京大戟中萜类含量测定

贾云云，罗士香

(淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300)



京大戟中萜类含量测定

贾云云，罗士香

(淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300)

目的：考察京大戟醋制前后总萜类成分的含量变化，为京大戟醋制减毒机理的研究提供参考。方法：以香草醛-冰醋酸为显色剂，大戟二烯醇为对照品，运用比色法测定京大戟中总萜类成分的含量。结果：京大戟中总萜类成分经过醋制后略有降低，即生品>醋制品。结论：京大戟醋制后，总萜类成分含量有所降低，为研究京大戟醋制减毒机理提供了科学依据。

京大戟；毒性；醋制京大戟；含量变化

京大戟为大戟科多年生草本植物大戟EuphorbiapekinensisRupr.的根，是我国传统中药，收载于历次版本的《中华人民共和国药典》，性味苦、寒，有毒，归肺、脾、肾经，具有泻水逐饮、消肿散结的功效，用于水肿胀满、胸腹积水、痰饮积聚、气逆喘咳、二便不利等证的治疗[1]。京大戟主产于江苏南京、扬州、邳州等地，此外，四川、福建、江西、湖南、湖北等地亦产[2]。京大戟为有毒中药，其毒性严重制约着中医临床用药的安全。 安全有效是药物的基本属性，药品能否被社会接受不仅取决于其有效性的强弱，还在于其毒性的高低。而京大戟对消化系统、肝肾功能等有强烈的刺激性和致炎、促发致癌的毒性，严重制约着临床用药的安全，也为新药创制带来了困难[3-4]。本文考察京大戟醋制前后总萜类成分的含量变化，为京大戟醋制减毒机理的研究提供一定的参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

九阳牌电磁炉、高速万能磨粉机(天津泰斯特)、电子天平、电热鼓风式干燥箱、UV2401可见紫外分光光度仪(日本岛津公司)、HH-S恒温水浴锅(江苏国胜实验仪器厂)、电炉(天津泰斯特)、电热鼓风式干燥箱、甲醇(色谱纯)、冰醋酸(分析纯)、高氯酸(优质纯)、香草醛(分析纯)。

1.2 试药

京大戟药材购自安徽省毫州市药材总公司，产地为河北(批号：101206)，经南京中医药大学巢建国教授鉴定为大戟科植物大戟(EuphorbiapekinensisRupr.)的干燥块根。

2 方法

供试品制备：京大戟生品(JDJ-1)：取生京大戟，大小分档，除去杂质，于40℃烘箱干燥，过四号筛。京大戟醋制品(JDJ-2)：取净京大戟，大小分档，加入食醋拌匀，另加入纯净水(京大戟∶食醋∶水为10∶3∶40)，拌匀，浸润2h，文火煮沸，煮至醋被吸尽。取出，室温凉至六七成干，40℃烘箱干燥，打粉，过四号筛。

2.1 总萜显色条件考察

2.1.1 显色剂用量考察 ①香草醛-冰醋酸溶液的用量：精密称取大戟二烯醇6.06mg，至50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成大戟二烯醇标准品溶液。精密量取上述溶液1mL分别置于5个具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5mL，高氯酸0.8mL，摇匀。于70℃水浴加热30min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂作为空白，按照分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录ⅤA分光光度法)于400～800nm进行全波长测定。结果见表1，见图1(A)。

表1 香草醛-冰醋酸溶液用量考察

结果表明：随着香草醛-冰醋酸溶液用量的增加，吸收度也相应增加。当加入5%香草醛-冰醋酸的量为0.5mL时吸收度最大，表明反应已近完全，所以选择加入0.5mL 5%香草醛-冰醋酸溶液。

②高氯酸用量：精密量取大戟二烯醇一次稀释液溶液1mL分别置于5个具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，摇匀。于70 ℃水浴加热30min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂为空白，采用分光光度法于400～800nm进行全波长测定。结果见表2，见图1(B)。

表2 高氯酸用量考察

结果表明：随着高氯酸溶液用量的增加，吸收度增加。当加入量为0.6mL时吸收度最大，表明此时溶液反应已近完全，故选择加入0.6mL高氯酸溶液。

2.1.2 加热温度考察 精密量取大戟二烯醇标准品溶液1mL置于5个具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，摇匀。于60℃、70℃、80℃、90℃，沸水浴加热30min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂为空白，采用分光光度法于400～800nm进行全波长测定。结果见表3，见图1(C)。

表3 加热温度考察

结果表明：随着温度的升高，溶液的吸收度增加，说明反应仍在进行中，沸水浴时吸收度最大，故选择加热温度为100℃。

2.1.3 加热时间考察 精密量取大戟二烯醇标准品溶液0.5mL置于5个具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，摇匀。于70 ℃水浴加热15min、30min、45min、60min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂为空白，采用分光光度法于400～800nm进行全波长测定。结果见表4，见图1(D)。

表4 加热时间考察

结果表明：随着加热时间的延长，溶液的吸收度不断增加。故综上精密量取大戟二烯醇标准品溶液0.5mL分别置于5个具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，摇匀。于100℃水浴加热15min、30min、45min、60min、90min取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂为空白，采用分光光度法于400～800nm进行全波长测定。结果见表5，见图1(E)。

表5 沸水浴加热时间考察

结果表明：随着加热时间的增长，溶液的吸收度不断增加，在沸水浴中当加热时间为45min时吸收度最大，表明当加热到45min时反应已近完全，但紫外扫描图谱出现相邻的两个峰，而当反应达到30min时只出现一个最大吸收峰，所以选择的反应时间为30min。 综上，显色条件为：精密量取大戟二烯醇标准品溶液0.5mL置于具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，摇匀，于沸水浴加热30min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，混匀。

2.2 京大戟及其炮制品总萜类含量测定

2.2.1 供试品溶液制备 分别取两种京大戟供试品粉末(过65目筛)0.2g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL称重，超声(功率250W，频率50kHz)处理30min后再称重，以甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.2.2 吸收波长确定 取对照品0.5mL和供试品0.1mL置于具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，摇匀。于100 ℃水浴加热30min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂为空白，于400～800nm处扫描，由扫描结果确定测定波长为570nm，结果见图2、图3、图4。

图1 京大戟总萜显色条件考察

图2 大戟二烯醇显色后可见光谱

图3 京大戟生品显色后可见光谱

图4 京大戟醋制品显色后可见光谱

2.2.3 线性关系考察 精密量取大戟二烯醇标准品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置于具塞试管中，水浴挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，摇匀。于100 ℃水浴加热30min，取出，流水冷却2min，精密加入冰醋酸5mL，摇匀。分别以相应的试剂为空白，照分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅴ分光光度法)于570nm处测定吸收度。以吸收度为纵坐标(Y)，对照品的量(mg)为横坐标(X)，绘制标准曲线，得回归方程：y=9.949 8x-0.054 9(r=0.999 1)。大戟二烯醇在12.12～96.96μg之间与峰面积呈现良好的线性关系。结果见表6，线性关系见图5。

2.2.4 精密度实验 取0.5mL对照品显色后溶液，连续测定6次，测定结果见表7，结果RSD为0.17%。表明该方法精密度良好。

表6 大戟二烯醇标准曲线

图5 大戟二烯醇标准曲线

序号吸收度A平均吸收度ARSD(%)10．67020．66930．6700．6690．1740．66950．66860．667

2.2.5 稳定性实验 以JDJ-1供试品显色后溶液为考察对象，间隔若干时间测一次，共测7次，测定结果见表8，RSD为0.31%，结果表明供试品当中总萜类成分在2h内稳定。

表8 稳定性考察结果

2.2.6 重复性实验 依法处理JDJ-1供试品 6份，依上法测定。重复性结果总萜类的平均含量为55.751mg·g-1，RSD为2.7%，结果表明该试验重复性较好，结果见表9。

表9 总萜类成分重复性试验结果

2.2.7 加样回收率实验 精密称取JDJ-1供试品 6份，每份0.1g，依上法制得供试品溶液，取0.1mL置于具塞试管中，并向其中加入0.2mL(0.121 2mg·mL-1)大戟二烯醇标准品溶液。依法测定，并计算平均回收率以及RSD，结果见表10。

表10 总萜类成分加样回收率试验结果

2.2.8 样品含量测定 取2份供试品，如法测定。样品测定结果见表11。

表11 京大戟不同炮制品含量测定结果

3 结果与讨论

在考察显色条件时，经过多次对照试验，最终确定加入5%香草醛-冰醋酸0.5mL和高氯酸0.6mL，并放入沸水浴加热30min反应基本完全，尤其在进行沸水浴加热时间考察时，当加热45min紫外扫描就会出现两个尖峰，对后续测定造成干扰，因此最终确定加热时间为30min。

该实验结果表明，京大戟中总萜成分含量在醋制后比生品含量略低，即含量高低为：京大戟生品>京大戟醋制品，说明醋煮对京大戟中总萜含量有一定的降低作用，该实验结果也可以推测京大戟醋制后总萜类成分含量的降低可能与京大戟醋制减毒有一定的相关性。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2010:209-210.

[2] 国家中医药管理局.《中华本草》蒙药卷[M].上海:上海科学技术出版社,2004:261-262.

[3] 张乐林,孙立立.京大戟现代研究概述[J].中华中医药学刊,2011,29(3):577-579.

[4] 张乐林,葛秀允,孙立立.醋制对京大戟毒性和药效的影响[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(19):276-279.

(责任编辑：尹晨茹)

The Content Determination of the Total Terpene in Radix Euphorbiae Pekinensis

Jia Yunyun, Luo Shixiang

(Huaian Institute for Food and Drug Control,Huaian 223300,China)

Objective:To compare the diversity of contents of the totel terpene in Radix Euphorbiae Pekinensis before and after being processed.It provides certain information for the reduce of Radix Euphorbiae Pekinensis.Methods:With vanillin-glacial acetic acid as show color agent, with euphol as reference substance.The content determination of the total terpene was established by colorimetry.Results:After being processed,the totel terpene content declined in a whole.Conclusion:This method is accurate, reliable and sensitive for determination of euphol in Radix Euphorbiae Pekinensis.

Radix Euphorbiae Pekinensis;Toxicity;Vinegar-preparing Radix Euphorbiae Pekinensis;Content change

2015-01-07

贾云云(1988-)，女，江苏省淮安市食品药品检验所药师，研究方向为药品不良反应监测。

R284.1

A

1673-2197(2015)10-0038-04

10.11954/ytctyy.201510016