薏苡茎甲醇提取物的抗氧化性研究

卢善善，黄挺章，李远辉，黄 莹，马忠丽，张照平,黄锁义

(1.右江民族医学院 护理学院，广西 百色 533000;2.右江民族医学院 临床学院，广西 百色 533000;3.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000)

薏苡茎甲醇提取物的抗氧化性研究

卢善善1，黄挺章2，李远辉2，黄 莹2，马忠丽2，张照平1,黄锁义3*

(1.右江民族医学院 护理学院，广西 百色 533000;2.右江民族医学院 临床学院，广西 百色 533000;3.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000)

薏苡茎；甲醇提取物；抗氧化性

薏苡(Coixlachryma-jobiL.)为禾本科(Gramineae)薏苡属(CoixL.)草本植物,为常用中药, 味甘淡，性微寒，具有健脾补肺、清热利湿的功效,素有“滋补保健之王”的美誉，《本草纲目》中称其乃上品养心药[1]，流行病学研究显示，中国西南地区癌症发病率低可能与薏苡仁的食用有关[2]，20世纪60年代以来，国内外对薏苡的化学成分及药理活性开展了多方面研究，并得到了多种化学成分[3]。近年来，中外学者从薏苡中分到的化合物类型包括：脂肪酸及脂、酚、生物碱类化合物、多糖类化合物等[3]。实验结果初步表明，广西薏苡茎可能含有多糖、黄酮、有机酸等化学成分[5]。薏苡仁谷壳(Adlay hull)的甲醇提取物显示有DPPH自由基清除能力，且在该生物活性的跟踪下经过分离纯化，在正丁醇萃取的部分得到6种化合物，这些化合物均显示出较强的抗氧化活性[2]。薏苡茎化学成分的研究成果为薏苡茎的抗氧化性研究提供了一定的依据，在中药药理中发挥重要作用。目前以甲醇为溶剂来提取薏苡茎未曾看到过，为了充分开发利用薏苡这种天然植物，探讨及研究薏苡茎抗氧化活性研究有重要指导意义。本实验旨在研究薏苡茎甲醇提取物的抗氧化活性，为薏苡茎的开发利用提供参考依据。

1 仪器与材料

722N可见分光光度计(上海精科)；ZKJ-1002循环水式真空抽气泵(上海嘉鹏科技有限公司)；旋转蒸发器RE-52AA(上海安亭实验仪器有限公司)；HH-SA数显恒温水浴锅(上海上登实验设备有限公司)；DPPH (美国Sigma 公司)；薏苡茎采自广西百色市西林县。

2 方法与结果

2.1 薏苡茎甲醇提取物的提取

以烘干的薏苡茎，粉碎至粉末。称取薏苡茎粉末100 g，加甲醇浸泡1 h，回流提取2 h,抽滤。用旋转蒸发仪将滤液减压回收甲醇至滤液呈稠状物为止，置于蒸发皿中蒸干。称取0.6 g样品，用甲醇溶解并定容至100 mL，得样品溶液。

2.2 薏苡茎甲醇提取物抗氧化活性的测定

2.2.1 清除DPPH自由基能力

DPPH是一种稳定的自由基，与抗氧化剂发生反应，提供H被还原，颜色发生变化，由深紫色变为淡黄色，可以用紫外可见分光度法定量测定。取0.5 mL新配置的DPPH溶液[c(DPPH)=6×10-4mol/L]置于10 mL的具塞比色管中，然后加入同体积不同浓度的样品溶液，无水乙醇定容至5 mL，室温暗光下反应30 min，以无水乙醇调零，在517 nm处测定其吸光度A。以高浓度逐渐稀释的方式检测不同浓度样品对自由基的清除率，以自由基清除率为50%时样品的浓度(IC50)来衡量样品对自由基的清除能力[9]。IC50越小，表明样品清除自由基的能力越强。其清除率计算公式：

清除率(%)= [(A1-A2)/A1]×100%

其中A1为反应时间t=0 min时空白吸光度，A2为反应时间t=30 min时的吸光度。

取不同浓度的样品溶液置于比色管中，加无水乙醇定容至5 mL，分别测其对DPPH自由基清除的作用，由图1可以看出，随着薏苡茎浓度的增加，对DPPH的清除作用增大，自由基清除率为51.61%时样品的浓度(IC50)为0.3 mg/L，浓度较小，表明薏苡茎多糖清除DPPH自由基的能力较显著。

图1 薏苡茎提取物对DPPH自由基清除率

2.2.2 清除超氧自由基能力

采用邻苯三酚自氧化法[9]进行测定。具体方法如下：取0.5 mol/L、pH 8.2的Tris-HCl缓冲液4.0 mL于干燥具塞比色管中，置于25 ℃水浴中预热20 min，分别加入不同浓度的待测品0.2 mL,后均加入2.5 mmol/L邻苯三酚(由10 mmol/L HCl制)0.8 mL，混匀后25 ℃水浴中准确反应4 min，立即加入10 mmol/L HCl 2滴终止反应，蒸馏水调零，在320 nm处测定吸光度A。其清除率计算公式：

清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%

其中A0:为加邻苯三酚但不加样品时的吸光度；A1：为加样品和邻苯三酚时的吸光度；A2：为加样品不加邻苯三酚时的吸光度。

图2 薏苡茎提取物对超氧自由基清除率

2.2.3 还原Fe3+能力

采用普鲁士兰法[10]测定样品还原Fe3+能力。在系列10 mL具塞比色管中依次加入不同浓度的样品溶液2.5 mL，2.5 mL磷酸盐缓冲液[c(磷酸盐缓液)=0.2 mol/L pH 6.6]和2.5 mL铁氰化钾(1%)，混匀后置于50 ℃水浴中反应20 min，然后加入2.5 mL三氯乙酸(10%)，混匀后将溶液浑浊离心(3000 r/min) 10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水和0.5 mL 三氯化铁(0.1%)溶液，混匀，以试剂空白作参比，在700 nm处测定吸光度值，吸光度值增加表明还原能力增强。

由表1可以看出，随着提取物浓度增大，其吸光度值增加，对Fe3+还原能力增强。

表1 还原Fe3+能力吸光度值

3 结 论

随着人们对健康要求的提高，食品添加剂的安全问题成为整个社会的关注热点，开发安全有效的天然抗氧化剂是大势所趋。植物是一种很有潜力的抗氧化剂资源，含有很多种类的抗氧化成分。植物抗氧化剂在食品、饲料、医疗保健中都有应用。充分利用我国丰富的植物资源，从中找出安全可靠的高效天然抗氧化剂是众望所归[6]。

近年来，国内外对薏苡的开发利用已逐渐加强，其在食品保健方面已引起注意[5,7]。植物类的中草药因其具有药源丰富、取材方便、节省费用、加工简便、毒副作用小等优点，而引起越来越多人对其化合物进行研究和开发利用[4]。薏苡作为食用兼药用的栽培作物，具备了较全面的营养保健功能[3]。实验研究证明薏苡各部位均含有丰富的营养成分[8]，随着对薏苡化学成分及药理作用的深入研究及我国膳食结构由小康型向营养保健型的转变，薏苡将会在药物及保健食品方面有着广阔研究、开发、应用前景[3]。薏苡茎作为薏苡中重要的一部分，同样有着可观的研究前景。

[1] 杨红亚，王兴红，彭谦.薏苡仁抗肿瘤活性研究进展[J].中草药，2007,38(8)：附7-附9.

[2] 杨爽,王李梅,王姝麒,等.薏苡化学成分及其活性综述[J].中药材,2011, 34(8):1306-1312.

[3] 张聿梅,杨峻山,赵杨景,等.薏苡化学成分及药理活性研究进展[J].中国药学杂志,2002,37(1):8-11.

[4] 谢燕飞,覃冬,潘廷啟,等.广西壮药薏苡茎多糖的提取及抗氧化性研究[J].中国处方药,2012,10(2):43-45,48.

[5] 史柳芝,史恒芝,谭冰,等.薏苡茎化学成分预试验研究[J].微量元素与健康研究,2013,30(6):24-26.

[6] 谭榀新，叶涛，刘湘新,等.植物提取物抗氧化成分及机理研究进展[J].食品科学，2010,31(15):288-292.

[7] 党毅，肖培根，杨显荣.中医药与食品保健如何结合刍议[J].时珍国医国药，1998(6):6-7.

[8] 王颖,赵兴娥,王微,等.薏苡不同部位营养成分分析及评价[J].食品科学，2013,34(5):255 -259.

[9] 周琼花,黎入荧,青增济,等.龙眼叶黄酮的体外抗氧化活性[J].食品研究与开发,2013,34(9):16-18,59.

[10] 贾佳,刘春萍,许璟龙.水栒子果肉黄酮的体外抗氧化活性研究[J].中国酿造,2013,32(12):52-56.

Study on Antioxidant Effect of the Extracts of Methanol from Stem of Coix lachryma-jobi L.

Lu Shanshan1, Huang Tingzhang2, Li Yuanhui2, Huang Ying2,Ma Zhongli2, Zhang Zhaoping1, Huang Suoyi3*

(1.School of Nursing; 2.School of Clinical Medicine; 3.School of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities, Baise 533000,China)

Objective: Study on antioxidant effect of the extracts of methanol from the stem of Coix lachryma-jobi L．Methods: The stem of Coix lachryma-jobi L．was extracted by methanol soaking．Clearance ability of the extracts of methanol on DPPH·and· and the reduction of Fe3+ability were measured with the spectrophotometry．Results:Extracts of stem ofCoixlachryma-jobiL.had significant scavenging effect to two kinds of radicals, moreover it had strong ability of reduction to Fe3+.Conclusion:In a certain rang ,there was an obvious dose-effect relationship between concentration and clearance rate.When the concentration increases, the two kinds of free radical clearance rate and the reduction of Fe3+ability increased.

Stem ofCoixlachryma-jobiL.; extracts of methanol；antioxidant activity

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.01.004

2014-05-17

国家自然科学基金资助项目(81360684)；广西自然科学基金资助项目(2011GXNSFA018046)；广西中医药科技专项资助课题(GZKZ10-128)；广西教育厅课题(201106LX425)；广西中医药管理局课题(gzzc1047)；广西医学科学实验中心开放基金专项资助项目(KFJJ2011-04)。

卢善善，女，现就读于右江民族医学院护理学专业。研究方向：天然产物化学、药物化学。E-mail：18777615250@163.com

*通讯作者:黄锁义，男，教授，硕士研究生导师。研究方向：天然产物化学、药物化学、食品卫生、中草药与植物化学。E-mail：huangsuoyi@163.com

R282.71

A

1006-9690(2015)01-0012-03