夏枯草醇提物对急性肝损伤大鼠的保护作用

陶 娜(遵义医学院附属医院,贵州 遵义 563000)



夏枯草醇提物对急性肝损伤大鼠的保护作用

陶 娜
(遵义医学院附属医院,贵州 遵义 563000)

目的：通过大鼠急性肝损伤模型,对夏枯草醇提物(Prunella vulgaris ethanol extracts，PVEE)的保肝作用进行探讨。方法：将SD大鼠48只随机分为正常组、模型组、阳性对照组、PVEE高剂量组、PVEE中剂量组、PVEE低剂量组,每组8只,给药后16h处死取肝脏,测定肝脏病理学、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)。结果：经药物处理后,阳性对照组与PVEE给药组肝损伤有不同程度改善；与模型组比较,阳性对照组、PVEE给药组的ALT、AST显著下降(P<0.05或P<0.01)，SOD、GSH-Px显著上升,MDA显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论：PVEE对CCl4引起的肝损伤大鼠具有一定的保护作用。

急性肝损伤；夏枯草；乙醇提取物

肝损伤是因病毒感染、饮酒过量、放射性损伤等多方面因素共同影响,致使肝脏出现病变反应。随着近几年来肝损伤病例的不断攀升,有效防治成为了当前国内外研究的重点和热点课题。有报道指出,氧化应激是导致肝损伤的主要机制[1]。夏枯草(PrunellavulgarisL.)是我国一味传统中草药,具有清火明目、软坚散结等功效,现代药理学研究证实夏枯草具有抗菌、降糖、抗炎、降压、抗病毒、抗肿瘤及活血化瘀等功效[2]。但目前关于夏枯草对肝损伤的研究较少,特别是有关夏枯草提取物对急性肝损伤的保护作用还未有研究报道。因此，为进一步了解夏枯草保肝的功效,本研究通过四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤模型,对夏枯草乙醇提取物(Prunella vulgaris ethanol extracts，PVEE)保肝作用进行探讨，为夏枯草的临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

自第三军医大学实验动物中心购入SD大鼠48只,均为雄性,体重为180～220g。常规条件下饲养1周后可纳入实验。

1.2 材料及试剂

1.2.1 试剂 四氯化碳购自重庆市九龙化学试剂厂,乙醇购于重庆川东化工(集团)有限公司,丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminas,ALT) 、门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate aminotransferas,AST) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidase,GSH-PX) 、 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛 (malondialdehyde,MDA) 均购自南京建成生物工程研究所,花生油市购。

1.2.2 夏枯草醇提物制备 夏枯草的干燥果穗以10倍量70%的乙醇回流提取2次,每次5h,合并提取液,然后加热回流蒸馏收取夏枯草浸膏,浸膏经一系列萃取蒸馏干燥等过程获得夏枯草提取物。

1.3 仪器与设备

TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)、MODULYOD-230冷冻干燥机(Thermoelectron corporation)、TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)等。

1.4 实验方法

1.4.1 建模、分组与给药 将48只大鼠随机分为6组,每组8只,分别设定为正常组、模型组、阳性对照组(甘利欣22.5mg/kg)、PVEE高剂量组(PVEE 1.0g/kg)、PVEE中剂量组(0.5g/kg),PVEE低剂量组(0.25g/kg)。PVEE三个剂量组与阳性对照组大鼠提前预防性给药6天,正常组运用蒸馏水行6天灌胃。第6日给药后1h,模型组、PVEE三个剂量组、阳性对照组经腹腔注入0.2mL·100g-1CCl4,完成急性肝损伤模型。禁止饮食,16h后处死取肝脏。

1.4.2 样本收集与检测指标 取肝左叶行病理组织学检测；分离血清,测定AST、ALT含量；取肝右叶组织制作成肝均浆(10%),取上清液,测定SOD、MDA、GSH-Px含量。

2 结果

2.1 各组大鼠血清肝损伤病理学测定结果

正常组8只大鼠肝损伤程度均为0级；模型组8只大鼠肝损伤程度：6只为3级,2只为2级；阳性对照组8只大鼠肝损伤程度：1只为3级,4只为2级,1只为1级；PVEE高剂量组8只大鼠肝损伤程度：5只为3级,2只为2级,1只为1级；PVEE中剂量组8只大鼠肝损伤程度：3只为3级,4只为2级,1只为1级；PVEE低剂量组8只大鼠肝损伤程度：1只为3级,5只为2级,2只为1级。

2.2 各组大鼠血清AST、ALT测定结果

模型组与正常组比较,ALT、AST测定结果均表现为显著上升(P<0.01)；阳性对照组、PVEE三个剂量组与模型组比较,ALT、AST测定结果均表现为显著下降(P<0.05或P<0.01),见图1。

2.3 各组大鼠血清SOD、MDA、GSH-Px测定结果

模型组与正常组比较,SOD与GSH-Px表现为显著下降(P<0.01)；阳性对照组、PVEE三个剂量组与模型组比较,SOD与GSH-Px均表现为显著上升(P<0.05或P<0.01)；模型组与正常组比较,MDA表现为显著上升(P<0.01)；阳性对照组、PVEE3个剂量三组与模型组比较,

MDA均表现为显著下降(P<0.05),见表1。

图1 PVEE对血清AST、ALT的影响

注：与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01；与正常组比较,##P<0.01。

表1 PVEE对急性肝损伤大鼠SOD、MDA、GSH-Px的影响

组别剂量(mg/kg)SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)正常组-154.57±22.182.51±0.57179.61±23.25模型组-78.61±12.51##5.65±0.78##76.51±12.64##阳性对照组甘利欣22.5mg/kg143.25±19.57**3.45±0.81*101.57±16.17*PVEE低剂量组PVEE62.5mg/kg95.31±17.14*3.85±0.78*97.85±19.58*PVEE中剂量组PVEE125mg/kg112.65±18.51**3.47±1.25*128.15±20.67*PVEE高剂量组PVEE250mg/kg129.21±15.57**3.51±1.17*155.24±21.24*

注：与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01；与正常组比较,##P<0.01。

2.4 各组大鼠肝组织病理学变化

根据病理学观测结果,正常组大鼠肝组织的排列非常整齐,并且排列非常规则有序(见图2A)；模型组大鼠肝细胞表现为细胞缩小、胞浆疏松,并且呈现为点块状坏死,特别是肝小叶结构的变化最为严重(见图2B)；PVEE高、中、低剂量三组以及阳性对照组则病变程度和范围均有相应程度的改善(见图2C、D、E、F)。阳性对照组的病变改善程度和范围好于PVEE三个组。PVEE高、中、低组病变改善效果比较无显著差异。

图2 各组大鼠肝组织病理学变化

3 讨论

我国是一个有着五千年文化的文明国家,其丰富的天然资源,给我们带来诸多药物资源,造福了历代中国人。中草药作为我国特有的药物资源,其取材方便、资源丰富、价格低廉,使其一直延续至今。夏枯草性味苦寒,是一味具有散结解毒、清肝明目功效的中草药,含有非常丰富的活性化学成分。有报道发现[3],夏枯草合剂可有效改善D-氨基半乳糖+脂多糖、CCl4等引起的肝损伤。因此,本文在实验中通过动物模型,对PVEE的保肝作用进行探讨。研究结果显示,经CCl4处理后模型组大鼠肝脏血清AST、ALT显著上升；另病理学测定结果显示,模型组大鼠肝脏损伤程度非常严重,6只为3级,2只为2级。相较于模型组,PVEE三组大鼠AST、ALT表现为显著下降,且病理学结果显示,肝脏受损程度均有不同程度的改善。这充分表明,PVEE对因CCl4致急性肝损伤的大鼠具有一定的保肝效果。

当CCl4进入到机体之后,可引发一系列的反应,在这个过程中,会导致抗氧化物大量消耗,引起机体氧化应激状态。而在CCl4致肝损伤的过程中,氧化应激是最主要的反应,此时抗氧化系统与氧化系统失衡,引起组织受损[4]。SOD、GSH-Px可充分反映机体氧自由基的清除能力,体现细胞膜的功能和结构的完整性。本研究中,相较于正常组,模型组的SOD、GSH-Px表现为显著下降,MDA表现为显著上升,表明CCl4可致使大鼠出现急性肝损伤。PVEE三组与模型组相比,SOD、GSH-Px表现为显著上升,MDA表现为显著下降,表明PVEE在促进SOD、GSH-Px活性,控制MDA活性上具有显著效果。有文献报道夏枯草提取物含有许多复杂的化学成分,包括糖类、三萜类( 熊果酸、齐墩果酸) 、有机酸类、香豆素类、黄酮类(木樨草素、芦丁、异荭草素和木樨草苷)、挥发油类等,而其中的黄酮类物质具有很强的抗氧化作用。因此,以上作用可能与PVEE中含量较丰富的黄酮类物质有关[5,6]。由此可知,PVEE可有效改善过脂质过氧化损伤,强化肝脏的抗氧化功能,进而起到有效的肝脏保护作用。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:198.

[2] 宋昊,朱璟,金梅花,等.祁州漏芦不同溶剂提取物对急性肝损伤模型小鼠的保护作用[J].中国药房,2014,24(3):205-208.

[3] 章圣朋,邓子煜,黄成,等.夏枯草总三萜对四氯化碳致急性肝损伤大鼠的保护作用[J].安徽医科大学学报,2012,47(9):1054-1058.

[4] 杨亚军,李庆耀,梁生林,等.车前草总三萜对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用[J].中成药,2012,34(1):140-142.

[5] 张淼,董宝婧,苗芳,等.夏枯草提取物的抗氧化活性[J].草业科学,2012,29(9)：1477-1481.

(责任编辑：魏 晓)

2015-03-23

陶娜(1984-),女,遵义医学院附属医院药师,研究方向为心血管疾病药理。

R285.5

A

1673-2197(2015)15-0020-02

10.11954/ytctyy.201515007