无创产前检测在产前筛查染色体高风险后续诊断中的应用



无创产前检测在产前筛查染色体高风险后续诊断中的应用

冯明杰, 褚光萍, 查建梅

(江苏省张家港市妇幼保健所 群体保健科, 江苏 张家港, 215600)

关键词:产前筛查; 高风险; 无创产前检测; 侵入性产前诊断

中国是新生儿出生缺陷的高发国家之一，每年出生人口中先天畸形达80～120万人[1]。其中唐氏综合征(DS)和爱德华氏综合征(ES)是最常见的胎儿染色体病及出生缺陷，目前尚无有效的治疗方法[2]。产前筛查与产前诊断是减少出生缺陷的有效预防措施[3-4]。目前临床上广泛开展的产前筛查，是通过对母体血清学标志物的检测来筛选可能患有DS、ES的高风险孕妇，然后对其进行产前诊断，包括绒毛活检、羊水穿刺、脐静脉血穿刺。这三种技术为侵入性产前诊断(IPD)，有时可引起流产和感染等并发症。近年来，随着母体外周血中胎儿游离DNA的发现[5]，无创产前检测(NIPT)胎儿非整倍体技术得到了迅速的发展和广泛的临床应用，为广大孕妇的产前筛查与诊断模式提供了新的选择。本文对2012年1月—2014年12月在本所进行孕中期产前筛查孕妇的随访，对1 371例产前筛查染色体高风险孕妇的后续诊断进行回顾性分析。

1资料与方法

1.1　一般资料

2012年1月—2014年12月在本所接受产前筛查的孕15～20+6周、预产年龄17～35岁的孕妇32 459例，筛查出染色体高风险1 371例，包括DS高风险1 301例、ES高风险70例。

1.2　方法

1.2.1产前筛查：抽取孕妇空腹静脉血2～3 mL，采用时间分辨法检测血清中AFP、free-β-HCG浓度，应用PE公司1420型半自动时间分辨仪，使用其配套试剂盒，结合孕妇年龄、孕周、体质量、吸烟史、糖尿病史、异常妊娠史等临床资料，应用PE公司2T分析软件评估胎儿患DS、ES和NTD的风险值。

1.2.2NIPT：采集孕12～24周孕妇外周血5 mL，提取其中游离DNA，采用第二代高通量测序技术进行覆盖度测序[6]，最后通过生物信息分析，得出胎儿患染色体非整倍体疾病的风险率[7]。若该方法检测为高风险，仍需进行PID。

1.2.3IPD：孕15～24周者在B超引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水20～30 mL，>24 周者在B超引导下抽取脐血0.5～1 mL, 进行细胞染色体核型分析。

1.3　产前筛查高风险评估标准及后续诊断

DS高风险的截断值为1/270，ES高风险的截断值为1/350，NTD高风险的截断值为1/300，大于等于以上截断值的都定为高风险。对筛查出的高风险孕妇，通过电话召回，由本所产科门诊医生专人对其进行优生咨询，指导高风险孕妇进行后续诊断。经知情同意，DS高风险及ES高风险孕妇可直接选择IPD，包括羊水穿刺、脐静脉血穿刺对羊水细胞或胎儿血细胞培养后进行染色体核型分析以明确诊断，也可先行NIPT，结果为高风险再行IPD。以上明确诊断者建议终止妊娠。

1.4　随访

由本所群体保健科专人负责对所有产前筛查对象的妊娠结局进行随访，充分利用三级妇幼保健网及妇幼信息管理系统收集相关信息，并重点对高风险孕妇的后续诊断情况及妊娠结局进行电话追踪随访，随访结果定期收集汇总。

2结果

1 371例染色体高风险(包括DS高风险1 301例，ES高风险70例)孕妇中，选择NIPT415例，选择IPD335例。415例NIPT中，有3例提示三体高风险：1例提示DS，后经羊水染色体核型分析确诊DS；另1例提示DS，行B超引导下羊水穿刺时发现为死胎，后予引产，胎儿外观吻合DS表型；1例提示ES，后经羊水染色体核型分析确诊ES。335例直接行IPD孕妇中，检出DS3例、ES1例。以上共确诊5例DS、2例ES，均得以及时终止妊娠。412例NIPT低风险孕妇均已分娩，通过对已出生新生儿的随访，未发现有DS或ES患儿。

3讨论

本研究结果显示，1371例染色体高风险(包括DS高风险1301例，ES高风险70例)孕妇中，有415例选择了NIPT，占30.27%；335例选择了IPD，占24.43%。相比传统的IPD，更多的孕妇选择NIPT，其原因可能是：羊水和脐血染色体核型分析虽然是相对安全可靠的产前诊断方法[8]，但仍然是有创伤性技术，可能会引起流产、感染、死胎等并发症，这使得孕妇及家属在选择时有所顾虑。而NIPT只需抽取孕妇静脉血，通过扩增孕妇血中游离胎儿DNA片段，采用高通量测序技术对其进行测序和计数，通过生物信息技术的处理，来判断胎儿是否存在染色体异常。与IPD相比，NIPT具有无创，快速的特点，可有效减少对孕妇身体的创伤和心理精神负担。Lau等[9]研究显示，NIPT进行唐氏检查能够使95%的孕妇焦虑情绪得到缓解。

研究[10-12]已证实孕妇血中游离DNA高通量测序用于胎儿常见染色体非整倍体的无创性产前检测具有较高的检测敏感性和特异性。目前，国内专家[13]将其定位于“近似于产前诊断水平的”目标疾病指向精确的产前筛查技术。本文中接受NIPT的415例孕妇中，提示高风险3例，2例经羊水染色体核型确认，结果一致；1例提示DS，行羊水穿刺时B超发现死胎，予引产，胎儿外观吻合DS表型；412例低风险者经随访未发现有DS或ES患儿出生。

NIPT除了在本文中应用于产前筛查高风险的后续诊断，还可将其临床应用延伸到产前筛查临界风险值及单项值异常孕妇中。由于目前临床上普遍采用的产前筛查存在较高的假阳性率和漏检率，孕中期二联血清学筛查在5%的假阳性率前提下，只有60%～65%的检出率 ，所以对临界风险值及单项值异常的处理得到越来越多的关注。既往这些孕妇在权衡时往往考虑技术风险和并发症的发生而对IPD接受度很低，自从开展NIPT后，临界风险、单项值异常者选择NIPT人数明显增多，有效地提高了产前筛查与诊断的效率，降低出生缺陷发生。

NIPT除了上述在产前筛查高风险、临界风险及单项值异常孕妇中的应用，还有很多的适宜对象。随着社会经济的发展，城市中高龄产妇比例逐年上升，近2年国家二胎政策的放开，也一定程度上增加了高龄妇的比例，这些都将增加对产前诊断的需求。而传统的IPD技术存在诊断通量低下、专业人员缺乏、人员培训和实验室建设周期长、报告时限过长等诸多问题，NIPD的临床应用，必将有效地缓解这一现状。NIPT的适宜孕周为孕12～24周，对于一些有高危因素的孕妇(孕期接受过致畸因素或生育过DS患儿)在孕早期采用NIPT能实现早期诊断，而对于错过产前筛查孕周的孕妇，NIPT也不失为一种理想的选择。

参考文献

[1]张方芳, 徐永莲, 张光艳, 等. 孕中期产前筛查/产前诊断在减少出生缺陷中的价值[J]. 中国妇幼保健, 2013, 28(28): 4711.

[2]孟西娜, 唐叶. 无锡地区21568例孕妇孕中期产前筛查结果分析[J].中国优生与遗传杂志, 2012, 20(12): 80.

[3]黄瑞萍, 张雅英, 孙达成, 等. 281例胎儿染色体病的产前诊断分析[J].中国妇幼保健, 2006, 21(17): 2381.

[4]吴清明, 周瑾, 刘伟, 等. 妊娠中期1641例产前筛查及95例产前诊断结果分析[J].现代生物医学进展, 2010, 10(14): 2679.

[5]Lo Y M, Corbetta N, Chamberlain P F, et al. Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum[J].Lancet, 1997, 350(9076): 485.

[6]Benn PA, Chapman AR.Ethical challenges in providing noninvasive prenatal diagnosis[J].Curr Opin Obstet Gynecol, 2010, 22(2): 128.

[7]Wright D, Bradbury I, Malone F, et al. Cross-trimester repeated measures testing for Down′s syndrome screening: an assessment[J]. Health Technol Assess, 2010, 14(33): 1.

[8]刘启兰, 胡娅莉, 许争峰, 等. 江苏地区以人群为基础的唐氏综合征产前筛查和诊断研究[J]. 中华医学遗传杂志, 2010, 27(3): 3.

[9]Lau T K, Chan M K, Salome L P S, et al. Clinical utility of noninvasive fetal trisomy(NIFTY) test-early experience[J]. J Matern Fetal Neonatal Med, 2012, 25(10): 1856.

[10]Dan S, Wang W, Ren J, et al. Clinical application of massively parallel sequencing-based prenatal noninvasive fetal trisomy test for trisomies 21 and 18 in 11, 105 pregnancies with mixed risk factors[J].Prenat Diagn, 2012, 32: 1225.

[11]Bianchi D W, Platt L D, Goldberg J D, et al. Genome-wide fetal aneuploidy detection by maternal plasma DNA sequencing[J]. Obstet Gynecol, 2012, 119: 890.

[12]Jiang F, Ren J, Chen F, et al. Noninvasive Fetal Trisomy(NIFTY)test: an advanced noninvasive prenatal diagnosis methodology for fetal autosomal and sex chromosomal aneuploidies[J]. BMC Med Genomics, 2012, 5: 57.

[13]边旭明, 蒋宇林, 戚庆炜.产前诊断, 走中国自己的道路[J]. 中华妇产科杂志, 2012, 47(11): 801.

收稿日期:2015-05-10

中图分类号:R 714.53

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)24-107-02

DOI:10.7619/jcmp.201524040