妊娠期单纯疱疹病毒分型检测应用进展

2015-03-25张媛媛王秀梅张丽萍尚海晶张丹浩综述王成彬审校

武警医学 2015年5期

关键词：疱疹病毒病毒感染抗原

张媛媛，王秀梅，张丽萍,尚海晶，张丹浩综述王成彬审校

综述

妊娠期单纯疱疹病毒分型检测应用进展

张媛媛1，王秀梅1，张丽萍1,尚海晶1，张丹浩1综述王成彬2审校

单纯疱疹病毒；分型检测；妊娠

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是人类病毒性疾病中常见的病原体之一[1]，属于疱疹病毒科α病毒亚科双链DNA病毒，呈球形，完整病毒由核心、衣壳、被膜及囊膜组成[2]。当孕妇感染这种病原体后，可以不表现出明显症状，但会引起习惯性流产、死胎、死产，以及胎儿先天缺陷或发育异常等不良妊娠结局[3，4]。随着围生医学的不断发展，优生优育越来越受到人们的重视，而HSV病毒感染也正是围产医学与优生遗传医学研究的重要内容之一[5]。目前，HSV病毒感染有上升趋势，因此实验室HSV病毒抗体检测对临床诊断及预防不良妊娠至关重要。为此，笔者就实验室血清HSV1/2型特异性抗体IgG、IgM检测结果在妊娠期间的应用进展做一综述。

1 HSV病毒分型

感染HSV病毒后病毒将潜伏在神经中枢，多种刺激都会导致病毒周期性复发。若机体免疫力强，机体会迅速产生特异性免疫力而康复，无明显症状。但大多数机体不能彻底清除病毒，当机体免疫力低下时，潜伏的HSV病毒复发，转为增殖性感染，出现临床症状[6]，如口唇疱疹、水疱、脓疱、生殖器疱疹等。HSV病毒直径150～200 nm，用限制性内切核酸酶或抗原分析可发现HSV有两个自然变异体HSV-1和HSV-2两型，两者之间虽然有5%的基因位点相同，但对人体的感染大不相同：HSV-1主要通过直接、间接接触或飞沫传播，常引起腰部以上的黏膜感染，如口腔、皮肤、黏膜、眼黏膜及中枢神经系统，偶见于外生殖器；HSV-2又称生殖道型，占90%，通常为性传播，偶见于口腔病变，主要引起生殖道黏膜的感染，也可经胎盘宫内传播或经产道传播给新生儿。HSV病毒感染现已是常见的性接触传播疾病之一[5]。

2 HSV病毒感染对妊娠的影响

3 妊娠期实验室HSV抗体检测

3.1 感染HSV病毒后的抗体变化 HSV病毒感染2～3 d，IgM可升高，1周后达峰值；HSV-IgG在1周后可被检测出。HSV病毒感染后若机体免疫力高，机体会迅速产生特异性免疫力而康复，HSV-IgM可在峰值过后维持一段时间，在感染2周后可迅速下降至正常水平，而HSV-IgG数值会维持在愈合期水平。大多数机体不能彻底清除病毒，HSV病毒可能处于潜伏状态。当机体免疫力低下时，潜伏的HSV病毒复发，转为增殖性感染，HSV-IgG会迅速升高，并在1周内达到峰值。在潜伏期，无症状期，复发期，HSV-IgM则检测不到。因此，HSV-IgM可作为HSV原发早期感染指标，HSV-IgG可作为HSV亚临床无临床症状及HSV病毒感染复发的指标[3]。

血清中特异性抗体IgM、IgG 阳性，在一定程度上还可评估孕妇感染对胎儿的损害程度[12]。孕妇孕前检查HSV-1，HSV-2型特异性抗体IgG、IgM可规避孕妇感染的风险，孕中检查 HSV-1，HSV-2型特异性抗体IgG、IgM可评估产道自然分娩新生儿感染HSV的风险。因此孕前，孕早、中、晚期检测血清HSV病毒特异性抗体IgG、IgM对了解胎儿感染情况，及早的给予临床干预和预防不良妊娠的发生起到了至关重要的作用[13]。

另据研究报道，孕20周前孕妇感染HSV-2型，可通过胎盘感染胎儿，流产率高达34%；孕20周后感染HSV-2型引起宫内感染的病例罕见，先天发育异常儿极少发生[13]。HSV-2型经产道感染最常见，占80%以上，并出现全身扩散，其中近半数新生儿死亡或有严重中枢神经系统损伤[14]。很多孕妇处于亚临床状态，很难早期诊断，因此，孕前、孕早期检测HSV2-IgG就显得尤为重要。

3.2 实验室HSV抗体检测目前HSV检测诊断的方法很多，有直接检查、病毒细胞分离培养法、HSV病毒抗原检测法、间接免疫荧光检测抗体法、抗体法、探针杂交、PCR。因检测方法不同，其灵敏度和特异性也大不相同。

3.2.1 直接检查通常是用荧光素标记或酶标记单克隆抗体对感染组织、脓疱液、分泌物进行免疫荧光染色或免疫组化染色，用荧光显微镜或光学显微镜直接检测细胞内 HSV 特异性抗原[8]。

3.2.2 HSV病毒细胞分离培养此方法是最敏感的检测方法，被广泛当作金标准。病毒细胞培养是以活细胞为宿主，使活病毒得以繁殖扩增，并且可对其分离株进行鉴别分型。但此方法周期长，病毒在细胞培养中增值非常慢，长者达数周才出现病变[2]。除此之外，此方法还要求严格，成本昂贵，操作繁琐，此方法适用于科研研究，不适于临床常规检测。

3.2.3 HSV抗原检测临床大多采用酶联免疫吸附法(ELISA)用于皮肤破损处HSV抗原检测[5]。HSV病毒感染典型者，临床会出现溃疡、水疱脓疱等，用棉签蘸取破溃处作标本，用双抗体夹心法检测抗原，可同时检出HSV-1型和HSV-2型。此方法对感染典型者，检出率高，对表现不典型者，检出率就低。这可能与感染典型者水疱新鲜，病毒抗原强数量多有关系。HSV抗原检测，敏感性、特异性较强，特别适合检测临床表现典型者。ELISA检测抗原影响因素也过多，温育箱温度，标本因素和人为操作因素等都会对结果产生影响，会导致假阳性的出现。

3.2.4 间接免疫荧光法检测HSV抗体该方法属半定量检测方法，其原理是将待测标本按1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512稀释，将稀释标本加到包被了HSV抗原的玻片上，温育一定时间，加入二抗即含Evens蓝兔抗人IgG荧光抗体，在荧光显微镜下观测滴度。此方法虽特异性强，但操作方法繁琐，人为因素影响观测结果太大，此方法检测HSV抗体已被实验室逐渐淘汰。

3.2.5 抗体法是临床上最常用的检测手段。HSVIgG 是抗 HSV 体液免疫应答的主要靶位，且使用多肽作抗原有较好的特异性和抗原性。用酶联免疫吸附试验(ELISA)能够对 HSV1-IgG和 HSV2-IgG 进行有效区分，从而进行分型检测。联合使用 HSV-1和 HSV-2型特异性抗体检测可以准确判断HSV 感染的发展阶段、严重程度、发病周期等重要病情信息。虽然血清抗体检测不能判断有无活动性 HSV 排放，但HSV 型特异性抗体诊断是发现HSV病毒感染亚临床或无症状患者的可行措施，对于预防性伴间和母婴间传播也具有重要意义[8]。

3.2.6 探针杂交根据碱基配对原则选定病毒 DNA 某段序列，合成或克隆为互补性探针序列，标记上同位素或生物素，用以检测样本中是否存在相应病毒 DNA。探针杂交技术具有一定的先进性和准确性，其特异度为 63%～100%，敏感度为 25%～92%。但要求条件较高，作为常规检验受到一定限制[8]。

3.2.7 PCR检测临床常用常规PCR检测，PCR-DNA测序及FQ-PCR检测。常规PCR检测法,用特定PCR引物测定标本是否含有特定病毒，由于引物局限，测定病毒种类也因此受限，此方法逐渐淘汰。PCR-DNA测序法对PCR扩增并排序，测序，与数据库比较即可确定标本中是否有HSV病毒。但此法实验要求严格，成本又高，很难在临床推广。FQ-PCR是目前为止检测HSV比较先进的分子生物技术，此法应用荧光探针技术，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，该技术已被应用于HSV病原体的检测[6]。此方法具有灵敏度高、特异性强等优点。孕妇做PCR检测，则都需抽取羊水样本或阴道分泌物，应作为血清学检查之后的临床确诊手段。

目前，临床实验室多采用ELISA法检HSV-IgM、HSV-IgG抗体，用于临床HSV急性感染和复发感染的诊断指标。大型医院则采用全自动电化学发光仪检测，速度快，极大减少人为干扰因素，操作流程简单，已成为临床用于检测HSV 特异性抗体的首选血清学检测手段。本院采用的就是意大利索林电化学微粒发光仪，进HSV1/2-IgG、HSV 1/2-IgM的检测。若HSV1/2-IgG、HSV1/2-IgM和HSV2-IgG、HSV2-IgM能联合检测，就能判别临床由HSV病毒感染导致孕妇不良妊娠究竟是由HSV-1型还是HSV-2型引起。对新近感染HSV 病原体的早、中孕期孕妇，因胎儿感染的概率相对较大，可结合定量PCR技术检测，必要时可终止妊娠[14]。此项课题有待进一步研究。

为了提高效价比，降低不必要的手术干预和药物治疗，近年来临床上多不主张进行妊娠期HSV 感染的常规筛查[15,16]。但对高危人群要重视妊娠早期HSV 感染的筛查和诊治，从而自觉地在妊娠早期进行 HSV-IgM、IgG 感染的常规检测[17],根据孕妇的具体情况及时采取相应的措施，提出治疗建议,采取有效的早期干预对优生优育以及促进孕产妇健康具有重要意义[18]。

[1] Galadari I，Fowzan A W．A comparative study between viral isolation and indirect immunofluorescence in the diagnosis of hereps simplex virus[J]．Allerg lmmunol，2006，38(2)：62-64．

[2] 瞿畅,赖志才,裴赢，等.余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究[J].时珍国医国药,2010,21(4):784-786.

[3] 高淑友. TORCH 系列病原体感染对中、晚期孕妇妊娠结局的影响[J].中国医药导报,2012,9(10): 40-43.

[4] Muller W J, Jones C A, Koelle D M. Immunobiology of herpes simplex virus and cytom egalovirus infections of the fetus and newborn[ J] . Curr Immunol Rev, 2010, 6(1) :38-55.

[5] 谢德纯. 502例不良妊娠史妇女TORCH感染检测结果分析[J]. 广西中医学院学报，2006,9(4)：42-43.

[6] 赖迪辉. 单纯疱疹病毒实验室检测方法的研究进展[J].中国计划生育学杂志,2010,177:380-381.

[7] 王晶，尚丽新.TORCH感染的产前诊断及防治[J].人民军医，2012,55(5):456-457.

[8] 董彦亮.妊娠期单纯疱疹病毒感染与不良妊娠结局[J].中国实用妇科与产科杂志，2011,8(27):572-576.

[9] 张鹭鹭．非战争军事行动卫勤保障预案 [M]．北京：人民军医出版社，2009：24-27.

[10] 何建萍，雷谨，李霖华．昆明地区孕妇TORCH 感染的检测分析[J]．中国优生与遗传杂志，2005，13(2)：76．

[11] 周先军.1082例妊娠妇女TORCH感染情况调查分析[J].检验医学与临床,2010,7(8):680-681.

[12] 陈桂兰,陆燕.315例妊娠妇女血清TORCH抗体检测结果分析[J].应用预防医学,2012,18(5):300-301.

[13] 张婷,罗亮,许飞. 2461例孕妇 TORCH 感染情况及相关因素的调查研究[J].中华医院感染学杂志,2011,21(11): 2250-2252.

[14] 杨善业,黄枝艳,孙雷,等.钦州市异常孕产史妇女常见病原体检测分析[J].中国医学创新,2010,7(30):142-143.

[15] Tita A T，Grobman W A，Rouse D J． Antenatal herpes serologic screening: an appraisal of the evidence[J]． Obstet Gynecol，2006， 108(5):1247-1253.

[16] 董悦，廖秦平．如何重新评价与解释围产期TORCH 感染筛查[J]．中华检验医学杂志，2008，31(7):742-746.