CHK-2和RSF-1在老年人宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

甄敏

子宫颈鳞状细胞癌临床常见，其发病以青年人和老年人多见。老年人发病常是非HPV病毒感染相关的，此时多种促癌基因和蛋白起明显的作用，常常伴有抑癌基因的失活。细胞周期检测点激酶(CHK-2)是细胞周期检测点G1/S、S和G2/M发挥作用的主要激酶，可以有效修复DNA有损伤，近来其在肿瘤的作用逐渐引起关注［1］。空间重组因子1(RSF-1)是促癌基因，可以有效的使细胞生长信号和生长环境发生变化，促进细胞的增殖，尤其是肿瘤进展中［2，3］。本文探讨老年人子宫颈鳞状细胞癌中CHK-2和RSF-1的表达，关注其相关性，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2008年1月至2010年12月我院行子宫颈鳞状细胞癌根治手术的老年人作为观察组，术后均常规留取的蜡块组织，纳入均符合WHO中的诊断标准。共观察112例，其中男59例，女53例;年龄60～85岁，平均年龄(68±5)岁。其中角化型鳞癌50例，非角化型鳞癌62例。患者手术前均未进行放、化疗。同时选取子宫脱垂并诊断为慢性子宫颈炎的老年人的宫颈鳞状上皮组织60例作为对照组，其中男30例，女30例;年龄60～82岁，平均年龄(66±6)岁。2组一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫组化检测CHK-2和RSF-1蛋白的表达

CHK-2和RSF-1蛋白的浓缩液均购自武汉博士德生物工程有限公司。在正式实验前进行预实验，依不同比例进行测试，选择染色最理想的浓度进行实验。CHK-2和RSF-1的检测应用免疫组化二步法。严格按说明书进行操作。

1.3 CHK-2和RSF-1的判定方法 CHK-2的实验结果以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性反应细胞，RSF-1的实验结果以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性反应细胞，每张切片中选择染色较集中的上皮细胞区域，计数5个400倍的视野，取其平均值作为样本最终的阳性表达率，以阳性细胞≥25%定为阳性，以阳性细胞＜25%定为阴性。

1.4 统计学分析 应用SAS 6.12统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组CHK-2和RSF-1蛋白表达阳性率比较

CHK-2和RSF-1在2组中表达的阳性率差异有统计学意义(P＜0.01)，即观察组中CHK-2低表达，而RSF-1高表达。见表1、图1～6。

表1 2组CHK-2和RSF-1表达例(%)

图1 宫颈鳞癌(HE×100)

图2 正常宫颈鳞状上皮(HE×100)

图3 CHK-2在宫颈鳞癌中阳性表达(IHC×100)

图4 CHK-2在正常宫颈鳞状上皮中阴性表达(IHC×100)

图5 RSF-1在宫颈鳞癌中阳性表达(IHC×100)

图6 RSF-1正常宫颈鳞状上皮中阴性表达(IHC×100)

2.2 观察组中不同临床特征患者CHK-2和RSF-1蛋白表达阳性率比较 观察组中CHK-2和RSF-1的表达的与肿瘤的最大径、颈管累及深度、淋巴结转移和Ki67的表达密切相关。见表2。

表2 观察组中不同临床特征患者CHK-2和RSF-1蛋白表达阳性率比较 例(%)

2.3 观察组中CHK-2和RSF-1表达的相关性分析

对观察组中CHK-2和RSF-1的表达进行线性相关性分析，结果显示 CHK-2和 RSF-1的表达呈负相关(r=－0.46，P=0.0174)。

3 讨论

宫颈鳞癌最常见，发生在老年患者常是非HPV感染相关的，此时促进肿瘤进展的主要是癌基因的激活和抑癌基因的失活，这时诱导肿瘤进展过程中，肿瘤细胞增殖活性升高，生长速度加快，侵袭能力更强［4］。CHK-2是目前研究较多的细胞周期检测点激酶，也是细胞周期检测中最关键的效应蛋白激酶［5，6］。CHK-2作为ATM和ATE的下游效应基因，如果细胞的DNA受到损伤或破坏时，被ATM和ATR活化的CHK-2通过其下游的底物磷酸酶CDC25和14-3-3蛋白来激活细胞检测点关卡，使细胞周期阻滞在G1/S转折处、S期和G2/M 转折处，此时发挥DNA 修复的作用［7，8］，如果其表达丢失或异常，则细胞增殖活性出现异常。RSF-1又名HBXAP，是位于11号染色体长臂1区3带5亚带区域的扩增基因，其包含了PHD区域［9］。近年来相关研究认为RSF-1是人类核心蛋白及染色质组装相关因子家族的一员，可编码细胞核蛋白，参与染色体重组和转录调控［10，11］。Mao 等［12，13］通过在侵袭性口腔鳞状细胞癌中研究RSF-1的表达，认为RSF-1的表达与肿瘤的脉管浸润、病理性核分裂像的数量、转移、肿瘤复发和疾病的分期密切相关，并认为RSF-1上调与肿瘤的生物学行为密切相关，并与肿瘤细胞的生长和疾病的生存密切相关。

本研究中所应用的是较为成熟的免疫组化技术，结果显示观察组中CHK-2表达的阳性率明显低于对照组(P＜0.01)，观察组RSF-1表达的阳性率明显高于对照组(P＜0.01)，提示CHK-2低表达、而 RSF-1高表达对肿瘤有明显的促进作用，也间接提示CHK-2起抑癌的作用，而RSF-1起促癌的作用。本实验显示观察组中CHK-2和RSF-1的表达与肿瘤的最大径相关，提示二者异常表达可以有效地促进肿瘤的异型增生和失控性生长。实验结果显示CHK-2和RSF-1的表达与颈管累及深度有关，提示二种蛋白与肿瘤的侵袭和浸润性生长相关，由于肿瘤的生长呈树根样的生长，因此二者异常表达时可以引起肿瘤的生长更活跃，对周围组织的破坏作用更强。结果显示CHK-2和RSF-1异常表达与肿瘤的淋巴结转移相关，提示CHK-2和RSF-1参与肿瘤的淋巴道侵袭过程和淋巴道转移。结果显示CHK-2和RSF-1的表达与Ki67标记的细胞增殖相关，提示二者参与肿瘤细胞的增殖过程，即CHK-2低表达、RSF-1高表达时肿瘤细胞的增殖活跃，细胞繁殖快，使肿瘤的体积增大，侵袭能力增加，此点与CHK-2和RSF-1表达与肿瘤的最大径相关的结果是一致的，即高增殖的肿瘤生长快。由于肿瘤的侵袭、生长、淋巴结转移及Ki67表达的增殖指数均与肿瘤的生物学行为和预后相关，因此提示CHK-2和RSF-1的表达可能与肿瘤的预后有一定关系，具体的生存分析有待后结续研究中证实。实验结果显示观察组中CHK-2和RSF-1的表达呈负相关性，提示CHK-2和RSF-1可能具有协同作用，即二者可能有直接或间接的通路作用，其作用的间接途径可能有对增殖的调节和血管生成的调节，但是具体机制及作用途径有待更多基础实验证实。

综上所述，老年人宫颈鳞癌中CHK-2和RSF-1高表达，二者的协同作用共同促进肿瘤的发生发展，使肿瘤的侵袭和转移能力增强。术后联合检测组织中CHK-2和RSF-1蛋白的表达对判断宫颈鳞癌的预后可能有重要价值。

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5 马全富，黄晓园，高庆蕾，等.CHK1/2和PLK1蛋白在子宫内膜癌中的表达.肿瘤防治研究，2008，35:424-425.

6 黄晓园，高庆蕾，庄亮，等.CHK1/2和PLK1蛋白在宫颈良恶性病变组织中的表达及其意义.中国癌症杂志，2007，17:429-431.

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8 王玉祥，祝淑钗.细胞周期检测点激酶CHK1、CHK-2与放射敏感性.肿瘤学杂志，2007，13:178-180.

9 罗海霞，陈辉.空间重组因子1/乙型肝炎病毒X相关蛋白在卵巢癌中的研究进展.检验医学与临床，2013，10:1884-1885.

10 Lin CY，Tian YF，Wu LC，et al.Rsf-1 expression in rectal cancer:with special emphasis on the independent prognostic value after neoadjuvant chemoradiation.J Clin Pathol，2012，65:687-692.

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12 Mao TL，Hsu CY，Yen MJ，et al.Expression of Rsf-1，a chromatin-remodeling gene，in ovarian and breast carcinoma.Hum Pathol，2006，37:1169-1175.

13 Fang FM，Li CF，Huang HY，et al.Overexpression of a chromatin remodeling factor，RSF-1/HBXAP，correlates with aggressive oral squamous cell carcinoma.Am J Pathol，2011，178:2407-2415.