正交法优选苦参切制工艺研究

2015-04-26李月侠金传山

亚太传统医药 2015年2期

关键词：母液苦参碱苦参

李月侠，吴飞，金传山*

(1.安徽中医药大学药学院，安徽合肥 230031；2.亳州职业技术学院，安徽亳州 236800)

正交法优选苦参切制工艺研究

李月侠1，吴飞2，金传山1*

(1.安徽中医药大学药学院，安徽合肥 230031；2.亳州职业技术学院，安徽亳州 236800)

目的：优选苦参切制工艺，为中药饮片企业提供切实可行的指导方案。方法：以浸泡时间、闷润时间、切片厚度和干燥温度作为考察因素，苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱及饮片外观为指标，通过正交试验优选苦参的最佳切制工艺。结果：优选的苦参最佳切制工艺为浸泡30min，闷润至透，切制厚度3mm，80℃干燥。结论：该法可作为苦参切制的可行方法。

苦参；切制工艺；正交试验

苦参为豆科槐属植物苦参(SophoraFlavescensAit.)的干燥根，性苦、味寒，具清热燥湿、杀虫、利尿等功效[1]。现代药理研究[2-3]发现：苦参有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肝纤维化、抗心律失常、抗恶性肿瘤、免疫抑制等作用。随着苦参在医药行业、农业杀虫剂、护肤品等方面的广泛应用，苦参饮片需求量日益增加。但由于苦参切制工艺研究较少，各家药企往往凭经验操作，导致苦参饮片的内外质量参差不齐。因此，本研究采用正交试验优选苦参的切制工艺，为苦参饮片生产提供切实可行的指导方案。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪(G1316A柱温箱、G1329B自动机进样器、G1314C可变波长检测器)、Thermo NH2柱，SK250HP型超声清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)，AUW220D型十万分之一电子天平(日本SHIMADZU公司)；HH-S2数显恒温水浴锅(金华市晶玻实验仪器厂)。

1.2 试剂

三氯甲烷为分析纯(天津大茂化学试剂厂)；水为纯净水(杭州娃哈哈饮料科技有限公司)；乙腈为色谱纯(天津四友精细化学品有限公司)；无水乙醇为色谱纯(天津科密欧化学试剂有限公司)；磷酸为色谱纯(天津科密欧化学试剂有限公司)；对照品苦参碱(中国食品药品检定研究院，批号110805-200508)；槐定碱(中国食品药品检定研究院，批号110784-200804)；氧化苦参碱(中国食品药品检定研究院，批号110780-201007)。苦参药材由安徽协和成药业饮片有限公司提供，经安徽中医药大学金传山教授鉴定为豆科植物苦参(SophoraFlavescensAit.)的干燥根。

2 苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo-NH2(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-无水乙醇-3%磷酸(80∶10∶10)，流速0.8mL/min,检测波长210nm,柱温40℃，进样量10μL。

图1 苦参药材HPLC色谱

2. 2 对照品溶液制备

分别取苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱(以92.3%计算)对照品适量，精密称定，加乙腈-无水乙醇(80∶20)溶解，分别制备含苦参碱0.457 0mg、槐定碱0.563 0mg、氧化苦参碱2.091 9mg的1mL溶液，作为对照品母液。分别精密量取苦参碱对照品母液0.05mL、槐定碱对照品母液0.15mL和氧化苦参碱对照品母液0.5mL移至10mL容量瓶，加乙腈-无水乙醇(80∶20)定容，得混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备[1]

取本品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，置于具塞锥形瓶，加浓氨试液0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密塞，称定重量，超声处理30min(250W，53kHz)，放冷，再称定重量，加入三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，加入在中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)混合溶液各20mL洗脱，合并收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量溶解，转移至10mL容量瓶，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

图2 混合对照品HPLC色谱

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系精密吸取“2.2”项已配制的混合对照品溶液5.0、15.0、25.0、35.0、45.0μL注入液相色谱仪，按“2.1”项色谱条件测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程分别为苦参碱：Y=45.890X-25.030(r=0.999 9)；槐定碱：Y=138.54X-76.600(r=0.999 8)；氧化苦参碱：Y=1 893.5X-922.67(r=0.999 9)。结果表明苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱分别在0.011 4～0.102 6μg、0.042 2～0.379 8μg、0.523～4.707μg范围内线性关系良好。

2.4.2 精密度试验精密吸取“2.2”项已配制混合对照品溶液10μL，连续进样6次，记录色谱峰面积。结果表明，苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱峰面积的RSD分别为0.69%、0.96%、0.14%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验取苦参药材粉末(过三号筛)6份，按“2.3”项供试品溶液制备方法同时制备供试品溶液6份，测定其含量，结果显示苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱峰面积的RSD分别为1.46%、1.70%、1.36%，表明本方法重复性较好。

2.4.4 稳定性试验取同一苦参药材供试品溶液，分别于0h、6h、12h、18h、24h进样测定，结果显示苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱峰面积的RSD分别为1.71%、1.82%、1.22%，表明供试品溶液24h内稳定性良好。

2.4.5 加样回收率试验精密吸取“2.2”项已配制的苦参碱对照品母液0.15mL、槐定碱对照品母液0.5mL、氧化苦参碱对照品母液2.0mL置于具塞锥形瓶，挥干溶剂，共6份。分别取已知含量的苦参药材粉末约0.15g，精密称定，置上述对照品溶液中，按“2.3”项方法制备供试品溶液，同样制备6份加样回收溶液。精密吸取加样回收溶液10μL，注入液相色谱仪，测定。计算回收率，结果见表1。

3 苦参切制工艺优选

3.1 正交设计

在预试验基础上，初步确定以苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱为主要指标，采用正交试验考察苦参质量的主要影响因素浸泡时间、切片厚度、干燥温度，选用L9(34)优选实验，水平因素见表2。

表1 回收率测定结果

表2 水平因素

3.2 苦参饮片切制

取直径1～2cm档苦参干燥根适量，除去小支根和残留根头，洗净，按上述设计水平因素考察凉水浸泡(用水量以刚好没住药材为宜)，闷润至透，切厚片，干燥。

3.3 含量测定

3.3.1 苦参原药材含量测定精密吸取“2.2”项已配制的混合对照品溶液及苦参药材制备的供试品溶液各10μL，按“2.1”项色谱条件测定苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量。结果见表3。

表3 苦参药材含量测定 (%)

3.3.2 苦参饮片含量测定精密吸取“2.2”项已配制的混合对照品溶液及按“3.1”项制备的的苦参饮片供试品溶液9份各10μL，按“2.1”项色谱条件测定苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量。直观分析结果为：苦参切制影响因素A>C>B，见表4。

表4 苦参切制工艺正交试验结果

3.4 方差分析

直观分析，A、C因素对苦参生物碱含量均有显著影响，B因素无显著影响。

表5 苦参切制工艺方差分析

3.5 试验结果分析

由表4、表5试验结果可见，苦参切制主要影响因素为浸泡时间和干燥温度，结合实际生产情况，确定苦参最佳切制工艺为A1B2C3，即浸泡0.5h，闷润至透，切制3mm厚片，80℃干燥。

3.6 工艺验证

按上述优化工艺最佳条件，取三批苦参干燥根(直径1～2cm档)制备苦参饮片，对最佳工艺进行验证，结果表明确立的最佳切制工艺稳定、适用。见表6。

表6 工艺验证结果 (%)

4 讨论

苦参所含生物碱种类较多，文献研究[4-9]表明苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱在抗病毒、抗炎、免疫抑制、抗心律失常、抗肿瘤等方面有着较为显著的作用，因此苦参饮片内在质量控制选择苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱作为指标。资料[10]表明，苦参碱和氧化苦参碱存在相互转化，《中国药典》2010版一部苦参含量项方法可测定苦参碱和氧化苦参碱的总量，本试验以苦参碱和氧化苦参碱的总量为指标。

通过正交试验法，确立苦参的最佳切制工艺为：浸泡30min，闷润至软，切制3mm厚片，80℃干燥，对于规范苦参的切制工艺、指导饮片企业生产及保证苦参饮片质量具有一定意义。

苦参切制工艺软化环节受众多因素影响，如原药材大小、含水量和浸泡用水温度、体积及天气温度、湿度等影响，浸泡和闷润时间参数不能一概而论，且由于苦参干燥根质地坚硬，所需软化时间较长，严重制约了苦参的大规模生产；另一方面，随着苦参的社会需求量日益增加，苦参资源逐步改为家种。因此，建立苦参的趁鲜切制工艺，以减少软化环节带来的困扰尤为重要。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京: 中国医药科技出版社，2010:188.

[2] 陈慧芝，包海鹰.苦参的化学成分和药理作用及临床研究概括[J].人参研究，2011(3)：31-36.

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(责任编辑：李岚春)

2014-09-18