FQ-PCR检测BALF中结核杆菌-DNA对肺结核诊断的应用研究

童建林 饶常红 黄渤

本文通过FQ-PCR检测BALF（Bronchoalveolar lavage fluid）中结核杆菌-DNA对肺结核的诊断进行分析研究，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取2013年12月-2014年11月期间本院收治的肺结核患者110例作为本次研究的对象，其中男67例，女43例，年龄17~68岁，平均（43.5±2.2）岁。所有患者临床诊断表现为胸片或胸部CT检查显示肺部有病变，肺部单侧或双侧有斑块状或片状阴影、结节等[1-2]。所有患者自愿参与本次研究，且签订了知情同意书。

1.2 方法 所有患者均实施纤支镜检查、活检、刷检，BALF中结核杆菌-DNA等检查，且在这些检查之前，对患者实施血常规、血凝四项等检查[3]。检查中使用到的设备、仪器主要有：纤支镜型号为PENTAX，PCR扩增仪由美国PE公司提供；荧光检测仪（DA7600）、DNA提取液、TaG-DNA酶、荧光标记引物、定量标准品（TB-DNA浓度：106基因拷贝/μL）由中山医科大学达安基因诊断中心提供。检查步骤如下：（1）支气管镜检查：按照支气管镜仪器使用说明书，进行相关的操作检查，并让患者做好相关的检查前准备，参照患者的X线检查、CT检查结果，在支气管镜下对患者的肺部进行观察，如果有可以进行活检的病灶，则使用活检钳在病灶上取下3~5块的组织，使用10%福尔马林固定后进行病理检验。一次性细胞刷对病变部位进行涂片、抗酸染色、细胞学检查，生理盐水支气管灌洗，收集灌洗液，进行BALF结核杆菌DNA检查[4-5]。如果在支气管镜下没有发现可以进行活检的病灶，需要根据患者的病变位置，刷检后再进行灌洗。（2）BALF结核杆菌DNA检查处理：取灌洗液1~1.5 mL，在转速为12 000 r/min的离心机中离心5 min；取沉淀物，加入无菌生理盐水1 mL，振荡混匀，然后在转速12 000 r/min的离心机中离心5 min；取沉淀物，加入50 mL DNA提取液混匀，在100 ℃恒温下处理10 min；然后在4 ℃冰箱中冷却至室温后，再进行12 000 r/min离心5 min，取上清液2μL加入PCR反应管，8000 r/min离心数秒，然后将反应管取出放入PCR仪，在PCR反应后行荧光FQ-PCR检测，记录读数。取灌洗液5 mL，离心、沉淀、涂片，进行细胞学检查。支气管镜无菌盐水冲洗后，取冲洗液于无菌瓶中，进行荧光定量检查。本次研究中，所有的实验室检查步骤中，使用到的试剂均为相应的检查仪器配套试剂，仪器的操作需要严格的按照操作说明书进行。

1.3 观察指标 针对本次研究中各种检查方法下的结核杆菌-DNA阳性率进行观察分析。

1.4 统计学处理 使用统计学软件SPSS 15.0进行处理分析，计量资料采用（±s）表示，计数资料采用 字2检验、Wilcoxon检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 荧光FQ-PCR检测与金标准结果比较 本次研究中确诊为肺结核的患者有44例，所占的比例为40.00%（44/110）。荧光定量FQ-PCR检测的BALF肺结核的敏感度为63.64%，特异度为96.97%，准确度为83.64%。阳性预测值=93.33%，阴性预测值=80.00%，阳性似然比=21.00，阴性似然比=0.37。FQ-PCR检测BALF中结核杆菌-DNA结果与金标准比较见表1。

表1 荧光FQ-PCR检测与金标准结果比较 例

2.2 三种肺结核诊断结果比较 FQ-PCR检测的敏感性明显高于痰涂片、刷检涂片，三种方法诊断肺结核的敏感性比较差异有统计学意义（P<0.05），见表2。随机20次对清洗后的支气管镜用无菌生理盐水冲洗，冲洗液实时荧光定量PCR检测结果为全阴性。

表2 三种肺结核诊断结果比较 例（%）

3 讨论

在肺结核的临床诊断中，实验室检查是重要的手段，通过实验室检查，可以将肺结核疾病的传染源进行明确。传统的涂片检查，操作简单、快速，但是其检验的准确性较差[6]。随着临床检验技术的发展和进步，FQ-PCR检验技术产生，因其具有精确、简便、快速等优点，所以在临床检验中被广泛的应用[7]。本文FQ-PCR检测BALF中结核杆菌-DNA对肺结核的诊断进行了分析研究，结果显示FQ-PCR检测BALF中结核杆菌-DNA的阳性率明显的高于涂片、刷检[8-9]。

在本次研究中荧光定量FQ-PCR检测的BALF肺结核的敏感度为63.64%，特异度为96.97%，准确度为83.64%。阳性预测值=93.33%；阴性预测值=80.00%；阳性似然比=21.00；阴性似然比=0.37，显著优于其他检验方法的检查结果。FQ-PCR检测BALF中结核杆菌-DNA的整个检验过程密闭进行，实现了实时动态监测，有效地减少了检验中的污染，减少了假阳性、假阴性的发生，其临床诊断准确性较高。在肺结核的诊断中，FQ-PCR检测方法的应用自动化程度较高，可以进行定性定量检查，有较高的准确性、特异性和灵敏性，结合本次研究的结果，FQ-PCR检测在肺结核的诊断中有较高的应用价值，可以进行推广应用[10-12]。

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