哮喘类中药制剂中非法添加化学药品检测方法研究

张 鹤，孟宪生，朱禹澎，毕 帅，李 征

(1.辽阳市食品药品检验所，辽宁 辽阳 111000；2.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600)



哮喘类中药制剂中非法添加化学药品检测方法研究

张 鹤1，孟宪生2*，朱禹澎1，毕 帅1，李 征1

(1.辽阳市食品药品检验所，辽宁 辽阳 111000；2.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600)

目的：建立快速、准确、高灵敏度测定哮喘类中药制剂中非法添加醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、醋酸地塞米松、泼尼松、地塞米松的分析方法，并对10批市售药品进行检测。方法：采用TLC法对非法掺入的化学药物进行定性鉴别，并以HPLC法测定含量，采用C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-水(40∶60)为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为240nm。结果：市售药品中，3批样品检测出非法掺有醋酸泼尼松，其重量百分含量分别为0.4237%、0.5061%、0.6035%。结论：该方法操作简便、选择性强、灵敏度高、结果准确可靠，可以有效检测出哮喘类中药制剂中非法添加的糖皮质激素类化学药品。

哮喘类中药制剂；高效液相色谱法；糖皮质激素；醋酸泼尼松

哮喘作为常见病、多发病，已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病，哮喘本身不易治疗，且易引起许多其他疾病。中药以其疗效独特、毒副作用小、安全有效的特点在治疗慢性病方面虽有其优势，但短期疗效不如西药理想。近年来，一些不法生产厂家及私人诊所为了迎合患者用药不良反应少、见效快的需求，以纯中药制剂之名、行添加化学药之实，在中成药中非法添加化学药品，患者在毫不知情的情况下长期、大量服用此类制剂，极易引发严重的不良反应，损害身体健康[1]。本文参考有关文献[1-7]，拟建立检测方法，对哮喘类中药制剂中非法添加的五种糖皮质激素类化学药品(醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、醋酸地塞米松、泼尼松、地塞米松)进行定性和定量分析。建立了快速、准确的分析方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津公司2010高效液相色谱仪，LC-10AT vp输液泵，SPD 10Avp可变波长紫外检测器，TA-130柱温箱，ANASTAR色谱数据处理系统。

1.2 试剂与试药

对照品：醋酸泼尼松(10012-0105)，醋酸氢化可的松(0013-0106)，泼尼松(100199-199401)，醋酸地塞米松(100122-200804)，地塞米松(100129-200303)，以上对照品均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，10批样品购于药房及私人诊所。

2 方法与结果

2.1 TLC法测定

2.1.1 供试品溶液制备 取样品约一次性用量，加甲醇适量，超声溶解20min，滤过，将滤液于水浴上蒸干，加甲醇1mL使溶解，即得。

2.1.2 对照品溶液制备 取醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、泼尼松、醋酸地塞米松、地塞米松对照品适量，加甲醇制成各含1mg/mL的对照品溶液。

2.1.3 薄层色谱法 按薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μL，对照品溶液各5μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮(1.5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视。结果显示，有3批供试品在醋酸泼尼松处出现阳性斑点。

2.2 HPLC法测定

2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(40∶60)为流动相；检测波长为240nm。

2.2.2 对照品溶液配制 取上述5种对照品溶液各10mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，制成0.1mg/mL的储备液。分别精密吸取储备液，甲醇适量稀释，制成每1mL中约含1、5、10、25、50μg的系列标准溶液。

2.2.3 供试品溶液配制 取样品适量，研匀，精密称取一次口服剂量，加甲醇适量溶解，定容至50mL容量瓶中，超声提取20min，放冷，加甲醇补足减失的重量，过滤，精密吸取2mL，加流动相定容至10mL容量瓶中，过0.45μm微孔滤膜滤过，备用。

2.2.4 空白溶液配制 取TLC法鉴别项下未检出添加化学药品的供试品，按上述供试品制备方法配制，制成空白溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适用性试验 取对照品溶液、供试品溶液和空白溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。由色谱图可知，各目标对照品分离度良好，空白溶液中的中药成分不干扰测定。见图1。

图1 供试品(A)、对照品(B)、空白(C)色谱

2.3.2 检测限 以信噪比为3∶1时的对照品进样量作为检测限，醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、泼尼松、醋酸地塞米松、地塞米松的检测限分别为1.2、1.1、1.4、1.3、1.3ng。

2.3.3 线性关系试验 取各组分浓度约为 1、5、10、25、50μg/mL的系列标准溶液10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱峰峰面积。以对照品浓度(μg/mL)为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。结果表明，各组分浓度在1～50μg/mL范围内线性关系良好。结果见表1。

表1 标准曲线及线性关系考察结果

2.3.4 稳定性试验 精密吸取混合对照品溶液分别于0、2、4、6、12h进样，记录色谱峰面积，计算RSD。结果表明，对照品溶液在12h内稳定。5种目标对照的RSD分别为0.61%、0.59%、0.68%、0.49%、0.72%。

2.3.5 重复性试验 取供试品(含醋酸泼尼松)精密称定6份，按供试品制备方法制备供试品溶液，吸取10μL注入高效液相色谱仪，将峰面积带入标准曲线计算含量。结果RSD为1.3%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 回收率试验 取不含添加化学物质的中药制剂1批，称取9份，每份取1次口服剂量，分别加入5种对照品0.5、1.0、2.5mg，每个浓度平行配制3份，按供试品制备方法项下制备供试品溶液，吸取10μL注入液相色谱仪进行测定，计算回收率。5种目标对照品的回收率分别为98.5%、99.2%、98.9%、99.1%、98.8%，RSD均<1.5% 。

2.3.7 含量测定 对抽取的10批次治疗哮喘类中药制剂进行检测， 结果在2批平喘胶囊及某私人诊所配制的止咳平喘制剂供试品溶液的液相色谱中呈现与醋酸泼尼松对照品色谱图保留时间相一致的色谱峰。对检测到的成分进行定量，结果显示：2批平喘胶囊分别含醋酸泼尼松0.4237%、0.5061%；某私人诊所配制的止咳平喘制剂含醋酸泼尼松0.6035%。

3 讨论

哮喘类中药制剂通常含有多味中药，成分较多，如仅采用TLC法专属性不强，容易出现假阳性结果，所以本文在采用TLC法粗筛定性鉴别后，再采用HPLC法进行定量分析，可快速、准确地对哮喘类中药制剂中非法添加的醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、醋酸地塞米松、泼尼松、地塞米松同时进行检测，专属性强，5种化合物可达到基线分离。

在波长200～400nm范围进行扫描，醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、醋酸地塞米松、泼尼松、地塞米松的紫外最大吸收波长分别为240、243、239.5、239.5、239.5nm，为使各化合物均有较大的紫外吸收，有较好的检测灵敏度，选择240nm作为检测波长。

本文建立的方法操作简便、快速，结果准确、可靠，能够用于检测治疗哮喘类中药制剂非法添加的糖皮质激素，可作为哮喘类中药制剂中质量和安全用药的控制 。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知·化学药和生物制品卷(2005年版)[S].北京:人民卫生出版社,2005：243-244,437-445.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].二部.北京：化学工业出版社,2005.

[3] 董永成，杜士明,陈永顺.中成药及保健品非法添加化学成分的类型、危害及对策[J].时珍国医国药，2006，17(8)：1601-1602 .

[4] 李小敏，毕雪艳，李莉.平喘镇咳中成药中非法添加两种化学药品检验方法的研究[J].中国药事，2007，21(6)：447．

[5] 刘金艳，赵春杰，王超众.抗风湿类中成药中添加糖皮质激素的检测[J].中国药品标准，2008,9(6)：424-426 .

[6] 胡毅坚，吴春芬.高效液相色谱法测定复方地塞米松霜中2组分的含量[J]. 中国药房，2006，17(20)：1546 .

[7] 吴春敏,陈海滨.中成药中非法添加化学物质的现状与对策[J].海峡药学，2003(6):107.

[8] 刘吉金.降压保健品及中成药中非法添加化学成分的快速检测方法研究[J].中成药,2008,30(1):144-146.

(责任编辑：魏 晓)

Study on the Method for Detecting the Chemical Drugs Added Illegally to Asthma in Chinese Medicine Preparation

Zhang He1，Meng Xiansheng2*，Zhu Yupeng1，Bi Shuai1，Li Zheng1

(1.LiaoYang Institute for Food and Drug Control,Liaoyang 111000, China;2.College of pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)

Objective:To establish a quick，accurate，sensitive method for analysis of acetamidophenol，prednisone hydrocortisone，dexamethasone，prednisonand dexamethasone mixed in Asthma traditional Chi-nese medicine．Methods:Qualitative identification of the chemical drugs illegally adulterated with TLC method，And with the HPLC method for the determination of Using C18column(250mm×4.6mm，5μm)， Using ace-tonitrile and water (40∶60) as the mobile phase, A flow rate of 1mL/min,The detection wavele-ngth of 240nm．Results:Prednisone acetate was found in 3 form ulations,and the percentages of contents were 0.4237%、0.5061%、0.6035%．Conclusion:The method is simple，selectire，sensitive，reliable and accurate,and it can be used to detect adrenal cortical horm one illegaly added into the traditional Chinesemedicine．

Asthma Preparations of Traditional Chinese Medicine；High Performance Liquid Chromatography；Sugar Cortical hormone；Prednisone Acetate

2015-02-11

张鹤(1982-)，女，辽阳市食品药品检验所主管中药师，研究方向为中药检验及质量标准。

孟宪生(1964-)，男，辽宁中医药大学教授，博士生导师，研究方向为中药组分配伍、代谢组学及药品质量分析。Email：mxsvvv@126.com

R284

A

1673-2197(2015)13-0013-03

10.11954/ytctyy.201513006