子宫内膜癌中Maspin、uPA、ER、PR 的表达及临床意义

李美艳 程利芳 陈辉 陈永学 呼君瑜 石媛媛 宋春丽 马利辉 焦茹

肿瘤的增殖、侵袭、转移是一个多因素参与、多阶段的复杂过程，与多种细胞因子有关［1］。绝大多数子宫内膜癌为雌激素依赖性肿瘤，与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)关系密切。Maspin 作为抑癌基因，Maspin 的低表达也在子宫内膜的发生发展中起到一定的作用。uPA 为一种丝氨酸蛋白酶，通过细胞外基质的降解，导致肿瘤细胞的脱离、迁徙及侵袭，为子宫内膜癌的转移创造条件。本研究应用免疫组化SP 法检测Maspin、uPA、ER、PR 蛋白在子宫内膜癌中的表达情况及其相关性，以期了解Maspin、uPA 在子宫内膜癌发生、发展、浸润、转移中的作用及与雌、孕激素受体之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2004 年6 月至2014 年6 月在邯郸市中心医院病理科存档的子宫内膜癌患者组织蜡块50 例，按2009 年FIGO 标准进行分类，Ⅰ期24 例，Ⅱ期17 例，Ⅲ期7 例，Ⅳ期2 例;高分化(G1)22 例，中分化(G2)18 例，低分化(G3)10 例;肌层浸润深度＜1/2 肌层31 例，≥1/2 肌层19 例;伴有淋巴转移10例，无淋巴转移40 例。另取同期因妇科疾病诊刮或切除子宫的内膜标本:不典型增生的子宫内膜50 例，正常增殖期子宫内膜30 例。子宫内膜癌患者年龄30 ～75 岁，平均年龄49.03 岁，95%CI(44.50，54.20)岁。所有病例术前均无放疗、化疗或雌、孕激素使用史，无手术禁忌，且临床资料及病理资料完整。

1.2 主要实验试剂 Maspin 一抗为兔抗人多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)，uPA 一抗为鼠抗人单克隆抗体(即用型)(福州迈新生物技术有限公司)，SP 广谱超敏试剂盒、PBS 缓冲液、DAB 酶底物显色剂均购自福州迈新生物技术公司。

1.3 实验方法 每例标本经常规甲酸固定，石蜡包埋，连续组织切片成4 μm 的切片，分别进行HE 染色和免疫染色，以PBS 缓冲液代替一抗作阴性对照，操作步骤按产品说明书进行。

1.4 结果判定 采用双盲法观察结果，高倍镜下选择10 个高倍视野，计数100 个细胞，计算其平均阳性百分率。Maspin、uPA 阳性为细胞内出现棕黄色均匀颗粒，以胞浆为主，部分胞核表达。ER 阳性、PR 阳性均定位于细胞核，若同时可见胞浆着色的细胞，以细胞核出现明显棕黄-棕褐色颗粒为阳性细胞，而胞浆出现棕黄色为非特异性染色。根据着色强度和面积进行综合评分:(1)着色强度:0 分为无色，1 分为浅黄色，2 分为棕黄色，3 分为棕褐色。(2)着色面积:0 分为无阳性细胞，1 分为阳性细胞≤10%，2 分为阳性细胞11% ～50%，3 分为阳性细胞51% ～75%，4 分为阳性细胞＞75%;染色强度与阳性细胞百分比的乘积＜3 分为(－)，3 ～6 分为(+)，7 ～9 分为(+ +)，10 ～12 分为(+ + +);(－)和(+)为低表达，(+ +)和(+ + +)为高表达。见图1 ～6。

1.5 统计学分析 应用SPSS 19.0.0 统计软件，计数资料采用χ2检验和Fisher 精确概率法，两者相关性用非参数Spearman 等级相关分析，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 子宫内膜癌组织中Maspin、uPA、ER、PR 的阳性表达情况 ER 在正常增殖期子宫内膜，不典型增生子宫内膜，子宫内膜癌中阳性表达率逐渐降低，分别为100%，72.00%，56.00%，PR 的表达情况与ER 呈一致性，分别为96.67%，70.00%，54.00%，Maspin 同样表现为逐渐降低的趋势，分别为86.67%，52.00%，34.00%，而uPA 的表达情况却相反，表现为逐渐升高趋势，分别为13.33%，40.00%，54.00%，且组间比较均有统计学意义(P ＜0.05)。见表1。

图1 Maspin 蛋白在正常子宫内膜组织中的表达(SP 法×200)

图2 uPA 蛋白在低分化子宫内膜腺癌中的表达(SP 法×400)

图3 ER 蛋白在正常子宫内膜组织中的表达(SP 法×200)

图4 PR 蛋白在正常子宫内膜组织中的表达(SP 法×200)

图5 uPA 蛋白在高分化子宫内膜腺癌中的表达(SP 法×200)

图6 HE 染色对照片(×200)

表1 Maspin、uPA、ER、PR 蛋白在不同内膜组织中的表达 %

2.2 Maspin、uPA、ER、PR 在子宫内膜癌中的表达及其与临床参数的关系 Maspin 蛋白及uPA 蛋白的表达与子宫内膜癌的手术病理分期，肌层浸润深度，有无淋巴结转移组3 种病理特征均有关，子宫内膜癌的临床分期越晚，肌层浸润深度越深及有淋巴结转移，则二者的表达越高，差异有统计学意义(P ＜0.05)，但在年龄组阳性表达率无统计学意义(P ＞0.05)。而ER、PR 的表达与临床-病理分期及组织学分化均有关，PR 与肌层浸润深度及淋巴结转移情况无关(P ＞0.05)。见表2。

2.3 Maspin、uPA、ER、PR 在子宫内膜癌中表达的相关性 Maspin 与uPA 呈负相关(r = －0.341，P ＜0.05);Maspin 和ER 呈 正 相 关(r = 0.287，P ＜0.05);Maspin 和PR 呈正相关(r =0.293，P ＜0.05);uPA和ER 呈负相关(r = －0.293，P ＜0.05);uPA 和PR呈负相关(r = －0.339，P ＜0.05);ER 和PR 呈正相关(r =0.302，P ＜0.05)。

表2 Maspin、uPA、ER、PR 与子宫内膜癌临床参数的关系 %

3 讨论

3.1 Maspin 在子宫内膜癌中的表达及意义 Maspin是一种肿瘤抑制基因，其抑制肿瘤浸润转移、抑制血管生成及与其他抑癌基因的联合作用在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用。诸多资料研究显示，Maspin的表达缺失或低表达参与了人体多种肿瘤的发生发展，如食管鳞癌，乳腺癌，结肠癌，非小细胞癌等［2］。本研究结果显示:在子宫内膜由正常增殖期内膜到不典型增生再到子宫内膜癌的发展过程中，Maspin 阳性表达率逐渐降低(86.67%，52.00%，34.00%)，在Maspin 的表达与肿瘤临床病理特征间的关系上，研究发现临床期别越早，组织分化越好，Maspin 表达越高;有淋巴转移和肌层浸润深度组中，Maspin 阳性表达率明显降低，这与文献报道中Maspin 为抑癌基因一致，可能与Maspin 抑制肿瘤细胞穿透基底膜的能力有关。方世兰等［3］研究宫颈癌中Maspin 的表达与临床分期，肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关，且随访发现Maspin 阴性组和阳性组生存状态有密切关系。本实验结果与其一致，故可预测Maspin 可能参与了子宫内膜癌的转移、侵袭过程，其表达降低也暗示了子宫内膜癌的预后不良。

3.2 uPA 在子宫内膜癌中的表达及意义 uPA 是一种多功能丝氨酸蛋白水解酶，位于10 号染色体的长臂上，由10 个内含子和11 个外显子构成，成熟的mRNA长度为2.4kb，由成纤维细胞、单核细胞、中性粒细胞、上皮细胞及肿瘤细胞等合成，与其受体(uPAR)结合后激活纤溶酶原，使之活化为纤溶酶，进而降解细胞外基质，参与肿瘤的侵袭、转移，也可以直接激活血管内皮因子，降解细胞外基质和微血管基膜，为内皮细胞的迁移、增殖及肿瘤血管生成创造了良好的微环境，即对细胞的迁移和肿瘤侵袭转移过程有重要作用。据报道进展期乳腺癌的外周血循环肿瘤细胞uPAR mRNA 和蛋白水平的增加与恶性肿瘤如结肠癌、肺癌、胃癌和乳腺癌的预后密切相关［4－6］。本研究结果显示:uPA 蛋白的阳性表达率随着子宫内膜癌的发展过程逐渐升高(13.33%，40.00%，54.00%)，且子宫内膜癌的恶性程度越高，临床期别越晚，组织分化越差，伴淋巴结转移，uPA 的表达越高，可见uPA 是子宫内膜癌的发生、发展、浸润的重要因子，通过检测uPA 的表达情况可用来判断子宫内膜癌的预后，uPA 表达越高，患者的预后越差。

3.3 ER、PR 在子宫内膜癌中的表达及意义 对于ER、PR 在子宫内膜癌中的表达意义，文献中已有较多较深入的研究。临床中ER、PR 的水平已经作为子宫内膜癌激素治疗的主要指标［7］。研究发现雌、孕激素受体的高表达可引起肿瘤组织自身内分泌微环境的变化，启动雌、孕激素受体蛋白合成基因，合成具有结合活性的受体蛋白，从而获得了依赖激素生长的特性［8－11］。即使在低激素水平刺激下也可导致腺体活性过度，从而促使子宫内膜癌的发生［12］，ER、PR 水平为子宫内膜癌预后的独立影响因素，其高表达与分化好、期别早及预后好相关［13］。本研究结果显示:ER 的阳性表达率(100%，72.00%，56.00%)与PR 阳性表达率(96.67%，70.00%，54.00%)基本一致。在子宫内膜癌中的表达较正常组织降低，同时发现临床期别越晚，组织分化程度越低，伴有淋巴结转移，癌症浸润深度越深，ER、PR 阳性表达率越低，证明子宫内膜癌的发生与ER、PR 的水平降低有关。

3.4 ER、PR、Maspin、uPA 之间的相关性 内源性Maspin 是细胞uPA 的强抑制剂，通过与uPA 结合形成一种蛋白酶复合物，降低uPA 的释放能力，减少纤溶酶原活化为纤溶酶，从而降低细胞的浸润能力。本研究发现:Maspin 和ER、PR 的表达呈一致性，Maspin 与uPA 呈负相关(r = －0.341，P ＜0.05)，uPA 和ER呈负相关(r = －0.293，P ＜0.05)，可推测ER、PR、Maspin 蛋白表达的下调可能在一定程度上导致uPA蛋白的表达上调，共同参与子宫内膜癌的发生、发展、浸润、转移等过程。

综述所述，本实验结果认为ER、PR 及Maspin 均阳性而uPA 阴性的子宫内膜癌患者临床期别早，组织分化好，恶性程度低，其治疗效果及预后相对较好，术后可考虑合并内分泌治疗，相反则提示肿瘤临床期别晚，组织分化差，恶性程度高，术后需进一步辅助治疗及密切随访。但四者能否作为一个组合判断子宫内膜癌的预后及指导治疗，有待进一步大样本研究明确。

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