ELISA检测GFAP的临床意义

高元元++++++牛国平

[摘要] 目的 探讨出血性脑卒中和缺血性脑卒中患者血清中胶原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表达以及对预后的影响。方法 用ELISA方法检测出血性脑卒中和缺血性脑卒中患者和健康对照组外周中GFAP的表达水平，统计分析GFAP表达与脑卒中的进展及预后的关系。结果 出血性脑卒中患者外周血GFAP表达水平显著高于缺血性脑卒中患者和正常对照组，差异有统计学意义 （P<0.05）。 结论 出血性脑卒中患者外周血GFAP表达水平高于缺血性脑卒中患者和正常对照组，且预后更差。

[关键词] ELISA；脑卒中；GFAP

[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）12（a）-0038-02

胶原蛋白的一个重要组成成分就是胶原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP），同时GFAP也是胶质细胞的标志性蛋白和主要的骨架成分[1]。GFAP存在于很多星形胶质细胞谱系的亚群中，在现阶段，普遍的应用于判别病理和正常状态下星形胶质细胞来源的重要物质。与此同时，GFAP还有利于星形胶质细胞对于正常形态的维持，使得星形胶质细胞的突起更好的生长和延长。有研究表明，中枢神经系统损伤时，胶原纤维酸性蛋白可释放入外周血，特别是脑外伤后外周血中胶原纤维酸性蛋白浓度显著升高[2]。脑卒中（stoke），也称为脑血管意外（cerebrovascular accodent）或者中风，是一类突发性急性脑血管疾病，多数是由于缺少局灶性神经功能而引起的，包括脑梗塞、蛛网膜下脑出血、脑出血三类。脑卒中是全球范围内发病率较高的疾病，它是我们国家男性第3位死因和女性第2位死因[3]的疾病，每年有100多万人死于脑卒中，是死于缺血性心脏病人数的3倍多[4]。在老年人中，脑卒中是一类易致残或死亡的疾病，现今人口逐渐老龄化，脑卒中对人口的危害也越来越严重。因此，防治脑卒中就成为医院的一个重要工作，也引起社会的重视，所以探讨GFAP的水平与脑卒中关系密切，对临床有指导脑卒中的类型及其预后有重要价值。现分析2012年12月—2013年12月间住院的缺铁性脑卒中以及出血性脑卒中患者80例的临床资料，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在徐州市中心医院神经内科和神经外科中，选择住院的缺血性脑卒中以及出血性脑卒中患者，共80例。所有的患者都满足在全国第4届脑血管学术会议上所制定的诊断标准，且均通过颅脑CT的检查进行确诊。80例患者中没有继发性脑出血等基础性疾病。其中出血性脑卒中组男26例，女14例；年龄28～79岁。缺血性脑卒中组男22例，女18例；年龄35～82岁。正常对照组40例，均为来该院健康体检者，男20例，女20例；年龄22～70岁。

1.2 主要试剂和仪器

GFAP检测的ELISA试剂盒为美国Milipore公司生产；采集患者外周血5 mL，用3 000 r/min离心进行15 min，让血清分离，在-80 ℃的冰箱中保存以待检测。采用瑞士奥斯邦酶免之星全自动酶免分析仪。

1.3 方法

ELISA检测血浆GFAP水平。脑卒中患者入院后立即采集外周血，正常对照组为健康体检时抽取5 mL静脉血，血液标本置于抗凝管中，在室温下，3 000 r/min离心15 min，取血浆置-80 ℃保存待检。采用ELISA检测血浆GFAP浓度，用伯乐酶标仪BIO-RAD Model 680检测样品的吸光度值，并参照试剂盒说明书计算出血浆胶原纤维酸性蛋白标准曲线和浓度，结果以ng/L表示。

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0软件对数据进行相关分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，进行t检验。

2 结果

2.1 缺血性脑卒中患者和出血性脑卒中患者GFAP表达相关性分析

出血性脑卒中患者外周血GFAP表达明显高于缺血性脑卒中组，同时大量出血组明显高于少量出血组，且高于正常对照组，见表1。

表1 缺血性和出血性脑卒中组GFAP水平与对照组比较[ng/L，（x±s）]

注：与对照组相比，△P<0.05；与缺血性脑卒中组相比，□P<0.05。

2.2 GFAP水平与出血量关系

影像学显示出血量越大，血肿体积越大，血清GFAP的水平越高（52.35±5.06）ng/L，比少量出血组的（41.10±7.02）ng/L高，差异有统计学意义（P<0.05），用Speman等级进行相关分析，出血性脑卒中患者的出血量与外周血GFAP水平成正相关，差异有统计学意义（r=0.912 3，P<0.01）

3 讨论

目前，临床上脑卒中的诊断主要依靠医师的临床检查和影像学技术（CT 或MRI）进一步地证实。目前，GFAP作为脑卒中的生物标志物的研究有很大进展，这在急诊环境中对于脑卒中的诊断、分型或甚至预后有重要的价值。

GFAP是一类酸性蛋白，其分子量在50～52 kDa之间。GFAP作为直径8～10 μm的星形胶质细胞的中间丝，存在于细胞质和核周之间，是星形胶质细胞的特异性分子标记物之一，对神经元起支持和营养作用。GFAP不仅明显的影响神经系统功能的康复、突起的再生和受损神经元的存活，而且对于星形细胞对损伤的反应程度有决定性作用。如果中枢神经系统受损，会使得突起增长且增多、细胞体积增大以及星形细胞的活化增加，GFAP的合成速度大大提高，因此GFAP的含量增加，是判断星形胶质细胞激活的主要标准，还可以在一定程度上判断脑损伤的程度[5～7]。通过临床研究知道，脑梗死患者在发病6 h后，GFAP在血清中的含量增加[8]，2～6 d时，达到最高值，脑梗死体积和神经缺失症状也与GFAP水平是正相关的，而且还可以判断瘫痪肢体神经功能在3个月后的恢复情况[9]。此外，也有研究表明GFAP作为星形细胞的特异性蛋白，在急性脑损伤时均有异常表达，细胞破坏后其大量释放，它们在外周血中的升高程度与多种急性脑损伤疾病严重程度及预后密切相关，目前被认为是判定脑损伤严重水平的实验室标准[10]。endprint

通过临床研究可知，出血性脑卒中患者在发病后，GFAP在血清中的含量明显增加，且患者的症状和GFAP水平明显相关，且与预后密切相关；缺血性脑卒中组患者的血清GFAP水平升高，但没有出血性脑卒中组升高显著，与之相对应的是出血性脑卒中组的预后和后遗症情况较缺血性脑卒中组更为严重，原因可能与出血性脑卒中组神经元坏死和脑水肿更为严重，增大了星形胶质细胞的活性，引起星形胶质细胞坏死，大大增加了血脑屏障通透性，从而明显的提高了GFAP在血浆中的含量。所以，对于脑卒中患者，应该检查其GFAP在血清中的变化情况，不单单是有利于急性期脑损伤程度的判断，还可以很好的评估脑卒中的预后。此外，有报道称动脉瘤性蛛网膜下腔出血后，血浆GFAP浓度明显升高，与蛛网膜下腔出血后神经元坏死及神经功能预后不良显著相关[11]。也有报道称，脑外伤后，血浆GFAP水平显著升高[2]，明显高于健康人群。

GFAP作为诊治脑卒中的重要实验室指标具有较高的敏感性和特异性，有助于鉴别缺血性脑卒中和出血性脑卒中[12]；脑梗塞后能早期释放且稳定，可迅速定量测定而且价廉，有助于临床医生诊断和评估脑卒中进展情况，改善病人的预后。

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（收稿日期：2014-08-24）endprint