蛹虫草人工高产栽培技术

2015-04-17李菲

福建农业科技 2015年6期

李菲

(安发福建生物科技有限公司 352100)

蛹虫草又名北虫草，为子囊菌亚门、麦角菌目、麦角菌科、虫草属，与冬虫夏草同属。冬虫夏草含有丰富的腺苷、虫草素、虫草酸、虫草多糖、多种氨基酸等生物活性成分，还有钾、钠、钙、镁、铁、铜、锰、锌、硒等微量元素，具有抗癌、抗肿瘤、抗氧化、清除自由基、滋肺益气、增精补肾、延缓衰老、提高免疫力之功效，被人们誉为“东方圣草”［1］。近年来，随着冬虫夏草的过度采挖，导致野生冬虫夏草资源严重枯竭，为了弥补冬虫夏草资源的不足，国内外学者将目光投向了蛹虫草，开始了人工栽培蛹虫草的研究［2］。从蛹虫草的菌种选育、人工栽培、有效成分、药理功效、开发应用等方面进行深入的研究，发现蛹虫草的各种有效成分与冬虫夏草极其相近，在优越的人工栽培环境条件下，有效成分的含量甚至比冬虫夏草还要高，而且对寄主要求不严，易于进行人工规模化栽培。目前，蛹虫草的人工栽培技术已经成熟，并进入规模化生产，但在栽培过程中仍存在许多问题。本文通过大米培养基栽培蛹虫草实验，结合前人研究文献，总结出蛹虫草的高产栽培关键技术，以供同行参考。

1 菌种制备

蛹虫草栽培中，菌种质量的优劣是栽培的重中之重，决定着生产的成败。购买的菌种，需要进行栽培实验，选择生长良好的子实体进行分离、纯化，得到适合栽培的菌种。母种的转管次数不得超过3次，转管次数越多，产量越低，甚至不能抽生。用固体菌种接种，发菌时间长且生长缓慢;而利用液体菌种接种，因菌液具有流动性，会带着菌种进入培养基，分散在培养基的各个部位，形成无数个生长中心，这样便大大减少了发菌时间，缩短了生产周期。在选择试管菌时，要选择菌丝较发达的菌种来制备液体菌种，这样才能培养出较细、较均匀的液体菌种，以便于接种至大米培养基。［3－4］

2 培养基制备

蛹虫草菌丝体的有效分化需以昆虫为基质才能完成。因此，培养基的营养物质必须相当丰富才能有利于正常发育，培养基主要营养成分是碳源和氮源。碳源是蛹虫草菌丝体生长必需的主要营养物质，除了以大米为主要碳源外，还需要添加适量的小分子碳源来促进其生长，葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖及淀粉等都可以作为蛹虫草菌丝体培养基的碳源，但不同碳源对其生长有着明显的差异。其中添加蔗糖的培养基，子实体粗壮、色泽好，生长状况最佳，且来源广泛，更适宜用于规模化生产。［5－6］氮源是蛹虫草菌丝体生长所需的核酸和蛋白质合成的原料，蛋白胨、柠檬酸铵、蚕蛹、酵母等都是可以利用的氮源，其中以蛋白胨和柠檬酸铵更能满足其生长要求［6］。此外，培养基中通常需要添加一定量的无机盐和维生素。硫酸镁是微生物发酵常用的营养源;镁离子是许多酶的催化剂;添加磷酸二氢钾不仅可以提供必要的营养成分，还可以起到缓冲培养基pH值的作用，有利于虫草的生长;添加少量的维生素，可对菌丝体的生长起调节作用，能够促进其生长发育。［7－9］综上所述，蛹虫草的最佳培养基是以大米为主料，加入适量营养液。营养液配方为蔗糖20 g、蛋白胨5 g、MgSO41.0 g、KH2PO42.0 g、VB10.1 g、水1000 mL。主料与营养液的最佳比例为1∶1.2～1.5，若太干，湿度达不到要求，子实体容易早衰;太湿，灭菌完成后，大米黏性太大，不利于发菌。

3 灭菌

灭菌通常分为常压灭菌和高压灭菌，但不论是常压灭菌还是高压灭菌，要注意两点:一是主料与营养液在灭菌前的浸泡时间不能太长，一般不超过4 h，否则会发生培养基发酵和糖化，从而改变培养基成分及pH值;二是必须合理排列锅内瓶的密度，保证蒸汽流畅，才能达到彻底灭菌的效果。常压灭菌需要8～10 h，注意常压灭菌时应尽快使灶内温度达到100℃，否则培养基容易酸化变质，影响产量。在常压灭菌结束、灶内温度自然冷却后，应马上出锅，完全冷却后进行接种，灭菌完成后绝对不能闷料，否则容易导致细菌污染。高压灭菌要合理设置灭菌时间，灭菌时间太短，灭菌不彻底;灭菌时间太长，则会导致培养基黏性太大，影响菌丝的生长。［4］

4 接种

蛹虫草栽培所用的培养基营养非常丰富，因此极易感染杂菌，所以在接种时必须严格进行无菌操作［5］。首先，必须确保接种室为无菌环境，提前对接种室进行清洁、灭菌，并且在接种箱、超净工作台等无菌设备内进行操作;其次，菌种所处的环境必须是无菌环境，要在酒精灯旁进行接种，且接种所用的工具、仪器，使用之前也必须进行消毒处理;再者，操作人员在进入接种室前要穿戴好经过消毒处理的实验服、口罩等，做好一切消毒工作，才可进行接种;最后，每次接种时间不宜过长，以免接种区内空气交换导致杂菌增多。

5 后期管理

5.1 温度

温度是蛹虫草生长环境的关键因素，蛹虫草不同生长阶段对温度有不同要求。温度较低时，菌丝体生长慢，且长势稀疏，生产周期长;温度较高时，菌丝体密度、色泽等较好，生长周期也短，但菌丝体内的有机物消耗过多，子实体细长柔弱。据前人的研究表明，菌丝体生长最适温度为18～20℃［10］;子实体生长最适温度为18～26℃，原基分化时需要较大的温差刺激，一般保持在6～10℃的温差范围，长草阶段则需要保持22℃的恒温条件［4，11－12］。

5.2 光照

光照对转色、原基分化、子实体生长都有着至关重要的作用。发菌完成后，需要给予弱光照刺激进行转色，光照强度太强会抑制菌丝的生长且不利于转色，光照强度太弱菌丝会生长过旺。转色阶段最适光照强度为200～300 lx，菌丝转色效果好，菌丝颜色鲜艳。在原基分化阶段，所需要的光照强度与转色阶段相差不大，根据生长情况可对光照强度进行微调整。前两个阶段的光照时间应保持在12～14 h，太久菌丝会过早变黄甚至老化，原基分化较密。子实体生长时则需要较强的光照，最适光强为700～900 lx，此时子实体呈条状，生长均匀，为鲜艳的橙黄色。光照太弱，子实体较细且弱，颜色为浅黄色;光照太强，子实体短粗、块状、扭曲、颜色不均匀。在此阶段，光照时间稍短一些，控制在8～10 h最佳，子实体生长健壮、较高且粗，以孢子头效果最为明显。［13－14］

5.3 湿度

湿度的控制分为瓶内湿度与空气湿度的控制。培养基不同含水量对菌丝萌发有一定影响，含水量过高，菌丝萌发时间延长，生命力下降，菌丝长满瓶底时间显著增加，而且湿度大极易导致杂菌感染［4］。培养基最佳的料水比为1∶1.5，菌丝萌发快、长满瓶底时间最短，菌丝质量好，转色快、子座粗壮、产量高。适宜的空气湿度也是蛹虫草菌丝体正常生长发育的条件之一。在转色及原基分化期空气湿度保持在60%～70%最为合适，而出草阶段的空气湿度保持在80%～90%最佳。规模化生产中，一般通过在地上洒水的措施来提高空气湿度。［6，15］

5.4 通风

发满菌后及时进行扎孔处理，在薄膜上扎2～3个通风孔。环境温度较低时，栽培室每4～5 d进行1次通风处理;环境温度较高时，栽培室每2～3 d进行1次通风处理，以确保栽培室内空气通风良好。在通风完成后须及时对培养室进行紫外灯灭菌，以及抽样处理，以防杂菌感染，尤其是在温度较高时。在菌丝体生长阶段，较易发生杂菌感染的情况，通风完后更要注意灭菌处理，这样才能使产量更高，出草更快、更整齐。［16］

6 采收

等到子实体长至6～8 cm，在孢子散发之前进行采摘［4］，采摘时应注意不要破坏子实体基部的培养基，以便二茬的生长。将采摘的子实体及时进行烘干、贮存。采收后要向瓶内添加营养液，营养液量根据实际而定，一般为第1次营养液量的1/3～1/2，将瓶子倾斜，沿着瓶壁倒入营养液，注意不要将营养液倒至菌丝上，以免影响后期生长。

［1］卢建明，曾振基，何焕清.蛹虫草人工代料培育技术［J］.广东农业科学，2005(2):88－89.

［2］梁佩琼，陵大京.冬虫夏草生物学研究新进展［J］.食用菌，1990(3):2－3.

［3］代君君，范涛，吴传华，等.人工栽培蛹虫草研究的概述［J］.安徽农业科学，2007，35(18):5469－5471.

［4］任彦文，赵辉，吴战科.名贵药 (食)用菌——蛹虫草速生高产栽培技术要点［J］.中国农技推广，2009，25(5):28－29.

［5］方华舟，向会耀，王小艳.不同碳源对蛹虫草菌丝及子实体生长状况的影响［J］.荆楚理工学院学报，2010，25(2):5－8.

［6］陈怀宇，许延宗，王德枝，等.北冬虫夏草菌丝体培育条件的研究［J］.泉州师范学院学报，2008，26(2):106－109.

［7］温志新，孙永欣，李学军，等.大米培养基添加不同营养成分培养蛹虫草试验［J］.食用菌，2011(2):29.

［8］韦强，黄漫青.培养基营养成分对蛹虫草生长的影响［J］.北京农业，2009:36－38.

［9］程红艳，郭伟，常明昌，等.山西省北冬虫夏草优良菌株与母种培养基的筛选［J］.山西农业科学，2010，38(11):35－37，56.

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［11］王兰珍，林桂荣.不同培养条件对蛹虫草原基分化形成的影响［J］.福建农业科技，2009(4):44－45.

［12］秦俊哲，杜军国，程伟.温度对蛹虫草生长发育的影响［J］.陕西科技大学学报，2012，30(6):84－88.