水通道蛋白1表达检测在分泌性中耳炎诊断中的意义*

西安交通大学第二附属医院(西安710004) 席 婕 刘 晖 许 珉

·临床检验·

水通道蛋白1表达检测在分泌性中耳炎诊断中的意义*

西安交通大学第二附属医院(西安710004) 席 婕△刘 晖△许 珉▲

目的：研究水通道蛋白1表达检测在分泌性中耳炎诊断中的应用价值。方法：选取30份分泌性中耳炎组织标本为研究组,选择同期行健康体检的50份健康人体中耳组织标本为对照组,用免疫组织化学方法检测所有标本中水通道蛋白1的表达。结果：①研究组咽鼓管及鼓室黏膜厚度分别为(147.94±8.38)μm、(30.71±4.64)μm,对照组咽鼓管及鼓室黏膜厚度分别为(30.70±3.58)μm、(20.55±4.40)μm，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②研究组鼓室黏膜、咽鼓管水通道蛋白1相对蛋白表达量分别为(145.58±13.65)、(140.05±12.45)，对照组鼓室黏膜、咽鼓管水通道蛋白1相对蛋白表达量分别为(195.84±24.80)、(208.40±21.58),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：水通道蛋白1在分泌性中耳炎发生过程中起一定的作用,可作为分泌性中耳炎诊断的一项重要指标。

分泌性中耳炎主要是由咽鼓管功能障碍、局部感染及变态反应等引起,其典型特征为传导性耳聋与鼓室积液[1],在儿童人群中比较常见,是导致儿童耳聋的一大危险因素[2]。相关研究表明水通道蛋白(AQP)在很多细胞质膜中存在，一旦其发生异常,导致细胞内信号异常且改变膜电位,引发水分积聚[3]。多项大鼠试验表明水通道蛋白1参与到中耳积液形成及吸收的过程中,认为水通道蛋白1表达检测可作为诊断分泌性中耳炎的重要指标之一[4]。本研究通过免疫组织化学法检测分泌性中耳炎组织标本中的水通道蛋白1表达,与健康标本检测结果进行比较,现报告如下。

资料与方法

1 一般资料 选取两院2011年1月至2013年12月采集的30份分泌性中耳炎组织标本为研究对象，其中男18例,女12例,年龄1～56岁，平均(30.3±1.2)岁，住院时间3～15d,平均(7.4±1.3)d。选择同期行健康体检的50例正常人群为对照组，其中男22例,女28例,年龄1～59岁，平均(30.2±1.4)岁。相关仪器：脱水机、石蜡切片机、电耳镜、超速低温离心机、图像分析仪、恒温水浴箱等。

2 方 法 在所有患者及健康儿童(由儿童及家长共同决定)同意下经由耳镜进行中耳鼓室及咽鼓管咽口组织部分采集(局部麻醉后刮片收集组织标本),患者或健康组织采集完成后马上放入液氮中冷冻保存，以提取组织中的总蛋白及mRNA。①HE染色：部分组织经由多聚甲醛(浓度为4%)固定及石蜡包埋→不间断切片(厚度为5μm)→常规脱蜡至水→苏木素染色5min→冲洗1min→盐酸酒精(1%)分化1min→冲洗5s→冲洗10min→伊红(95%)染色5s→分化10s→常规脱水封片→显微镜下观察→测量咽鼓管黏膜与鼓室厚度。②SP法：烤箱中烤片(组织切片)20min→常规脱蜡至水,PBS(磷酸盐缓冲液)冲洗15min,每隔5min1次→双氧水孵育10min,PBS冲洗15min,每隔5min1次→高压修复60s,PBS冲洗15min,每隔5min 1次→封闭20min,干燥后加兔抗人水通道蛋白1多克隆抗体(1︰200),将其保存在冰箱中(温度为4℃)，一夜后行PBS冲洗，5min/次，共3次→免疫组化染色，苏木素复染→显微镜观察，常规脱水封片。光镜下物质为棕黄色，胞膜着色提示为阳性。

3 观察指标 观察并分析两组标本中咽鼓管及鼓室黏膜水通道蛋白1相对蛋白表达量，另外用专业图像分析仪测量两组咽鼓管及鼓室黏膜厚度。

结 果

1 两组咽鼓管及鼓室黏膜厚度测量结果比较 见表1。研究组咽鼓管及鼓室黏膜厚度高于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 两组咽鼓管及鼓室黏膜厚度测量结果比较±s)

注：与对照组比较，*P<0.05

2 两组免疫组织化学染色结果比较 见表2。研究组鼓室黏膜、咽鼓管咽口黏膜水通道蛋白1相对蛋白表达量分别与对照组鼓室黏膜、咽鼓管咽口黏膜水通道蛋白1相对蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 两组中耳相关部位水通道蛋白1蛋白表达 灰度值比较

注：与对照组比较，*P<0.05

讨 论

1 分泌性中耳炎发病机制 目前临床上分泌性中耳炎发病机制尚不明确,杨琳等学者认为多种因素造成中耳处于负压状态,出现中耳黏膜水肿及渗液症状,从而引发中耳积液及分泌中耳炎[5]。而影响中耳压力的因素包括咽鼓管功能(主要为通气)、中耳黏膜功能(气体交换)及其厚度、鼓膜弹性等。同时部分学者认为分泌性中耳炎的发生与中耳腔感染及炎症密切相关。目前临床上公认的是与中耳渗液形成、咽鼓管功能障碍有关,而水通道蛋白1在各组织毛细血管、成纤维细胞中广泛存在,其异常可能影响到早期中耳渗液形成。一般而言对正常人体性盐水静注,会造成气道黏液增厚,出现水肿症状,但在水通道蛋白1功能无效患者中却不是出现水肿现象,这表明水通道蛋白1表达对血管通透性起决定性作用。

2 水通道蛋白1表达检测在分泌性中耳炎诊断中的应用价值 很多动物实验模型研究表明水通道蛋白在各组织细胞膜(毛细血管内皮细胞及成纤维细胞)中广泛分布，该物质直接参与毛细血管及其滋养细胞间的水运转，若其出现异常，则会影响到细胞内信号，造成水分聚集，引发中耳积液。水通道蛋白1作为第一个被发现的AQP亚型，经免疫形态学及动物实验模型研究后证明其主要分布在中耳血管内皮细胞及成纤维细胞中，它除了与内耳淋巴液平衡相关外，还在中耳腔微环境稳态中起维持保护作用[6]。且研究还发现大鼠经病毒感染后其水通道蛋白1表达明显下降，最终出现组织积液现象。

本研究就我院采集的30份分泌性中耳炎病理组织标本(研究组)与50份健康人群中耳组织标本(对照组)进行对照实验,发现研究组标本组织中水通道蛋白1相对蛋白表达量(鼓室黏膜及咽鼓管咽口黏膜)明显低于对照组(P<0.05)，可见水通道蛋白1在分泌性中耳炎发病中起一定的作用，可作为分泌性中耳炎诊断的重要指标之一。

[1] 赵海亮,周才杰,赵九洲,等.杀菌-通透性增强蛋白对分泌性中耳炎大鼠水通道蛋白和黏蛋白表达的影响[J].中国耳鼻咽喉头颈外科,2013,20(4)：200-203.

[2] 詹红星,侯 薇,张 青,等.中耳炎性渗出液的产生及其病理影响[J].陕西医学杂志,2012,41(2)：228-229.

[3] 马玉强. AQP1、VEGF在变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中的表达及其相关性研究[D].山西医科大学,2012.

[4] 曾 丽.水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及意义[D].泸州医学院,2012.

[5] 杨 琳,赵守琴.分泌性中耳炎发病机制的研究进展[J].听力学及言语疾病杂志,2014,23(3)：328-331.

[6] 崔昕燕.糖皮质激素对分泌性中耳炎模型水通道蛋白1表达的调控[D].南京医科大学,2011.

(收稿：2014-11-05)

Water channel protein 1 expression detection in the diagnosis of secretory otitis media

Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University(Xi’an 710004)

Xi Jie Liu Hui Xu Min

Objective: To study the expression of aquaporin 1 in detection of secretory otitis media with application value in the diagnosis of. Methods: select 30 copies of secretory otitis media organizations were research group, 50 cases underwent physical examination of health human middle ear specimens were used as control group. Immunohistochemical method was used to detect all the specimens of aquaporin 1 protein expression. Results: The study group of eustachian tube and tympanic mucosa thickness were (147.94 ± 8.38)μm and (30.71±4.64)μm, control group of eustachian tube and tympanic mucosa thickness were( 30.70±3.58)μm and (20.55±4.40)μm, there was significant difference between two groups (P<0.05). The study group tympanic mucosa, Eustachian tube relative protein expression were (145.58±13.65) and (140.05±12.45), the control group tympanic mucosa, Eustachian tube relative protein expression were (195.84±24.80) and (208.40±21.58), there was significant difference between two groups (P<0.05). Conclusion: Water channel protein 1 in secretory otitis media plays a certain role, can be used as an important index for diagnosis of secretory otitis media.

Otitis media with effusion/diagnosis Aquaporin 1/secretion

*陕西省科技研究发展计划项目(2011K12-65)

伴渗出液中耳炎/诊断 水通道蛋白1/分泌

R764.21

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.06.041

△陕西省人民医院耳鼻喉科

▲通讯作者