不同产地金银花抑菌效果的比较研究

陈会良，张 莹，陈文娥

(安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100)



不同产地金银花抑菌效果的比较研究

陈会良，张 莹，陈文娥

(安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100)

研究不同产地金银花水提液的体外抑菌效果。采用乙醇加热回流法提取金银花中的药物有效成分，过滤离心沉淀制成醇提液，用K-B纸片扩散法测定其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性。结果表明湖南产的金银花的抑菌效果最好，对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有抑菌作用，而河北产的金银花的抑菌活性最低。

金银花；醇提液；抑菌效果

金银花(FlosLoniceraeJaponicae)为忍冬科植物忍冬(LoniceraJaponicaThunb)的干燥花蕾或是带初开的花[1]。忍冬在我国分布广泛，全国大部分地区均有栽培，资源十分丰富。金银花味甘、性寒、气芳香。具有清热解毒、凉血散风、护肝利胆和抗菌、抗病毒、止血、降血脂、抗氧化等功效，临床上用于主治温病发热、热毒血痢、痈肿、疔疮、喉痹、丹毒等症。金银花为临床常用中药，并有“中药之中的青霉素”之称。金银花主要成分有：绿原酸、异绿原酸、阿魏酸、白果酸、咖啡酸、金丝桃苷、忍冬苷、本犀草苷、芦丁等，这些化学成分均具有较强的抗病毒、抗菌作用[2]。目前对金银花的抑菌作用研究较多[3-4]，但有关不同产地的金银花抑菌效果如何尚未见报道，本文以不同产地金银花抑菌活性的比较研究为题，以期为金银花临床应用提供相关的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材与试剂 不同产地金银花(包括山东、湖北、湖南、河北和河南产)均购自亳州沪樵中药饮片厂。营养琼脂、无水乙醇等试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。

1.1.2 试验菌株 沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均由安徽科技学院动物医学实验室保存。采用营养琼脂培养基培养。

1.1.3 试验仪器 TDL-16C型高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；不锈钢立式压力蒸汽灭菌器(上海三申医疗器械厂)；AL204型电子分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；超净工作台(苏州安泰空气技术公司)；GNP-9270BS电热恒温培养箱(上海新苗医疗器械有限公司)；游标卡尺，规格(0～150)mm×0.02 mm，(安徽桐城量具厂)；101AS-3型电热鼓风干燥箱(上海跃欣科仪厂)。

1.2 试验方法

1.2.1 金银花醇提掖的提取及工作液的制备 取河南、山东、河北、湖南、湖北五产地金银花，各10.0 g，加50 %乙醇100 mL，热回流提取1.0 h，连续2次，合并滤液，3000 r/min离心15min，收集上清液减压浓缩定容至5.0 mL，即得浓度为2.0 g/mL的金银花醇提液。

1.2.2 抑菌试验

1.2.2.1 药敏纸片的制备 将普通定性滤纸用打孔器制成6.0 mm直径圆形纸片，置于干燥洁净的试管内，高压蒸汽灭菌器中121.3 ℃、15 min灭菌后，取出放入恒温干燥箱内干燥。取经干燥后的圆形纸片，分别浸入山东、湖北、湖南、河北、河南产地的金银花醇提液中，浸润5min后取出备用。

1.2.2.2 培养基的制备 精确称取20.0 g营养琼脂，于2000 mL的三角烧瓶中加蒸馏水1000 mL，边加边搅拌，使营养琼脂粉混合均匀。放入高压蒸汽灭菌器中经121.3 ℃、15 min灭菌，取出冷却至约65℃左右时倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5 mm，冷却凝固后备用。

1.2.2.3 参照菌株的培养 在无菌条件下，用划线法分别接种大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌于制作好的培养基中。将接种后的培养皿置37 ℃恒温培养箱中培养24 h，24 h后取出放入4 ℃冰箱中保存备用。

1.2.2.4 体外抑菌试验 在超净工作台中，用无菌镊子，将含不同浓度的药液纸片均匀间隔贴于各营养琼脂培养基表面。各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板边缘应大于15mm，且要轻触纸片使其与培养基表面接触良好，然后放入37 ℃恒温培养箱中，培养24 h，用游标卡尺量取抑菌圈直径。各药液对每种试验菌株均做3个重复，取其抑菌圈直径平均值。

金银花提取物抑菌效果的判定标准：抑菌圈直径大于20 mm为高敏、10～19 mm为中敏、小于10 mm为钝敏[5]。

2 结果与分析

从表1可知,山东产的金银花对大肠杆菌的抑菌圈直径比对沙门氏菌和枯草芽孢杆菌的都大，湖北产的金银花对枯草芽孢杆菌的抑菌圈最大，其次是大肠杆菌，对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均无抑菌圈；湖南产的金银花对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径最大，其次是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，对沙门氏菌的抑菌圈直径最小；河北产的金银花只对枯草芽孢杆菌有抑菌圈，对其它三种菌株均无抑菌圈；河南产的金银花除了对沙门氏菌无抑菌圈，对另外三种菌株都有抑菌圈，其中对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径最大，对大肠杆菌的抑菌圈最小。

表1 不同产地金银花对不同细菌的抑菌效果(mm)

3 讨论

细菌耐药性是国内外医药领域关注的热点，用中草药降低或延缓细菌的耐药性是防止细菌产生耐药性的有效措施之一。我国中草药资源丰富, 中医药历史悠久。许多中草药被证实具有抗菌、抗病毒的作用。金银花对甲型链球菌、乙型链球菌、沙门氏菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌等多种致病菌均有较强的抑制作用[6-7]。

金银花抗菌抗病毒的有效成分以绿原酸、异绿原酸、总环烯醚萜、咖啡酰奎宁酸、黄酮类化合物等为主成分。金银花提取物的制备多采用水提醇沉、水提、稀醇提取、超声波提取等方法。已有研究表明，70%的中草药乙醇提取液的抗菌活性高于水煎液，这是因为乙醇将中草药中的一些有效抗菌成分溶解提取出来，从而使醇提液表现出较强的抗菌活性[8]。采用水溶液浸提，后用乙醇沉淀除去浸提液中的杂质，这样可将提取液中的树脂、蛋白质等不溶性成分分离除去，保留如有机酸、氨基酸、生物碱、苷类等水溶性成分,增加了抑菌成分的有效浓度。本试验采用稀醇提取的方式，方法简便易行，成本低，活性组分收得率较高，故该法有一定的实用应用价值。

本试验中，不同产地的金银花对四种细菌的抑菌效果差异明显，湖南产金银花其抑菌效果最好，对四种菌株都有抑菌作用。而河北产的金银花的抑菌效果低，只对枯草芽孢杆菌有抑菌效果。虽然2010年版《中国药典》收载忍冬科植物忍冬作为金银花药材的唯一植物来源，但是金银花在我国分布广泛，不同产地金银花的化学成分基本相同，但其有效成分的含量存在一定的差异。另外，不同品种、采收期等都会影响金银花的质量，从而产生不同的抑菌效果。因此，临床应用金银花时，建议首选湖南产的金银花入药。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].

[2]韩永成，刘伟，陈宁，等. UHPLC 法同时测定金银花中6种有效成分的含量[J]. 天然产物研究与开发，2015，27(1):89-93.

[3]林丹，赵国玲，刘佳佳.中药金银花药用成分的提取及抑菌实验的研究[J]. 天然产物研究与开发，2003，15(5):436-437.

[4]宋海英，邱世翠，王志强，等，金银花的体外抑菌作用研究[J]. 时珍国医国药，2003,14(5):269.

[5]杨建江，韩文瑜，杜锐，等．30种中草药对耐药性猪链球菌的抑菌试验[J]. 中兽医医药杂志，2004，23(2):14-16．

[6]洪亮，叶威.金银花、山银花绿原酸类提取物体内外抑菌作用研究[J]. 生物技术世界，2015(5):105-107.

[7]苏香萍 ，龚大春 ，张亚雄，等. 金银花二氧化碳超临界萃取物的体外抑菌作用研究[J]. 时珍国医国药，2009，20(4):832-834.

[8]李京晶，籍保平，李博，等.十味中草药提取液的体外抗菌活性研究[J]. 食品科学，2006,27(4):147-150.

Antibacterial Activity Comparison ofLonicerajaponicaThunbfrom Different Places

CHEN Hui-liang, ZHANG Ying, CHEN Wen-e

(College of Animal Science,Anhui Science and Technology University,Fengyang 233100,China)

Antibacterial effect ofLonicerajaponicaThunbfrom different places were investigated. The effective ingredients ofLonicerajaponicaThunbwere extraverted by alcohol extraction circumfluence，K-B diffusion method was used to deterimine antimicrobial effects ofLonicerajaponicaThunbfrom different places onStaphylococcusaureus,Escherichiacoli,SalmonellaandBacillussubtillis. The results show thatLonicerajaponicaThunbfrom Hunan province had the best antibacterial effect against four bacterials,and the antibacterial effect was worst ofLonicerajaponicaThunbfromHubeiProvince.

LonicerajaponicaThunb;Extract;Antimicrobial effect

2015-05-28

安徽省教育厅优秀青年人才基金项目(2011SQRL120)；安徽科技学院重点学科建设项目(AKXK20101-2)。

陈会良(1962-)，男，安徽省灵璧县人，高级实验师，主要从事临床兽医学研究。

R931.71

A

1673-8772(2015)04-0067-03