蜂胶作为动物疫苗佐剂的研究及应用

2015-04-03宋晓明山东省乳山市午极镇畜牧兽医工作站264503孙海芳山东省兽医诊断试剂工程技术研究中心山东青岛孙旭东山东省威海市环翠区温泉畜牧兽医中心站南慧静山东省高唐县畜牧水产局

山东畜牧兽医 2015年3期

宋晓明　（山东省乳山市午极镇畜牧兽医工作站　264503）孙海芳　（山东省兽医诊断试剂工程技术研究中心　山东青岛）孙旭东　（山东省威海市环翠区温泉畜牧兽医中心站）　南慧静　（山东省高唐县畜牧水产局）

文献综述

蜂胶作为动物疫苗佐剂的研究及应用

宋晓明（山东省乳山市午极镇畜牧兽医工作站264503）
孙海芳（山东省兽医诊断试剂工程技术研究中心山东青岛）
孙旭东（山东省威海市环翠区温泉畜牧兽医中心站）南慧静（山东省高唐县畜牧水产局）

蜂胶（Propolis）是一种具有芳香气味的胶状固体物，由蜜蜂从树干或植物芽孢上采集树脂（树胶）后，与其上腭腺、蜡腺自身分泌的的分泌物混合加工而成。其内含有丰富的生物活性物质，具有多种生物学特性，兼具广谱抗病毒、抗细菌、抗霉菌、消炎、止痒、增强免疫、抗氧化、降血糖、降血脂等多种功能，广泛应用于人类的医疗、保健行业，作为新兴的保健品也倍受推崇，现已成为各国科学研究的热点［1］。蜂胶用作疫苗佐剂优势明显，获得了良好效果，迅速成为了当前佐剂开发热潮中的佼佼者，被广泛应用于动物疫苗领域，并显示出巨大的市场潜力和诱人的开发前景［2］。本文概述了蜂胶佐剂的免疫机制，以及在动物疫苗开发中的研究与应用。

1　蜂胶疫苗的免疫机制研究

（1）蜂胶用作疫苗佐剂可兼具抗原“仓库”和免疫刺激复合物作用，这是因为蜂胶颗粒与病原粒子之间相互交联，形成类免疫刺激复合物（ISCOM）结构。既可有效保护蜂胶颗粒与病原粒子的形态结构不被破坏，又可使蜂胶与病原粒子各自被机体吸收后可继续发挥功效，这一稳定的ISCOM结构使蜂胶佐剂疫苗具有高效、持久的特点，同时疫苗中少量游离的病原粒子和蜂胶颗粒可刺激机体在接种后迅速产生免疫应答，由此决定了应用蜂胶佐剂疫苗后能快速产生有效的免疫保护力［2,3］。（2）沈志强等［1］认为蜂胶对机体免疫系统具有广泛的刺激作用，在增强机体体液免疫功能的同时对细胞免疫功能也有较强的刺激作用，可有效促进胸腺、脾脏等免疫器官的功能，使机体各免疫系统的功能得以充分发挥，另外，在促进抗体的生成、增强巨噬细胞的吞噬能力和自然杀伤性细胞的活性等方面作用也极为显著。研究结果证明，蜂胶是优良的免疫佐剂，其所含有的许多酶类、醇类、脂类和酸类物质都具有广泛的免疫效应，正是这些生物活性物质使机体的免疫防疫系统全面启动，有效刺激了集体体液免疫系统、细胞免疫系统、巨噬细胞补体免疫系统和红细胞免疫系统等的协调启动，达到了增强机体免疫反应、激活与保护免疫器官的功效，从而使机体产生了高效的特异性和非特异性免疫力［4］。（3）柴家前等［5］用电子显微镜对蜂胶疫苗的超微结构进行了研究，发现蜂胶颗粒是许多大小不等的圆形颗粒，平均直径为100～200nm，其周围吸附有大量抗原粒子，蜂胶颗粒之间也相互吸附，使蜂胶颗粒与抗原之间形成“抗原-蜂胶颗粒-抗原-蜂胶颗粒-抗原”的网状结构或不规则的聚集状结构，同时含有少量游离的抗原粒子（约占总抗原的15%）。蜂胶疫苗的这种独特超微结构使蜂胶疫苗的稳定性超强，既可耐冷又可耐热，具有易储存且储存期长的特点，可低温或高温保存；独特超微结构也使蜂胶疫苗微粒在动物体内的释放较为缓慢，从而起到了延长动物体内抗体存在时间、延长疫苗免疫保护期的作用。

2　蜂胶佐剂在动物疫苗的研究及应用

据现代生物学不完全统计，蜂胶中含有生物体生存所必需的34种化学元素，另外，蜂胶中还包含70余种黄酮类化合物及多种萜类化合物，含有组氨酸、赖氨酸、缬氨酸等微量氨基酸及维生素B1（硫胺素）、烟酸、泛酸、维生素B2（核黄素）维生素B3等B族维生素，此外，还含有丰富的钙、磷、钾等矿物质和锌、硒、锰、钴等微量元素，这些复杂的化学成分，决定了蜂胶有消炎、抗菌、抗病毒、促进组织再生和增强机体免疫力等多种生物学作用。

2.1禽用疫苗（1）沈志强等［6］以蜂胶为佐剂研制的禽霍乱蜂胶菌苗7d后可产生坚强的免疫保护力，可维持6个月的有效保护期，保护期间保护率近100%。蜂胶作为疫苗佐剂，可有效调动机体的免疫防护系统，并全面刺激机体免疫器官发育。程超等将蜂胶乙醇提取物（EEP）用作佐剂制备鸡减蛋综合征（EDS-76）疫苗，用该疫苗接种雏鸡，研究其对雏鸡血液中T淋巴细胞、B淋巴细胞比例的影响，发现免疫过EEP佐剂的EDS-76疫苗后，雏鸡血液中T淋巴细胞的比例显著增加。邱昌庆等［7］用3批蜂胶作为佐剂的EDS灭活苗分别免疫成年产蛋母鸡后，定期检测免疫后母鸡体内HI抗体的动态变化，结果发现EDS蜂胶苗与EDS油苗的免疫期相当。赵恒章等［8］用地方性鸡大肠杆菌为菌种制备多价蜂胶灭活苗，并将其应用于实践，结果显示，接种本蜂胶佐剂灭活苗后动物产生抗体较早，并且可维持较为理想免疫保护期。欧阳素贞等［9］以大肠杆菌为菌种，以蜂胶为佐剂研制大肠杆菌多价蜂胶苗，用其免疫肉仔鸡，跟踪研究其对肉仔鸡的免疫效果，结果证实免疫过该蜂胶佐剂灭活疫苗的肉仔鸡对大肠杆菌病的免疫效果确实，获得了较为满意的免疫效果。沈志强等［10］以禽致病性大肠杆菌常见血清型O1/O154、O2/O66、O18、O78、O8/O93及禽多杀性巴氏杆菌强毒株C48-1、C48-2为菌种，以蜂胶为佐剂制备禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联蜂胶佐剂灭活疫苗。经动物试验证实该疫苗安全且免疫效果可靠，二者之间无明显的干扰现象，免疫后5～7d即可产生高水平的免疫保护力。短期内对鸡大肠杆菌病和禽霍乱的保护率均达到100%。（2）李琳等［11］以蜂胶为佐剂按比例加入小鹅瘟（GP）病毒灭活液制备小鹅瘟蜂胶佐剂灭活苗，制苗后合并油乳剂灭活苗进行应用试验，与油乳剂灭活苗进行疫苗效力、安全性、保存期及免疫持续期对比，结果表明小鹅瘟蜂胶灭活疫苗不但安全性好，而且第5d即产生有效抗体，有效抗体可维持90d，明显高于普通油乳剂灭活苗，在免疫效果方面更是远远胜于普通油乳剂灭活苗。（3）王耀邦等［12］以蜂胶为佐剂，以从患病樱桃谷鸭群和番鸭群中分离到的鸭疫里氏杆菌（RA）Z-3和W-4株为菌种，研制鸭疫里氏杆菌蜂胶佐剂灭活苗，接种6日龄雏鸭，10d后用相应的2株强毒进行攻击，可使雏鸭获得80%以上的免疫保护率，应用于临床后其免疫保护率也均在92%以上，蜂胶疫苗于4℃保存半年后，依旧保持均匀稳定的物理性状。陈洁等［13］利用某肉鸭场分离的I型鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）菌株研制了蜂胶佐剂灭活疫苗，接种5日龄雏鸭后表现出了良好的安全性及免疫保护力。4倍剂量注射仍未引起雏鸭接种反应，单次免疫雏鸭后分别于3d、7d、10d、14d和21d进行攻毒保护试验，结果该蜂胶佐剂灭活苗对雏鸭的平均保护率达84%。（4）邹永新等［14］以蜂胶为佐剂，以筛选出的3株免疫原性良好的鸽禽I型副粘病毒（A/PMV-1）毒株作为种毒，研制成蜂胶佐剂混合毒株灭活疫苗，进行安全试验、效力试验后证实其使用安全、抗原性良好。田间应用后证实其免疫保护效果确实，4～8℃条件下保存，至少可保存半年。

2.2猪用疫苗窦兰清等［15］将蜂胶佐剂应用于猪旋毛虫病的防治，发现蜂胶作为佐剂可显著提升动物机体的细胞免疫水平，获得了满意的保护效果。李鹏等［16］以仔猪水肿病致病株O138、O139、O141及地方流行菌株作为菌种、以蜂胶为佐剂研制疫苗，免疫小鼠及仔猪后攻毒发现，免疫组全部健活，保护率达100%。赵恒章等［17］从发病猪场分离出支气管败血波氏杆菌和巴氏杆菌制成蜂胶苗，使该猪场的猪传染性萎缩性鼻炎得到有效控。陈希文等［18］以猪致病性大肠杆菌绵阳分离株为菌种，分别制备蜂胶灭活苗、铝胶灭活苗和油乳剂灭活苗，三种疫苗分别免疫小鼠后，对比小鼠体内的特异性抗体水平及抗体的消长规律，发现相比于铝胶灭活苗及油乳剂灭活苗，小鼠免疫蜂胶苗后第3天即有明显抗体产生，第56天时其体内的抗体仍维持较高水平，蜂胶佐剂苗具有产生抗体速度快、免疫持续时间长等优点。马霞等［19］通过对比蜂胶佐剂、油乳剂及铝胶佐剂对猪细小病毒灭活疲苗免疫保护的影响，发现与传统油乳剂疫苗和铝胶佐剂疫苗相比，蜂胶佐剂疫苗在降低猪细小病毒对免疫豚鼠免疫机能的损害、增加疫苗的免疫保护水平方面所起的作用更为显著。

2.3反刍动物用疫苗罗金印等［20］用4种不同佐剂的乳牛乳隙炎多联疫苗进行攻毒保护试验，4种佐剂疫苗分别免疫乳牛后，结果证实蜂胶疫苗的免疫效果明显优于其他3种佐剂的疫苗。邵洪泽等［21］以蜂胶为佐剂，按比例加入牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎地方毒株，制成二联多价蜂胶灭活苗，进行中间试验、攻毒试验等检验，表明该蜂胶灭活苗对牛具有良好的保护效力。

2.4兔用疫苗杨增歧等分别用兔瘟组织灭活苗与蜂胶佐剂的兔瘟灭活苗免疫家兔，对比两种疫苗的免疫效果，结果显示：蜂胶佐剂灭活苗的免疫效果明显优于组织灭活苗。又据报道，用淫羊藿总黄酮和蜂胶初提物研制出的淫羊藿-蜂胶佐剂（Epimediumpropolisadjuvant，EPA）与疫苗配合后使用，可显著提高动物机体免疫力水平。向会耀等［22］选用菌株O2、O78及O157菌株，研制多价大肠杆菌蜂胶佐剂灭活苗和氢氧化铝胶苗，比较两种苗对E.coli的免疫原性大小，结果显示蜂胶佐剂苗对同血清型菌株的攻击具有良好的保护作用。

参考文献

［1］王小明, 刘逆夫. 微波提取蜂胶总黄酮的工艺研究［J］. 中国医药导报, 2007, 21∶127-128.

［2］王茹, 谢印乾, 沈志强等. 蜂胶的免疫增强作用及其在疫苗中的应用［J］. 中国畜牧兽医, 2007, 02∶93-95.

［3］沈志强. 鸡新城疫蜂胶灭活疫苗的制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性的研究［J］.中国预防兽医学报, 2000, 22（4）, 275-277.

［4］向会耀, 谭玉梅, 向雅倩等. 蜂胶佐剂对E.coli多价灭活苗免疫小鼠效果的实验研究［J］. 细胞与分子免疫学杂志, 2008, 05∶535-536.

［5］柴家前, 王玲, 庞昕等. 纳米蜂胶颗粒对鸡免疫功能的影响［J］.畜牧兽医学报, 2002, 33（4）∶412-416.

［6］沈志强. 禽霍乱蜂胶灭活疫苗研究与应用总结［J］.中国预防兽医学报, 1995, 4∶27-30.

［7］邱昌庆, 李英才, 高双娣等. 鸡减蛋综合征蜂胶佐剂灭活苗免疫期的试验研究［J］. 中国兽医科技, 1995, 09∶5-6.

［8］赵恒章, 刘保国, 李军民. 地方性鸡大肠杆菌多价蜂胶灭活苗的制备及应用［J］. 甘肃畜牧兽医, 2004, 04∶5-7.

［9］欧阳素贞, 王双山, 张福良等. 肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研制［J］. 中国兽医学报, 2005, 03∶253-254.

［10］沈志强, 刘吉山, 李峰等. 禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗的研究［J］.中国预防兽医学报, 2004, 26（4）∶290-297.

［11］李琳, 邵洪泽, 毛文智等. 小鹅瘟蜂胶灭活疫苗的研究［J］.吉林畜牧兽医, 2008, 29（9）∶8-12.