽雅 陈辉娥

目的 探讨甲状腺病变中的细胞角蛋白19(CK19)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)与人骨髓内皮细胞标记物(HBME-1)表达及其对甲状腺肿瘤病理诊断的价值。方法 收集134例甲状腺癌(123例乳头状癌和11例滤泡癌)、34例甲状腺腺瘤、20例结节性甲状腺腺肿以及10例桥本甲状腺炎患者的病理标本, 检测其CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1的表达情况。结果 CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1在甲状腺肿瘤良性组织和恶性组织中的阳性表达率比较, 差异有统计学意义(P＜0.05)；四项指标联合检测对于甲状腺肿瘤良恶性诊断的敏感度和特异度分别为96.3%和100.0%。结论 甲状腺恶性肿瘤中CK19、Galectin-3与HBME-1阳性表达增高, 而TPO表达缺失, 四项指标联合检测对于甲状腺肿瘤良恶性的诊断具有重要价值。

甲状腺肿瘤；病理诊断；细胞角蛋白19；半乳糖凝集素-3；甲状腺过氧化物酶；人骨髓内皮细胞标记物

甲状腺肿瘤是临床常见的一种内分泌肿瘤, 由于良恶性肿瘤具有相似的组织学形态加之部分病例缺乏典型性, 在病理诊断中存在医师主观因素影响等, 病理诊断中也存在较大的误诊、漏诊风险［1］。肿瘤标志物检测对于内分泌良、恶性肿瘤的诊断鉴别具有重要意义。本研究分析了CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1在甲状腺病变中的表达及其单独与联合检测对肿瘤良恶性的诊断价值, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年1月～2013年12月, 东莞市大朗医院和东莞市人民医院经手术治疗的甲状腺肿瘤患者的病理标本198例, 根据WHO关于甲状腺的组织学分型：134例甲状腺癌(123例乳头状癌和11例滤泡癌), 男25例, 女109例, 年龄23～82岁, 平均年龄(45.26±13.48)岁；34例甲状腺腺瘤, 男6例, 女28例, 年龄16～62岁, 平均年龄(44.11±6.02)岁；20例结节性甲状腺腺肿, 男5例, 女15例, 年龄20～70岁,平均年龄(46.29±8.59)岁；10例桥本甲状腺炎, 男2例, 女8例,年龄25～78岁, 平均年龄(47.11±10.29)岁。

1.2 方法 手术病理组织标本以10%的中性福尔马林固定, 并常规石蜡包埋及3 μm厚连续病理切片, 并进行HE染色。以Power Vision二步法进行DAB染色以及苏木精复染,测定CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1表达情况, 以已知阳性切片作为阳性对照。常规预处理以后, 阻断内源性过氧化物酶, 采用PBS进行3次冲洗, 滴加一抗, 在37℃下孵育1～2 h, 再以PBS冲洗3次, 然后滴加羊抗鼠多聚体, 置于室温下孵育30 min, 再次采用PBS冲洗3次。最后采用DAB进行显色, 并冲洗后以中性树胶封片。CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1单克隆抗体与辣根酶标记羊抗小鼠多聚体均选自福建省福州迈新公司。

1.3 结果判定 由2名高年资病理医师进行双盲阅片。表达均定位于细胞质内, 以细胞质中出现棕黄色颗粒并且具有明显高于背景着色的判定为阳性, 其中, HBME-1可存在明显细胞膜着色, Galectin-3可存在部分细胞核着色。切片均选择5个高倍镜视野(400×)计数, 统计每个视野中阳性细胞所占百分数平均值, 以此作为阳性细胞数。

1.4 统计学方法 采用统计学软件SPSS18.0对数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 四项标志物在甲状腺病变组织中的表达 CK19、Galectin-3及HBME-1在甲状腺肿瘤良、恶性间的阳性表达率比较, 差异有统计学意义(P＜0.05)；TPO在恶性病变中以阴性为主, 在良性中均呈阳性, 良恶性比较, 差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 四项标志物在甲状腺病变中的阳性表达［n(%)］

2.2 四项标志物对甲状腺肿瘤良恶性的诊断价值 以CK19、Galectin-3、HBME-1三项指标单独为阳性、三项指标同时为阳性且TPO为阴性判定为联合诊断恶性, 以TPO判定为阳性、三项指标均为阴性判定为良性。结果显示, CK19的敏感度和特异度分别为93.3%、78.1%, TPO为11.2%、100.0%, Galectin-3为97.0%、87.5%, HBME-1为88.8%、87.5%, 四项指标联合检查的诊断敏感度与特异度提高至96.3%、100.0%。

3 讨论

CK19是由上皮细胞所分泌的一种糖蛋白, 主要在正常上皮与上皮源性原发肿瘤以及其转移肿瘤细胞中表达。诸多研究显示, 其对于甲状腺乳头状癌与滤泡癌、滤泡性腺瘤以及良性增生性滤泡的鉴别中具有重要价值。解丽梅［2］研究发现, 在甲状腺乳头状癌中存在CK19弥漫、强烈表达, 且具有高度灵敏度, 达到100%。但CK19免疫反应还存在于癌周以及增生性结节周围受到挤压的正常甲状腺组织以及淋巴细胞性甲状腺炎中。故认为CK19对于甲状腺癌的诊断特异度并不高, 但在良性或者正常组织中则多呈现弥漫性或者灶性表达, 且阳性较弱。本研究中, CK19在甲状腺恶性肿瘤中的阳性表达率为93.3%, 且多呈强阳性, 而在良性病变中的阳性表达率仅为7.8%, 对于良恶性病变的诊断敏感度和特异度分别为93.3%和78.1%, 特异度相对而言并不非常理想, 与佟杰等［3］报道接近。但CK19阳性表达多提示病变存在恶性倾向, 这对于提高临床诊断准确率具有重要意义。

Galectin-3是凝集素蛋白家族中的一员, 具有功能多样性, 在炎症、自身免疫性疾病以及肿瘤恶性转化过程中具有重要作用, 在乳腺癌、结肠癌以及淋巴瘤等多种恶性肿瘤中具有表达升高现象。邓敏等［4］临床研究证实, Galectin-3对于甲状腺肿瘤的良恶性诊断具有较高的敏感性。本研究结果显示, Galectin-3在甲状腺恶性肿瘤中的阳性表达率达97.0%, 而在良性肿瘤中仅为12.5%, 两者比较, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 灵敏度和特异度分别达97.0%、87.5%, 认为Galectin-3对于甲状腺良恶性病变的诊断具有较高的参考价值, 可作为临床鉴别诊断的敏感标记物。

HBME-1为酸性氨基酸多聚糖蛋白, 主要由透明质酸等成分组成。临床研究显示, HBME-1在甲状腺乳头状癌中具有高表达特征, 对于甲状腺癌具有较好的诊断价值。古丽那尔·阿布拉江等［5］研究发现, 在甲状腺乳头癌患者中普遍存在HBME-1阳性表达, 而在甲状腺良性病变中的阳性表达极少。王丹等［6］研究中发现, HBME-1及Galectin-3在甲状腺恶性结节中的表达显著高于良性结节, 且其单独或者共同表达对于甲状腺结节良恶性的诊断敏感性以及特异性均显著高于普通细胞涂片, 认为HBME-1可作为甲状腺结节针刺细胞学标本检测指标, 可提高甲状腺肿瘤诊断的敏感性和特异性［6］。本研究结果显示, 甲状腺恶性肿瘤的HBME-1阳性表达率达88.8%, 相比于良性肿瘤的12.5%显著提高, 对于肿瘤良恶性的诊断敏感度与特异度均超过87%, 诊断效能接近Galectin-3。表明HBME-1对于甲状腺良恶性肿瘤的诊断具有较高的准确性, 可作为甲状腺疾病的附加诊断指标。

TPO是一种含糖蛋白的Ⅰ型跨膜亚铁血红素, 参与了甲状腺素的合成过程［7］。临床研究发现, TPO对于正常甲状腺细胞以及良性病灶组织具有极强的亲和力, 而其与乳头状癌等恶性癌细胞的结合力较弱, 故可出现阳性表达程度差异,这对于肿瘤异质性的评价具有一定价值。本研究中, TPO在恶性组织中的阳性表达率仅为11.2%, 而在良性中的表达为100.0%, 与林阿丽［7］报道相似。这种明显的良恶性差异与高特异性非常有利于肿瘤良恶性的鉴别, 可作为甲状腺病变的初筛指标, 以阴性患者作为恶性高危病例。

将四项指标联合检测, 结果显示, 联合检测对于甲状腺肿瘤良恶性的特异性达100.0%, 而敏感性也提高至96.3%。CK19、TPO、Galectin-3与HBME-1在甲状腺肿瘤中具有特异性表达, 其中, CK19、Galectin-3与HBME-1表达升高,而TPO表达缺失, 这对于判定病变的良恶性具有重要价值,四项指标联合检测有利于提高特异度、敏感性与诊断准确率,可提高临床病理诊断的可靠性。

［1］ 黄志伟.CK19、TPO、Galectin-3在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义.吉林医学, 2014, 35(19):4253-4254.

［2］ 解丽梅.CK19、Galecin-3和TPO表达在甲状腺良恶性肿瘤病理诊断中的价值.中国医药指南, 2012, 10(23):428-429.

［3］ 佟杰, 王岩, 笪冀平.CK19、HBME-1、Galectin-3等表达在甲状腺乳头状微小癌与良性病变鉴别诊断中的意义.中华肿瘤杂志, 2011, 33(8):599-604.

［4］ 邓敏, 叶顾萍, 马建中, 等.甲状腺乳头状癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表达及意义.临床与实验病理学杂志, 2011, 27(8):843-846.

［5］ 古丽那尔·阿布拉江, 桑伟, 刘霞, 等.CK19、Gal-3和 HBME-1在甲状腺良恶性结节中的表达及其意义.新疆医科大学学报, 2014, 37(2):147-150.

［6］ 王丹, 杨玉芝, 冯琨, 等.Galectin-3和HBME-1在甲状腺结节细针穿刺标本中的表达.放射免疫学杂志, 2012, 25(3):271-273.

［7］ 林阿丽.CK19、HBME-1、Galectin-3、TPO及CD56联合检测在甲状腺乳头状癌诊断中的意义.浙江临床医学, 2014, 16(2): 293-295.

Analysis of effects by CK19, TPO, galectin-3 and HBME-1 protein expression for pathological diagnosis of thyroid tumor

GUO Jian, ZHANG Shi-hao, YAN Li-ya, et al.Dongguan City Dalang Hospital, Dongguan 523770, China

Objective To investigate the expressions of cytokeratin 19 (CK19), thyroid peroxidase (TPO), Galectin-3, and human bone marrow endothelial cell markers (HBME-1) in thyroid lesions and their effects for pathological diagnosis of thyroid tumor.Methods Pathological samples were collected in 134 cases of thyroid cancer (123 cases of papillary carcinoma and 11 cases of follicular carcinoma), 34 cases of thyroid adenoma, 20 cases of nodositas goiter and 10 cases of Hashimoto thyroiditis.Their expressions of CK19, TPO, Galectin-3, and HBME-1 were detected.Results The difference of CK19, TPO, Galectin-3, and HBME-1 expressions between benign and malignant tissues in thyroid tumor had statistical significance (P＜0.05).Combined detection of four indicators had the sensitivity and specificity as 96.3% and 100.0% for diagnosis of benign and malignant thyroid tumor.Conclusion In malignant thyroid tumor, the positive expressions of CK19, Galectin-3, and HBME-1 were increased, while that of TPO was deficient.Combined detection of four indicators provides important diagnostic value for benign and malignant thyroid tumor.

Thyroid tumor; Pathological diagnosis; Cytokeratin 19; Galectin-3; Thyroid peroxidase; Human bone marrow endothelial cell markers

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.003

2015-01-20］

523770 东莞市大朗医院(郭健 延丽雅 陈辉娥)；东莞市人民医院(张世豪)