核酸检测与酶免检测平行筛查血液的效果评价

袁国举 郭兆富 尹以靖

(德宏州中心血站 云南 德宏 678400)

自2010年我国开展血站核酸检测(NAT)试点工作以来，从酶联免疫检测(ELISA)合格的献血者标本中检出漏检的病毒感染者已经多有报道，NAT 与ELISA 已经成为献血者血液筛查和进一步提高血液安全的重要互补手段。本站于2011年6月开始采用NAT 单检与ELISA 平行检测模式筛查血液，现将应用效果报告如下:

1.材料与方法

1.1 标本来源及采集处理2011年6月15 日～2014年6月底本站无偿献血者，共计39236 人次。每位献血者留取3 ×5ml 血液标本:第1 管为EDTA－ K2 真空抗凝管(用于血清学检测)，第2 管为带分离胶的无菌EDTA－ K2 真空抗凝管(BD 管，用于NAT 检测)，第3 管为带分离胶的EDTA－ K2 真空抗凝管(用于标本保存)。所有标本采集后置2 ～8℃冰箱保存，其中NAT 管要求采血后4h 内离心(1600g ×5min)，48h 内完成检测，不能完成检测的置于﹣20℃保存。

1.2 主要设备与试剂1)设备:STARLET 全自动酶免加样仪、FAME16/20 全自动酶免检测分析仪(瑞士HAMILTON 公司)，ProcleixTIGRIS 全自动核酸检测分析系统(美国诺华公司);2)试剂:HBsAg、抗－HCV试剂盒(上海科华、厦门新创)，抗－HIV 检测Ⅲ代试剂(上海科华公司)，抗－HIV 检测Ⅳ代试剂(生物梅里埃)，HBV/HCV/HIV－1 核酸联检试剂(TMA－化学发光法)、Assay 鉴别试剂(美国诺华)。

1.3 方法按试剂说明书操作，每份血液标本均采用2 种ELISA 试剂检测HBsAg、抗－HCV、抗－HIV。同时在Procleix TIGRIS 全自动核酸检测分析系统上进行单人份核酸检测。对ELISA(HBsAg、抗－ HCV、抗－HIV)阴性、NAT 联检阳性的标本再进行HBV －DNA、HCV －RNA、HIV －RNA 鉴别试验。

2.结果(表1 ～表3)

表1 39236 份献血者标本ELISA 与NAT 平行检测结果

表2 199 份ELISA 阳性标本NAT 联检情况

表3 63 份ELISA 阴性NAT 阳性标本鉴别结果

3.讨论

云南省德宏州是中国防治艾滋病的重点地区，为了进一步提高输血安全性，本站作为NAT 检测试点单位于2011年6月15 日开始采用TMA核酸检测技术与ELISA 检测平行筛查献血者血液。通过平行检测39236份献血者标本，共检出NAT 阳性220 份，阳性率为0.56%(220/39236);ELISA 阳性(HBsAg、抗－ HCV、抗－ HIV 3 项)199 份，阳性率为0.51%(199/39236);其中，NAT 阳性ELISA 阳性占0.40%(157/39236);NAT阳性ELISA 阴性占0.16%(63/39236);NAT 阴性ELISA 阳性占0.11%(42/39236)。ELISA 双试剂检测阳性与NAT 阳性符合率为78.9%(157/199)，略高于广州地区75.28%［1］，其中，HBsAg、抗－HCV、抗－HIV 双试剂阳性与NAT 阳性符合率分别为80.3%(106/132)、66%(31/47)、100%(20/20)。可见，ELISA 与NAT 2 种检测结果不一致，这与2 种方法检测的病毒标志物不同，各标志物在外周血中存在时间不同有关［2］，提示这2种检测技术均可能出现漏检和假阳性，二者联合应用筛查血液更能提高血液安全性。

本研究中，63例ELISA 阴性NAT 阳性标本共鉴别出27例HBV －DNA 和1例HCV－RNA，没有检出HIV－RNA，鉴别阴性率为55.6%，高于程卫芳等报道的41%［2］，低于曾劲峰等报道的68.4%［3］。有研究表明，经9.6 倍超浓缩处理后HBV、HCV 病毒含量分别是原有含量的5.92±1.98 倍和4.7 ±1.43 倍，有助于提高NAT 检测灵敏度和提高NAT 筛查阳性标本的鉴别率［4］。由于条件限制，我们不能利用超浓缩技术对鉴别阴性标本重复鉴别，但基于血液安全考虑，所有NAT 联检阳性均视为潜在感染者，相应的血液做报废处理。本站开展NAT 检测后至少规避了1/1447(27/39037)输血感染HBV 和1/39037 的输血感染HCV 风险。

综上所述，为了进一步提高血液安全性，在ELISA 检测的基础上增加NAT 检测很有必要，血站应结合实际情况，选择最适合的检测模式。本站采用单人份核酸检测与ELISA 检测平行筛查献血者血液模式既能够防漏互补，同时也能缩短检测周期，保障血液及时安全的供应。

［1］ 郑优荣，梁浩坚，李仲平，等.核酸检测技术在广州地区献血者血液筛查中的应用.中国输血杂志，2013，26(12):1211 －1214.

［2］ 程卫芳，段有红，周学勇，等.2 种核酸检测平台在与EILSA 平行检测中的应用.中国输血杂志，2013，26(12):1235 －1237.

［3］ 曾劲峰，郑欣，许晓绚.ELISA 检测与NAT 检测在血液筛查应用中的互补性研究.中国输血杂志，20012，25(10):1012 －1015.

［4］ 王卓妍，龚晓燕，宋美兰，等.超速离心浓缩技术富集HBV 和HCV颗粒的效果研究.中国输血杂志，2012，25(12):1295 －1296.