土贝母中土贝母苷甲及土贝母总皂苷提取工艺研究*

2015-03-22王卫锋崔晓敏郭五保

陕西中医 2015年5期

关键词：总皂苷提取液皂苷

王卫锋李凡崔晓敏郭五保李芳

陕西省中医药研究院(西安710003)

土贝母中土贝母苷甲及土贝母总皂苷提取工艺研究*

王卫锋李凡崔晓敏郭五保李芳△

陕西省中医药研究院(西安710003)

目的：优选中药土贝母中土贝母苷甲和土贝母总皂苷的提取工艺。方法：以提取液中的土贝母苷甲和土贝母总皂苷为检测指标，采用正交试验的方法来评价并优选土贝母药材的提取工艺。结果：过20目筛的土贝母颗粒加7倍量70%乙醇，以3mL/min流速渗漉为最佳提取条件。结论：此工艺土贝母中的有效成分土贝母苷甲和土贝母总皂苷提取完全，可以作为土贝母中有效成分的提取工艺。

土贝母为葫芦科植物土贝母Bolbostemma panicultum(Maxim.)Franquer的干燥块茎。为《中国药典》2010年版一部收载的品种，具有散结，消肿，解毒的功效。主要用于乳痈、瘰疬、乳腺炎、颈淋巴结核、淋巴结炎、肥厚性鼻炎等[1]。土贝母中已经分离出皂苷、甾醇、脂肪酸等多种化学成分[2-3]。皂苷类为土贝母中的主要活性成分，含量较高。因此对土贝母中的土贝母苷甲和总皂苷类成分进行提取工艺研究。

1 仪器与试药 1.1 仪器 UV265FW紫外分光光度计(日本岛津公司)，BP211D型十万分之一分析天平(德国赛多利斯公司)，Waters2690高效液相色谱仪，Waters996二极管阵列检测器，TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂)，H66025T超声清洗机(无锡超声电子设备厂)，FW135型倾斜式高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，Millennium32色谱工作站， RE-52A型旋转蒸发器(上海亚莱生化仪器厂)。

1.2 试药土贝母苷甲对照品(由中国药品生物制品鉴定所提供，供含量测定用，批号：111536-200304)，甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 渗漏提取工艺采用正交试验的方法[5],对提取工艺进行优化, 以渗漉提取工艺中乙醇浓度、溶剂加入量、渗漉流速、颗粒粒度为考察因素，以土贝母苷甲含量、土贝母总皂苷含量、干膏量为考察指标，设计3个水平，应用L9(34)正交表安排试验，其因素水平表见表1。

2.2 对照品溶液的制备 2.2.1 土贝母总皂苷检测对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的土贝母苷甲对照品26.13mg，精密称定，置25mL量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含土贝母苷甲1.0452mg)。

2.2.2 土贝母苷甲含量测定对照品溶液的配制：取减压干燥至恒重的土贝母苷甲对照品8.26mg，精密称定，置10mL量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含土贝母苷甲0.826mg)。

表1 土贝母提取因素水平表

2.2.3 供试品溶液的制备：称取土贝母药材100g，共九份，随机编成1～9号，按L9(34)正交表安排试验，提取液挥去乙醇，定容至一定体积。精密吸取一定量提取液，水浴蒸至无醇味，加水10mL，移置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20mL、20mL、10mL、10mL)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 测定方法 2.3.1 总皂苷分光光度含量测定方法：精密吸取一定量供试品溶液于10mL具塞试管中，75℃水浴蒸干，向其中加入4%香草醛-冰醋酸0.2mL，再加高氯酸0.6mL，于65℃水浴显色25min，流水冷却至室温后加入4mL冰醋酸稀释，摇匀，以相应试剂为空白，放置15min，在469nm处测量吸收度，并计算含量。

2.3.2 土贝母苷甲含量测定方法：取一定量供试品溶液，离心后与标准品溶液分别注入液相色谱仪，流动相为甲醇-水(65∶35)，流速 1mL/min，温度25℃，在214nm处测定峰面积，计算含量。

2.3.3 干膏的测定方法：精密量取上述各试验号的提取液，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3h，取出，置干燥器中放置30min，称重，计算干膏量。

2.4 结果及分析正交实验结果见表2，方差分析见表3、表4、表5。

表2 土贝母提取正交设计表及结果

表3 贝母苷甲方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

表4 土贝母总皂苷方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

表5 土贝母浸膏方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

正交试验结果分析:由直观分析(表)可知，各因素对土贝母苷甲提取实验结果影响的重要性为B>C>A>D，对土贝母总皂苷提取结果影响的重要性为A>C>B>D，对干膏收量结果影响的重要性为A>C>B>D，由方差分析(表)可知，因素A、B、C对苷甲的影响都有显著性意义，而因素A对总皂苷提取的影响有显著性差异，而因素A对干膏收量的影响有显著性差异，结合三因素对苷甲和总皂苷的提取应尽可能大，而收得的干膏量应尽可能小，因此本实验选取A2B2C2D1，即过20目筛土贝母粉末加7倍量70%乙醇，以3mL/min流速渗漉为最佳提取条件条件。

2.5 验证试验为了考察正交试验筛选出的最佳提取工艺的重现性，特进行验证试验，称取药材100g，共3份，按最佳工艺进行实验，测定土贝母苷甲、总皂苷含量及干膏量，结果见表6。