HPLC法测定安神补心片中二苯乙烯苷含量

刘小双,蒲旭峰,罗 霄

(1.成都中医药大学 药学院,四川 成都 611137,2.成都市食品药品检测中心,四川 成都 610045)



HPLC法测定安神补心片中二苯乙烯苷含量

刘小双1,蒲旭峰2,罗 霄2

(1.成都中医药大学 药学院,四川 成都 611137,2.成都市食品药品检测中心,四川 成都 610045)

目的：研究安神补心片中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的高效液相测定方法。方法：色谱柱：Welchrom C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相：乙腈-水(25∶75);流速：0.9mL/min;检测波长：320nm;柱温：25℃；进样量：10μL。结果：2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.019 67～0.196 60μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为99.220%，RSD为0.54%(n=6)。结论：该方法操作简单、结果准确、专属性强，可用于该制剂的质量控制。

安神补心片；高效液相色谱法；2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；含量测定

安神补心片是由丹参、五味子(蒸)、石菖蒲、合欢皮、菟丝子、墨汉莲、女贞子(蒸)、首乌藤、地黄、珍珠母等10味中药加工而成[1]。其能养心安神，用于心血不足引起的心悸失眠、头晕耳鸣。安神补心片现行标准为国家药品标准(试行)WS-11407(ZD-1407)-2002[1], 为进一步控制药品质量，保证其临床用药安全有效，以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(以下简称二苯乙烯苷)为对象进行实验研究。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Waters e2695(美国)；电子分析天平：METTLER AE-240(瑞士)；试药：乙腈为色谱纯(Sigma)，水为超纯水；其他试剂试药均为分析纯；对照品：二苯乙烯苷(批号：110844-201109，中国食品药品检定研究院)。

2 方法与结果

2.1 二苯乙烯苷含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Welchrom C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm)；流动相：乙腈-水(25∶75)；流速：0.9mL/min；检测波长：320nm；进样量：10μL，柱温：25℃。

2.1.2 对照品溶液制备 取二苯乙烯苷对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加稀乙醇制成10.38μg/mL的溶液，备用。

2.1.3 供试品溶液制备 将本品研细，取粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，称定质量，加热回流30min，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，备用[2，3，5]。

2.1.4 阴性样品溶液制备 根据处方称取除首乌藤以外的其他药材适量制备阴性样品，再按“2.1.3”项下供试品溶液制备方法制备而成。

2.1.5 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，按“2.1.1”项色谱条件进样测定，记录色谱，见图1。结果表明，阴性样品无干扰。

2.1.6 线性试验 分别精密吸取对照品溶液(二苯乙烯苷含量为10.38μg/mL)2、4、6、8、10 、20μL，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以二苯乙烯苷进样量为横坐标(X)，峰面积响应值为纵坐标(Y)进行线性回归，得出二苯乙烯苷线性方程：Y=3.485 2×106X+3.398 1×103，r=0.999 9。结果表明二苯乙烯苷在0.019 67～0.196 60μg范围内线性关系良好。

2.1.7 精密度试验 精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液10μL，按“2.1.1”项色谱条件重复进样6次，计算峰面积 RSD为0.35%(n=6)。

2.1.8 回收率试验 称取同一批已知含量的安神补心片样品(批号：09030002)(含二苯乙烯苷0.094mg/g)约1g，分别精密称定6份，再精密加入二苯乙烯苷对照品适量按“2.1.3”项下供试品溶液的制备方法制备样品，按“2.1.1”项色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算加样回收率。结果平均回收率为99.220%， RSD为0.54%。见表1。

2.1.9 稳定性试验 精密吸取精密度试验项下同一供试品溶液(批号：09030002) ，按“2.1.1”项下的色谱条件，分别在配置后0、2、4、6、8h进样测定，二苯乙烯苷峰面积RSD=0.23%，结果表明供试品溶液在配置后8h内稳定。

2.2 样品含量测定

按照上述含量测定方法测定了3家制药企业8批安神补心片中二苯乙烯苷的含量，结果见表3。

A.二本乙烯苷对照溶液；B.安神补心片供试品溶液；C.阴性样品溶液

序号称样量(g)样品中含量(mg)添加量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)11.03840.09760.09830.194598.57621.01560.09550.09830.193299.39031.02740.09660.09830.194599.59399.2200.5441.01500.09540.09830.193699.89851.02190.09610.09830.193098.57661.01070.09500.09830.192699.288

表2 不同厂家安神补心片中二本乙烯苷含量测定结果

3 讨论

为了充分提取安神补心片中的有效成分，参照《中国药典》2010年版一部[2]中首乌藤的提取方法，本实验研究考察了超声提取、回流提取两种不同提取方法。结果表明：以回流提取所测得二苯乙烯苷含量更高。同时，本实验研究还考察了不同回流提取时间(15min、30min、60min)对二苯乙烯苷的影响，结果表明回流提取30min的提取效率最高，结果与范宋玲等[4]的研究报道一致。

通过紫外全波长扫描光谱图进行分析，二苯乙烯苷在320nm处有最大吸收。参考《中国药典》2010年版一部首乌藤项下的含量测定，选用320nm为检测波长。

据陈龙虎[5]报道，二苯乙烯苷对光不稳定，在本研究稳定性实验中，安神补心片供试品溶液在8h内基本稳定，因此应在测定时采取棕色瓶避光操作，并且尽量现配现用。

[1] 国家药典委员会.国家药品标准·中成药地方标准上升国家标准部分(内科心系分册)[S].北京：中国医药科技出版社，2013.

[2] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社,2010:248-249.

[3] 彭爱华，宋军，成森. 高效液相色谱法测定安神补心片中二苯乙烯苷含量[J].中国药业，2013,22(9):16-17.

[4] 范宋玲 ，孙冬梅， 王洛临，等.首乌藤药材质量标准的研究[J].中国实验方剂学杂志，2006,12(3)：7-9.

[5] 陈龙虎.高效液相色谱法测定七宝美髯口服液中二苯乙烯苷的含量[J].亚太传统医药，2013,9(3)：23-24.

(责任编辑：宋勇刚)

2014-11-01

刘小双(1989-)，男，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药新技术、新剂型。

R284.1

A

1673-2197(2015)05-0029-02

10.11954/ytctyy.201505013