黔产飞龙掌血茎皮部白屈菜红碱的含量测定

吕海涛，韩惟芳，麻秀萍＊，李 江，邵进明

（1．贵阳中医学院 一附院，贵州 贵阳550002；2．贵阳中医学院，贵州 贵阳550002）

飞龙掌血［Toddalia asiatica （Linn．）Lam．］系芸香科飞龙掌血属的唯一植物［1］，我国多地均有分布，收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》，是贵州苗族常用药材之一，其入药部位为干燥根或根皮及叶，药性辛、微苦、温，归脾、胃经。根及根皮有小毒，具有散瘀止血、祛风止痛、消肿解毒功能；叶具有散瘀止血、祛风除湿、消肿解毒功能［2］，可治疗风湿性关节炎、跌打损伤、闭经等。飞龙掌血主要含有香豆素类、生物碱类、三萜类等［3－5］。近年来，关于其指纹图谱研究及有效成分含量测定的研究已有报道［6－9］。但到目前为此，未见对飞龙掌血茎皮部化学成分的研究报道。为飞龙掌血药材的全面质量评价提供依据，拟用茎皮部药材代替根皮入药，以期达到对资源的保护和可持续利用，并为其进一步开发和研究奠定基础，为指导合理用药、完善质量标准制定等提供参考，笔者对飞龙掌血的茎皮进行高效液相色谱（HPLC）指纹图谱构建，并对飞龙掌血茎皮部和根皮部的有效成分白屈菜红碱含量进行测定。

1 材料与方法

1．1 药材

供试药材于2013年8月采自贵州贵阳市云岩区（1）、龙里县（2）、贵阳市花溪区（3）、兴义市马岭镇（4）、兴仁县（5）、贵阳市白云区（6）、贵阳市乌当区（7）、关岭县（8）、都匀市平浪镇（9）、贵阳市南明区（10），经贵阳中医学院生药学教研室孙庆文老师鉴定为芸香科植物飞龙掌血的干燥茎皮。同时还采集了贵州不同地区和云南省红河州产飞龙掌血的根皮部作对照。

1．2 试剂与仪器

试剂：白屈菜红碱（纯度97．5%，天津马克生物技术有限公司），甲醇（色谱纯），磷酸（分析纯）等。仪器：日本岛津LC－20AT 高效液相色谱仪（二元泵，SPD－20A 紫外可见检测器，手动进样器，柱温箱，Shimadzu LC solution Lite色谱工作站），《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A 版、2004B版）》（国家药典委员会发行），电子分析天平（AB265S，上海奥豪斯有限公司），超声清洗仪（HS10260D，天津市恒奥科技有限公司），中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）等。

1．3 色谱条件

色谱柱：phenomenex Cemini C18柱（250mm×4．6mm×5μm）；流动相为甲醇－0．1%磷酸水溶液，梯度洗脱程序见表1；流速1．0 mL／min，检测波长320nm，进样体积10μL，柱温30℃。

表1 色谱流动相梯度程序Table 1 The gradient of chromatographic mobile phase

1．4 溶液制备

对照品溶液：精密称取适量白屈菜红碱，加甲醇制成浓度为0．041 6mg／mL的溶液。供试品溶液：精密称取飞龙掌血茎皮部药材粉末1 g，置于100mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，称量，超声提取30min，放冷至室温，用70%甲醇补足减失的重量，过滤，取续滤液即得。

1．5 指纹图谱的构建

在图谱的构建前进行方法学考察，精密度试验、稳定性试验、重复性试验均符合构建指纹图谱的要求。分别取1～10号黔产飞龙掌血茎皮部药材制备供试品溶液，在确定色谱条件下分别进样并记录图谱，采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A 版）》的操作规范软件分析后，建立飞龙掌血茎皮部药材的色谱指纹图谱共有模式。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004B版）》对飞龙掌血茎皮部药材的HPLC 图谱进行相似度评价。

1．6 白屈菜红碱的含量测定

［5］的条件，对黔产10批飞龙掌血茎皮、根皮部药材样品的白屈菜红碱含量进行测定。

2 结果与分析

2．1 指纹图谱及技术参数

从图1看出，黔产飞龙掌血茎皮部药材指纹图谱有13个共有峰，与白屈菜红碱对照品图谱比较，确定8号峰为白屈菜红碱峰。以8号峰为参照峰，分别计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积（表2、表3）。

图1 白屈菜红碱对照品及黔产飞龙掌血茎皮部药材的指纹图谱Fig．1 The fingerprint spectrum of Chelerythrine sample and T．asiaticastem bark

表2 黔产飞龙掌血茎皮部药材HPLC指纹图谱各共有峰的相对保留时间Table 2 Relative retention time of common peak of HPLC fingerprint spectrum of Toddalia asiatica stem bark

表3 黔产飞龙掌血茎皮部药材HPLC指纹图谱各共有峰的相对峰面积Table 3 The relative peak area of common peak of HPLC fingerprint spectrum of T．asiaticastem bark

图2 10批黔产飞龙掌血茎皮部药材的叠加指纹图谱Fig．2 Superposition fingerprint spectrum of T．asiaticastem bark samples from different sources

2．2 指纹图谱的相似度

以共有模式参照谱计算1～10 号样品的相似度，分 别 为0．992、0．993、0．988、0．988、0．985、0．991、0．990、0．994、0．989和0．973。从相似度数据和黔产飞龙掌血茎皮部药材的叠加指纹图谱（图2）可以看出，各批次药材具有良好的一致性。

从图3可知，黔产飞龙掌血根皮部图谱与茎皮部图谱相似，其共有模式相似度高于0．97，初步判断茎皮部与根皮部的化学成分相似。云南产飞龙掌血根皮部与黔产飞龙掌血根皮部的图谱差异较大，也不同于黔产飞龙掌血茎皮部指纹图谱，表明两产地药材所含化学成分有较大差异，且化学成分的含量差异也较大，由此判断黔产飞龙掌血茎皮部指纹图谱可区别于云南产飞龙掌血根皮部药材。

图3 飞龙掌血茎皮部与根皮部的HPLC指纹图谱Fig．3 HPLC fingerprint spectrum of stem bark and root bark of T．asiatica

2．3 白屈菜红碱含量

经测定，1～10号黔产飞龙掌血茎皮部白屈菜红 碱 的 含 量 分 别 为0．18%、0．20%、0．09%、0．06%、0．10%、0．06%、0．15%、0．13%、0．10%和0．12%；贵州飞龙掌血根皮部的白屈菜红碱平均含量为0．20%，云南产为0．27%，比黔产飞龙掌血茎皮部高。

3 结论

采用高效液相色谱（HPLC）法，构建黔产飞龙掌血茎皮部的指纹图谱。结果表明，黔产飞龙掌血根皮部与茎皮部色谱图共有模式的相似度高于0．9，表明根皮部与茎皮部的化学成分相似，茎皮部白屈菜红碱的含量为0．06%～0．20%，根皮部的部分化学成分含量高于茎皮部，但贵阳市云岩区、龙里县产飞龙掌血茎皮部的白屈菜红碱含量分别为0．18%和0．20%，与贵州飞龙掌血根皮部的白屈菜红碱平均含量（0．20%）相当。从资源可持续开发利用角度看，可进一步对飞龙掌血根皮部与茎皮部药材进行药理学、毒理学等相关研究，以探明飞龙掌血茎皮部相关有效成分含量的差异，从而决定能否用飞龙掌血茎皮部代替其根皮部入药，以保护该药材资源及其可持续利用。

［参 考 文 献］

［1］ 楚东海．中药材飞龙掌血研究进展［J］．安徽农业科学，2010，38（34）：19374－19395．

［2］ 贵州省药品监督管理局．贵州省中药材、民族药材质量标准［M］．贵阳：贵州科技出版社，2003．

［3］ 黄 平，Karagianis Gloria，韦善新，等．飞龙掌血中三萜酸成分研究［J］．天然产物研究与开发，2005，17（4）：404－408．

［4］ 刘志刚，李 莹，朱芳芳，等．GC－MS法分析贵州产飞龙掌血叶中挥发油成分［J］．贵阳学院学报：自然科学版，2011，6（2）：28－61．

［5］ 徐世霞．HPLC法测定飞龙掌血中白屈菜红碱的含量［J］．北方药学，2011，8（4）：5－6．

［6］ 徐世霞．HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量［J］．北方药学，2011，8（5）：7－8．

［7］ 郝小燕，曹晓红，梁 妍，等．高效液相色谱法测定飞龙掌血中异茴芹香豆素含量［J］．中国中药杂志，2004，29（8）：768－769．

［8］ 刘志刚，刘晓燕，秦晋颖．飞龙掌血的HPLC 指纹图谱研究［J］．中药材，2010，33（8）：1240－1243．

［9］ 杨 亮，郭 晶，范宝成．苗族药材飞龙掌血药材指纹图谱研究［J］．药物研究，2011，20（14）：21－22．