延龄草提取物对小鼠镇静催眠作用的实验研究*

孙艳平 汪兴军 张 彥

西安医学院 (西安710021)

延龄草提取物对小鼠镇静催眠作用的实验研究*

孙艳平 汪兴军 张 彥

西安医学院 (西安710021)

目的：研究延龄草提取物对小鼠镇静催眠作用。方法：通过小鼠直接睡眠法、自主活动能力测定实验、与阈下剂量及阈上剂量的戊巴比妥钠协同睡眠等实验方法，确定延龄草提取物的镇静催眠作用。结果：延龄草提取物能减少小鼠自主活动能力和行为，增加由阈下剂量及阈上剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠入睡百分率和睡眠时间。结论：延龄草提取物对小鼠有一定镇静催眠作用。

延龄草( Trillium tschonoskii Maxim)系百合科延龄草属植物，是在民间应用的药物新资源，其药用部位有根茎和果实。延龄草的根茎中有效成分以皂苷为主，同时还含有黄酮苷、苯丙素苷、倍半萜苷等类型的化合物。延龄草属植物是多年生草本植物，全世界约有50余种，我国主要分布有3种，即延龄草(Trillium tschonoskii Maxim．)、西藏延龄草(Trillium govanianumwaiie Xroyie．) 和吉林延龄草(Trillium kamtschicum Pa11．)，主产于湖北、陕西、西藏、云南、四川等省区。此类植物主要生长在1600～3200米高海拔环境，喜阴、不耐早、不耐涝且不耐酸碱，野生资源分布较少，多以人工栽培为主[1-3]。

延龄草性平、味甘，其功效为镇静安神、解毒、活血止血,具有降压、抗炎镇痛、调节免疫、抗衰老、抗氧化等药理作用。临床上可用于治疗多种内科外伤性疾病，如头晕目眩、脑震荡后遗症、失眠多梦、神经衰弱、高血压、跌打损伤及外伤出血等症[4-6]。本文拟采用小鼠直接睡眠法、自主活动能力测定实验、与阈下剂量及阈上剂量的戊巴比妥钠协同睡眠等实验方法，确定延龄草提取物的镇静催眠作用。

1 材料与方法 1.1实验药物 延龄草( Trillium tschonoskii Maxim)干燥根茎，采集于海拔约1700m秦岭太白山脉，由西安医学院生药教研室汪兴军老师鉴定为延龄草属植物延龄草的干燥根茎。制备方法：延龄草根茎加入8倍量的水，浸泡4h后，煎煮1h，过滤，再加入4倍量的水，煎煮0.5h，合并两次滤液，即得延龄草根茎水煎液，于 60 ℃ 减压浓缩至浸膏状。将所得浸膏充分混匀后取其适量 3 份，分别加入蒸馏水配成含生药为 1.5、1.0、0.67 g/mL的药物浓度，备用；酸枣仁饮片，西安兴盛饮片厂，批号：120109，煎煮处理方法同上，配制成含生药1.0g/mL的药物浓度；戊巴比妥钠(AR)，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号120311，用生理盐水配成 4、5、6 mg/mL 溶液，用前新鲜配制；阳性对照药地西泮片(批号:1112016)，临用前研磨均匀，并与0.5% 羧甲基纤维素钠水液配制成浓度为 3.5 mg/mL的分散溶液。

1.2 动 物 昆明种小鼠，体重(22±2.2)g，雌雄各半，第四军医大学实验动物中心提供。饲养环境:西安医学院基础医学与转化研究所，动物分笼饲养，保持 12h昼夜节律，室温( 22±1)℃，正常饮食与光照，实验前测自主活动能力，按自主活动次数均匀分组。

1.3 仪 器 YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪(济南益延科技发展有限公司)，秒表，电子秤。

1.4 实验方法 1.4.1 实验分组与给药:实验动物小鼠，雌雄各半，随机分成6组，每组20只，3个给药组灌胃给予延龄草溶液 (低剂量13.4g/kg、中剂量20g/kg和高剂量30g/kg)、阳性对照组给予地西泮分散液(剂量为70mg/kg)和中药对照组给予酸枣仁溶液(剂量为20g/kg)、阴性对照组给予相同容量的生理盐水。

1.4.2 直接睡眠实验:各组动物分组和给药处理方法同“1.4.1”项，连续灌胃7d，观察各组小鼠的睡眠发生率、镇静率。以小鼠发生静卧 15s或以上时间的现象来判断药物有镇静效果，以翻正反射消失(即将小鼠置于背卧位时，1 min内不能翻正)为判断指标，表示小鼠进入睡眠状态。实验应在安静、通风、室温的环境下进行[7]。镇静率=静卧小鼠数/实验动物数×100%;入睡率=入睡小鼠数/实验动物数×100%。

1.4.3 对小鼠自主活动的影响:实验前首先要筛选出各组小鼠的自主活动次数无显著性差异，即选择5min 内自主活动数在 120 次以上的正常小鼠，并将符合条件的小鼠随机分配到各实验组，各组动物分组与给药处理同“1.4.1”项，末次灌胃给药 50min 后，将小鼠依次放入记录仪中，适应环境 5min后，记录 5min 内的自主活动次数。实验在安静、通风的环境中进行[7-8]。

1.4.4 与阈下剂量戊巴比妥钠协同镇静作用实验:实验动物分组和给药处理方法同“1.4.1”项，连续灌胃7d, 最后一次灌胃50 min后,各组小鼠腹腔注射剂量为30mg/kg的戊巴比妥钠(经预实验测得的，90%～100% 的小鼠发生翻正反射不消失的最大剂量)，记录小鼠30min 内镇静率、入睡百分率，判断方法同1.4.2。同时记录入睡动物的睡眠时间(以翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间)。实验在安静、通风、室温环境下进行[7-8]。

1.4.5 与阈上剂量戊巴比妥钠协同催眠作用实验:实验动物分组和给药处理方法同“1.4.1”项，连续灌胃 7d, 最后一次灌胃50 min后, 各组小鼠腹腔注射剂量为40mg/kg的戊巴比妥钠(经预实验测得的，100% 的小鼠发生翻正反射消失的最小剂量)，判断方法同1.4.4，记录动物睡眠潜伏期和睡眠时间。实验在安静、通风、室温环境下进行[7-8]。

2 实验结果 2.1 直接睡眠实验结果 直接睡眠实验结果见表1，表明延龄草给药组与阳性对照组均有明显的镇静作用，但无睡眠现象发生，入睡率均为0，各组间无明显差异。

表1 延龄草对小鼠直接睡眠实验结果 (±s,n=20)

2.2 对小鼠自主活动的影响实验结果 如表2所示，延龄草各给药组具有显著的镇静作用。与阴性对照组相比，低剂量与中剂量给药组可显著减少小鼠的自主活动能力(P<0.05)，高剂量药物组可极显著减少小鼠的自主活动能力(P<0.01)，镇静催眠效果与酸枣仁组相当。

表2 延龄草提取液对小鼠自主活动的影响(±s,n=20)

注：△与阴性对照组比较，有显著性差异(P<0.05)；▲与阴性对照组比较，有极显著性差异(P<0.01)

2.3 延龄草提取液与阈下剂量戊巴比妥钠协同镇静作用的实验结果 由表3可见，与阴性对照生理盐水组相比，各给药组、中药酸枣仁组、阳性对照地西泮组均显著增加小鼠的入睡百分率，显著缩短小鼠的睡眠潜伏期，且均能显著延长睡眠时间，说明各组受试药物有协同戊巴比妥钠镇静作用。与阳性对照地西泮相比，低剂量组的药效弱于对照组，且有显著性意义(P<0.05)，高剂量给药组、中药酸枣仁组与地西泮组药效相近。

表3 延龄草提取液对阈下剂量戊巴比妥钠镇静作用的影响(±s,n=20)

注：△与阴性对照组比较，有显著性差异(P<0.05)；▲与阴性对照组比较，有极显著性差异(P<0.01)；◇与阳性对照组比较，有显著性差异(P<0.05)

2.4 延龄草提取液与阈上剂量戊巴比妥钠协同催眠作用的实验结果 由表4可见，各给药组、中药酸枣仁组、阳性对照地西泮组对阈上剂量戊巴比妥钠的催眠作用表现出协同作用，可缩短小鼠睡眠潜伏期，延长睡眠时间，且随着剂量的增加，小鼠睡眠潜伏期缩短、睡眠时间延长。

表4 延龄草提取液对阈上剂量戊巴比妥钠小鼠催眠作用的影响(±s,n=20)

注：△与阴性对照组比较，有显著性差异(P<0.05)；▲与阴性对照组比较，有极显著性差异(P<0.01)；◇与阳性对照组比较，有显著性差异(P<0.05)

3 讨 论 睡眠是人正常的生理现象，能使机体复原、整合和巩固记忆环节，睡眠质量问题直接影响着人的身心健康、正常的生活和工作。临床上多采用巴比妥类和苯二氮卓类药物进行治疗，长期服用会产生许多副作用，如焦虑、幻觉、恐惧、妄想及惊厥等。中医学认为引起失眠主要有情志失常、过劳过逸、饮食不节及病后体虚等病因。在中医辨证论治思想指导下应用中药治疗失眠症，如应用天麻、酸枣仁、知母等单味或复方，具有镇静、催眠、抗眩晕、脑保护等作用[9]，同时中药可减少镇静催眠药副作用及成瘾性。

陕西产延龄草是“太白七药”之一，又名芋儿七、狮儿七。本实验通过不同剂量延龄草提取液对小鼠自主活动能力测定实验、对阈下剂量及阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的协同效果实验与研究，发现延龄草提取液有抑制小鼠自主活动的能力，对戊巴比妥钠的镇静催眠作用有协同功效，表现出明显的镇静睡眠药理作用。后续研究中我们将对其镇静催眠作用与脑保护方面的主要药效物质基础进行研究，探讨其物效关系，同时促进对该药材的开发利用。

[1] 林先民，廖朝林，郭 杰，等．延龄草生物学特性研究[J]．中国现代中药，2006,8(7)：38-41.

[2] 喻玲玲，邹 坤,延龄草属植物的化学成分及药理活性研究进展[J].中成药,2008，30(9)：1350-1354.

[3] 黄华斌，万仲贤，漆立军.延龄草不同提取部位总酚的含量测定[J]．中国医院药学杂志，2013，33(7)：592-594.

[4] 肖本见，陈国栋，谭志鑫，等．头顶一棵珠抗炎和免疫作用的实验研究[J]．安徽医药，2005，9(4):246-247.

[5] 黄丽亚，叶嗣颖．延龄草续断上调抗氧化酶表达作用的比较研究[J]．辽宁中医杂志，2006，33(8)：1012-1013.

[6] 喻玲玲，邹 坤，汪鋆植, 等．延龄草提取物抗炎、镇痛和凝血作用的研究[J].时珍国医国药，2008，19(5)：1179-1120．

[7] 陈 奇.中药药理研究方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社,2011：634-637.

[8] 陈百泉，娄丽杰，杜红岩，等.杜仲雄花茶对小鼠镇静催眠作用的探讨[J]．河南大学学报( 医学版)，2011，30(1):22-23.

[9] 朴日龙,许青松.知母乙醇提取物对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的影响[J]. 陕西医学杂志,2010, 39(8):941-943.

(收稿2014-11-03;修回2015-01-12)

Effect of sedative and hypnotic of trillium tschonoskii maxim extract on mice

Xi’an Medical University(Xi’an710021)

Sun Yanping Wang Xingjun Zhang Yan

Objective: To study the effects of sedative and hypnotic of Trillium Tschonoskii Maxim Extract on mice． Methods: To detest the independent activities by the experiment of direct sleep，and observe the sedative and hypnotic of Trillium Tschonoskii Maxim Extract on mice By the sleep time experiments of suprathreshold sodium, sleeping mice numbers of subliminal sodium pentobarbital.Results: The results showed that Trillium Tschonoskii Maxim Extract significantly inhibited the locomotion activity of mice and showed synergic effect on pentobarbital-induced sleeping by increased numbers of mice falling asleep，reduced the sleep latency and prolonged the sleeping time．Conclusion: Trillium Tschonoskii Maxim Extract has a function of sedative and hypnotic.

Trillium tschonoskii Animal experimentation Mice

延龄草 动物实验 小鼠

R285

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.046

* 陕西省教育厅2014年科学研究计划(14JK1621)

西安医学院科研基金自然科学类(11FZ17)