CA-1500全自动血凝仪两种方法测定纤维蛋白原的结果比较

欧阳贵平，谢香萍，李小花，刘石长，江萍

(赣州市南康区第一人民医院检验科,江西 赣州341400)

纤维蛋白原(Fg)是血浆中含量最多的一种凝血蛋白，其含量降低或功能异常均可致凝血功能障碍；作为一种与凝血相关的急性时相蛋白，在血栓性疾病的发生和发展中也有重要意义。近年来Fg定量已作为出血与血栓性疾病诊治中最常用的检查项目，因此对其测定的准确性也直接影响到临床诊断和治疗。目前，无论进口和国产全自动血凝仪对Fg测定多数都涵盖 Clauss法和PT-der法两种方法，本文就用Sysmex公司CA-1500全自动血凝仪Clauss法和PT-der法两种方法测定Fg的结果进行比较分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集本院2014年5月份门诊及住院病人凝血功能检查血浆255例，年龄2至69岁，男性150例，女性105例。

1.2 仪器 日本Sysmex公司CA-1500全自动血凝仪。

1.3 试剂 采用西门子公司生产的CA-1500全自动血凝仪配套试剂，PT-der法采用PT试剂盒，批号为：545546，ISI值为：0.96；Clauss法采用 Fg 测定试剂盒，批号为：538075，缓冲液批号为：547038。采用西门子公司生产的CA-1500全自动血凝仪配套凝血质控品：Dade CI-Trol Coagulation Control Level 1， 批 号 为 ：528147；Dade CI-Trol Coagulation Control Level 2，批号为：548239B。以上试剂和质控品均在有效期内使用。

1.4 方法 临床样本采集空腹静脉血 (所有样本均无溶血、黄疸和脂血)1.8ml于真空抗凝管(含0.2m l 109mmol/L枸椽酸钠抗凝剂)中,颠倒混匀,3000r/min离心10min，在2h内同时用Clauss法和PT-der法测定Fg含量，CA-1500全自动血凝仪检测临床样本时室内质控在控。依据Clauss法测定结果进行低值(Fg＜2.0g/L)、 中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)分组。

1.5 统计学方法 采用SPSS11.5软件进行统计学处理，计数资料用(x±s)表示，组间比较用t检验,P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1精密度 批内精密度同时用两种方法连续检测质控血浆Fg浓度20次，天间精密度同时用两种方法连续检测质控血浆Fg浓度20d，计算平均值、标准差(s)和变异系数(CV)，结果见表 1。

2.2 两种方法检测结果一致性分析 同时用Clauss法和PT-der法检测病人血浆Fg浓度,以Clauss法为标准,将结果分为低值(Fg＜2.0g/L)、中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)三组，PT-der法检测结果与Clauss法结果进行配对t检验和相关回归分析，Fg 含量在低值(Fg＜2.0g/L)、 中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)时，Clauss法和 PT-der法测定 Fg 的结果都有显著差异(P＜0.01)，显示出PT-der法测定值明显高于Clauss法测定值。结果见表2。

表1 Clauss法和PT-der法测定FIB的批内和天间精密度比较(n=20)

表2 Clauss法和PT-der法测定病人血浆纤维蛋白原含量结果比较及相关分析

3 讨论

Fg含量检测原理和方法包括蛋白质比色测定、浊度或光散射法测定、盐析测定、免疫法测定抗原等[1]。Clauss法和PT-de法测定的Fg均属于浊度或光散射法的一种，也是目前全自动血凝仪较普及的方法。Clauss法操作简单、实用精确、结果可靠，被WHO和CLSI推荐为参考方法，但试剂成本较高。其原理是在被检血浆中加入凝血酶，血浆即凝固，从国际标准品Fg参比血浆测定的标准曲线中获得被检血浆的Fg实际含量。凝血酶原导出法(PT-der法)是根据全自动血凝仪在测定凝血酶原时间(PT)的过程中，依据PT凝固曲线中光散射强度的改变程度，推导出Fg的浓度，因此不需要消耗试剂和消耗品，尽管该方法节约试剂、操作简单、快速，但只能对纤维蛋白原含量作出大致估计，当Fg含量明显异常时，不能准确判断[2]。

精密度评价是方法学评价的基础，本次研究用两种方法对厂家质控品进行批内精密度、天间精密度进行分析，结果显示Clauss法的批号528147的批内CV值为2.46%、天间CV值为6.86%，批号548239B的批内CV值为3.40%、天间CV值为6.25%；PT-der法批号528147的批内CV值为3.98%、天间CV值 7.14%，批号 548239B的批内CV值为5.00%、天间CV值7.51%,均在仪器允许的范围 (批内CV值<5%、总的CV值<10%)。CA-1500血凝仪PT-der法测定Fg结果精密度比Clauss法低,但在仪器的允许范围之内。

本实验室使用两种方法对255例不同浓度的临床样本进行检测，并对检测结果进行统计分析，Clauss法和PT-der法两种方法测定三组Fg结果有显著统计学差异 (P＜0.01)。在三组临床样本中,PT-der法测定Fg结果比Clauss法高,Fg浓度在中值(Fg2.0~4.0g/L)Clauss法与PT-der法测定结果相关系数(r值为0.8717)较高,在高值和低值的相关系数(r值分别为0.7943,0.6648)均较低,另外从本次试验两种方法测定的两个批号质控品的数据Clauss法测定548239B和528147的均值分别为2.06g/L和2.03g/L而PT-der法测定548239B和528147的均值分别为3.4g/L和2.76g/L，差异明显。由于测定方法的原理不同，PT-der法测定结果受到很大的影响。目前，国内外对PT-der法测定Fg方法可靠性研究主要有两种观点：一种是在Fg低值时与Clauss法结果无显著差异，在高值时有显著差异，PT-der法结果比Clauss法高[3-5]，另一种观点认为PT-der法结果与 Clauss法结果差异显著，PT-der法结果比Clauss法高,建议不使用PT-der法[6-8]。出现这种情况的原因可能与仪器、病人和试剂等因素有关[9,10]。综上，本实验室CA-1500血凝仪PT-der法不适合代替Clauss法测定血浆纤维蛋白原含量进行临床筛查、诊断和治疗。随着自动化血凝仪的普及以及测定方法的规范化和标准化，保证检验结果的准确性和可靠性，实现实验室数据互认，综合其它作者报道的PT-der法测定Fg的评价，使用Clauss法淘汰PT-der法测的组成(包括病人的年龄)定 Fg是一种必然趋势。在没有条件用Clauss法而用PT-der法的测定血浆Fg浓度的实验室应建立本实验室的生物参考区间，并对PT-der法测定结果与Clauss法测定结果进行比对，了解其检测性能，最大可能保证检验质量。

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