齐墩果酸对雄性小鼠化学性肝损伤的作用研究

郗艳丽，陈航宇，李雅玲，张洋婷，葛红娟，刘 敏 (吉林医药学院公共卫生学院，吉林 吉林 132013)

齐墩果酸是一种天然产物化学成分，广泛存在于青叶胆、血胆、女贞子、西洋参、连翘、柿叶、景天三七、夏枯草等植物中［1-3］。从1908 年齐墩果酸首次被分离出来以后，其新的药用价值不断被发现。目前，已经证实齐墩果酸具有降糖、降脂、抗病毒、抗癌等多种生物学活性［4-6］。此外，齐墩果酸还被证实具有抑制自由基生成，保肝、护肝的作用。由于齐墩果酸不断地被开发和利用，其作用机制也不断地被探索。齐墩果酸能抑制四氯化碳(CCl4)所致自由基生成，其作用机制与齐墩果酸本身带有一些活泼的官能团有关。这些官能团可以与毒CCl4结合，起到解毒的作用［7］，且在注射CCl4之前预先皮下注射齐墩果酸有保肝作用［8］。但注射CCl4的同时给予齐墩果酸灌胃是否也能起到保肝、护肝作用则鲜有报道。本研究通过检测齐墩果酸对小鼠脏器系数、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影响，观察CCl4与齐墩果酸同时给药的方法对小鼠氧化损伤的作用，为齐墩果酸的开发奠定试验基础。

1 材料与方法

1.1 试剂与设备

齐墩果酸(西安文竹生物科技有限公司，用时制备成300 mg/mL 豆油溶液)，肝素钠(天津生物化学制药有限公司)，CCl4(天津市巴斯夫化工有限公司)，无水乙醇和氯仿(天津市永大化学试剂有限公司)。

电子分析天平(BS224S，北京赛多利斯)，分光光度计(722 型，中国厦门分析仪器厂)，离心机(TDZ5-WS，湖南湘仪离心机仪器有限公司)，冰箱(海尔)。

1.2 动物分组

健康雄性小鼠30 只，体重(25 ～28)g，购于长春市亿斯实验动物技术有限公司。用普通饲料饲养1周后使用。随机分为3 组:空白组(3 mL/kg 生理盐水腹腔注射同时给予0.1 mL/100 g 豆油灌胃，隔天相同剂量豆油再灌胃一次)、模型组(3 mL/kg CCl4原液腹腔注射一次同时给予0.1 mL/100 g 豆油灌胃，隔天相同剂量的豆油再灌胃一次)，同时给药组(3 mL/kg CCl4原液腹腔注射一次同时给予0.1 mL/100 g 齐墩果酸油溶液灌胃，隔天齐墩果酸油溶液再灌胃一次)，每组10 只。各组于末次给药后禁食24 h，不禁水，眼球取血，制成抗凝血。同时取出脏器(心、肝、脾、肺、肾)。

1.3 脏器系数计算

每只小鼠处死前称量活体体重，处死后立即摘取脏器，快速浸于生理盐水中，洗去血污，用滤纸吸干水分，称量脏器湿重，小鼠活体体重和脏器湿重均以(g)为单位。脏器系数= 脏器湿重/活体体重×100%。

1.4 全血SOD 含量检测

取抗凝血50 μL，迅速冲入含有1 mL 生理盐水的2 mL 具塞刻度离心管中，在漩涡混合器上混合均匀，3 000 rpm 离心10 min，弃去上清。加入4 ℃预冷的双蒸馏水0.2 mL，使其完全溶血，再加入4 ℃预冷的乙醇-氯仿混合液0.2 mL，于漩涡混合器上混悬1 min，3 000 rpm 离心15 min。离心后的液体分为三层:上层为SOD 抽提液，中层为血红蛋白沉淀物，下层为氯仿。吸取上层SOD 抽提液，按照邻苯三酚法测定全血中SOD 的含量［9］。

肝组织匀浆SOD 含量检测:留取肝脏相同部位0.5 g，以1∶ 9(m/V)的生理盐水制成组织匀浆，邻苯三酚法检测肝组织SOD 含量。

1.5 MDA 含量测定

血清 MDA 含量检测:将抗凝血静止后，3 000 rpm离心10 min，吸取血清，采用硫代巴比妥钠法测定血清中MDA 的含量，比色后利用公式求出MDA 含量［10］。

肝组织匀浆MDA 含量检测:留取肝脏相同部位0.5 g，以1∶ 9(m/V)的KCl 溶液(150 mmol/L)制成匀浆，硫代巴比妥钠法测定肝组织MDA 含量。

1.6 数据统计分析

数据应用SPSS13.0 统计软件进行分析。各项数据以(±s)表示，用单因素方差分析及t 检验比较组间差异。

2 结 果

2.1 脏器系数

与对照组比较，模型组和同时给药组肝脏脏器系数明显升高(P ＜0.05)，肾脏脏器系数、肺脏脏器系数、脾脏脏器系数、心脏脏器系数均没有明显变化(P ＞0.05);与模型组比较，同时给药组肝脏脏器系数、肾脏脏器系数、肺脏脏器系数、脾脏脏器系数、心脏脏器系数均没有明显改变(P ＞0.05)。

2.2 SOD 含量测定

模型组和同时给药组全血SOD 含量较对照组明显降低(P ＜0.05);同时给药组全血SOD 含量与模型组相比没有明显差异(P ＞0.05)。模型组和同时给药组肝组织匀浆SOD 含量较对照组明显降低(P ＜0.05);同时给药组肝组织匀浆SOD 含量与模型组相比没有明显差异(P ＞0.05)。

2.3 MDA 含量测定

模型组和同时给药组血清MDA 含量较对照组明显升高(P ＜0.05);同时给药组血清MDA 含量与模型组相比没有明显差异(P ＞0.05)。模型组和同时给药组肝组织匀浆MDA 含量较对照组明显升高(P ＜0.05);同时给药组肝组织匀浆MDA 含量与模型组相比没有明显差异(P ＞0.05)。

3 讨 论

CCl4诱导肝脏发生的损伤，会在短时间内快速的出现，经一段时间的恢复，可以恢复到用药前水平，模型具有可逆性。为了避免模型自愈，能及时观察干预效果，本研究选择了短期给药的方式，观察齐墩果酸对化学性肝损伤的影响。

齐墩果酸广泛存在于各种药材植物中，水果当中(如木瓜)也含有丰富的齐墩果酸。考虑到动物给药方式尽可能与人接近的原则，本研究采用灌胃的方式给予齐墩果酸。

表1 齐墩果酸对化学性肝损伤雄性小鼠脏器系数的影响(±s，n=10)

表1 齐墩果酸对化学性肝损伤雄性小鼠脏器系数的影响(±s，n=10)

与对照组比较，* P ＜0.05

?

图1 齐墩果酸对化学性肝损伤雄性小鼠SOD 含量的影响

图2 齐墩果酸对化学性肝损伤雄性小鼠MDA 含量的影响

实验结果表明，与正常对照组比较，CCl4致化学性肝损伤模型组肝脏脏器系数及各项生化指标均有显著性改变，说明本试验建立的化学性肝损伤模型成功。注射CCl4的同时给予齐墩果酸，并未抑制CCl4致化学性肝损伤导致的肝组织和血液中SOD 含量的下降和MDA 含量的升高。说明齐墩果酸没能提高SOD 的活力，并及时清除产生的自由基，避免由自由基的大量堆积引起的氧化损伤和脂质过氧化，在抗氧化损伤和脂质过氧化过程中没能发挥作用。高浓度的CCl4有溶酶的作用，齐墩果酸需要先激活体内的酶系统发挥作用。本研究表明CCl4与齐墩果酸发挥效应的酶系统可能是相同的，一旦酶系统受损后，齐墩果酸很难在短时间内恢复受损的酶系统。此外，CCl4腹腔注射以后，会快速进入血液，引起损伤。齐墩果酸通过灌胃的途径吸收后，需要经过肝脏的首过消除作用，大大降低了齐墩果酸入血的量，而且延长了齐墩果酸到达血液的时间，导致齐墩果酸发挥作用的时间可能晚于损伤的时间，影响了干预效果。综上所述，注射CCl4的同时给予齐墩果酸灌胃的方式，不能有效抑制损伤，发挥保肝、护肝的作用。

［1］ 孔阳，马养民.大孔树脂分离纯化女贞子中齐墩果酸工艺的研究［J］.陕西科技大学学报:自然科学版，2012，30(4):57-60.

［2］ 何新蕾，于栋.响应面优化女贞子齐墩果酸提取工艺研究［J］.食品工业，2014，35(7):92-95.

［3］ 张蜀艳，李政.齐墩果酸研究进展［J］.食品与发酵科技，2010，46(4):22-24.

［4］ 吴勃岩，王雪，董静，等.齐墩果酸对S180 荷瘤小鼠细胞色素C 和Caspase-3 表达的影响［J］.中医药信息，2014，31(4):14-16.

［5］ 柳占彪，王鼎，王淑珍，等.齐墩果酸的降糖作用［J］.中国药学杂志，1994，29(12):725-726.

［6］ 刘厚佳，胡晋红，孙莲娜，等.木瓜中齐墩果酸抗乙型肝炎病毒研究［J］.解放军药学学报，2002，18(5):272-273.

［7］ 赵骏，蓝茹.从齐墩果酸结构分析抗肝细胞损伤的作用机制［J］.中草药，1998，29(12):844-884.

［8］ Liu Yaping，Hartley DP，Liu Jie.Protection against carbon tetrachloride hepatotoxicity by oleanolic acid is not mediated through matallothionein［J］.Toxicol Lett，1998，95(2):77-85.

［9］ 许申鸿，杭瑚，李运平.超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法的研究及改进［J］.化学通报，2001(8):516-519.

［10］ 赵淑娥.硫代巴比妥酸法(TBA 模型)预测鱼糜制品保藏货架期研究［J］.江西食品工业，2012(2):26-27.