饲料中“瘦肉精”的检测方法

杨金凤 杨小燕 黑龙江省大庆市绿色农产品监测中心 163316

“瘦肉精”是一种白色或类似白色的结晶体粉末，无臭、味苦，化学性质稳定，一般烧煮加热方法不能将其破坏，只有加热到172℃时才能够被分解。人吃了含有“瘦肉精”的肉制品后，不仅会影响到正常的生长发育，而且对心脏造成很大损害。急性中毒常表现为头晕、呕吐、腹痛、腹泄、肌肉震颤、心跳过速、呼吸困难和神经紊乱等症状，严重的会危及生命。下面将介绍几种饲料中盐酸克仑特罗（CLB）的检测方法。

1 酶联免疫吸附法（ELISA）

原理是抗原抗体反应。单克隆抗体既能与CLB 结合，又能与酶标记物相结合。当样品中含有盐酸克仑特罗时，它会与酶标记物竞争性地结合单抗上的结合位点，经过洗涤后没有与单抗结合的酶标记物则被洗去。待加入基质和发色剂后，结合的酶标记物把无色的发色剂转化为蓝色的产物，颜色的深浅和样品中盐酸克仑特罗的浓度有关。加入终止后，蓝色变为黄色，最后用酶标仪进行测定。

盐酸克仑特罗的提取，即把粉碎后的饲料加入盐酸溶液和双蒸水均质，再经旋流、振荡、离心后，转移出上清液用氢氧化钠调pH 值到7～9。离心，取上清液分析测试。分别按标准稀释溶液，摆放样品。加入标准品到指定微孔中，再加入酶标记物，用酶标板密封胶纸盖住酶标板，涡旋混匀，在室温下孵育1 小时。倾倒出孔中的液体，用缓冲剂清洗酶标板3 次。加入酶标底物到微孔中，室温暗处孵育。反应孔中加入终止液，剧烈振荡5 秒钟。用酶标仪测定其吸光度值。

2 高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱-质谱法（GC-MS）

该方法的主要原理是用加有甲醇的稀酸溶液将饲料中的盐酸克仑特罗盐酸盐溶出，溶液被碱化，经液相萃取和固相萃取净化后，在高效液相色谱仪上分离测定，或经衍生后于气相色谱-质谱仪上分离、检测。称取配合饲料5g（预混料和浓缩料则称取2g)精确至0.0001g 于100mL 三角瓶中，加入提取液（浓度为0.5%偏磷酸：甲醇=80∶20）50mL，超声提取15分钟,每隔5 分钟振摇1 次，取上层液于离心机内上4000rpm 离心10 分钟。准确吸取上清液10.00mL 于150mL 分液漏斗中，同时滴加2mol/L 氢氧化钠溶液，调pH 至11～12。溶液分别用30mL、25mL 乙醚萃取2次，使醚层过无水硫酸钠干燥，用少许乙醚淋洗分液漏斗和无水硫酸钠，并用乙醚定容至50mL。再准确吸取25.00mL 于50mL 烧杯中，低于50℃加热块或沙浴上蒸干，残渣溶于2.00mL 0.02mol/L 盐酸溶液，取1.00mL 置于预先已分别用1mL 甲醇和1mL 去离子水处理过的SPE 小柱内，控制其过柱速度不超过1mL/min，再分别用1mLSPE 淋洗液-1（含2%氨水的5%甲醇水溶液）和2-（含2%氨水的30%甲醇水溶液）进行充分淋洗，最后再用甲醇溶液进行洗脱，洗脱液置于70+5℃加热块或沙浴上，最后用氮气吹干。向吹干的样品中准确加入1.00～2.00mL 0.02mol/L 盐酸，振摇、超声，过0.45um 的滤膜，取上清液于高效液相色谱仪进行测定。气相色谱-质谱法则于吹干的样品中加入衍生剂BSTFA 50μL，涡旋混合后，置70+5℃烘箱中衍生反应30 分钟。用氮气吹干，加入甲苯100μL 混匀于气质联用仪进行测定。

3 液相色谱—串联质谱法

原理是饲料经盐酸-甲醇混合溶液提取、醋酸铅沉淀蛋白后用固相萃取小柱净化，洗脱液蒸干后用甲酸溶解，供液相色谱-串联质谱仪进行检测，采用外标法进行定量。称取2g 试样于50mL 离心管中，准确加入19mL 盐酸甲醇提取液和饱和醋酸铅溶液，充分振荡20 分钟、离心10 分钟。固相萃取小柱用甲醇和水活化。取上清液5mL 进行过柱，再用水和甲醇淋洗，空气抽干2 分钟，用氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液旋转蒸发至干，再用甲酸水溶液溶解，过滤膜后上机测定。

“瘦肉精” 是国家明令禁止在饲料和饲养过程中使用的兽药，为此要从源头抓起，加大饲料和养殖产品质量安全监督检测力度，加强市场的监督抽查和监管力度。各相关部门按照职责分工，协调配合，形成合力，强化对生猪养殖、收购、贩运、屠宰、集贸市场销售及餐饮消费等关键环节的监督管理，共同做好“瘦肉精”监管工作。同时进一步加强舆论宣传，通过各种媒介宣传“瘦肉精”对人体的危害。