三种固定剂制作小肠潘氏细胞切片效果比较*

2015-03-22臧贵勇陈腾祥张祥令杨燕萍

贵州医科大学学报 2015年5期

关键词：潘氏教研室贵阳

臧贵勇，陈腾祥，张祥令，杨燕萍

(1.贵州省黔南民族医学专科学校解剖学教研室，贵州都匀 558000；2.贵阳医学院生理学教研室，贵州贵阳 550004；3.贵阳医学院组织与胚胎学教研室，贵州贵阳 550004)

·技术与方法·

三种固定剂制作小肠潘氏细胞切片效果比较*

臧贵勇1**，陈腾祥2，张祥令3，杨燕萍3

目的：观察改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液制作小鼠空肠切片对潘氏细胞的显示效果。方法：取小鼠空肠，采用改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液固定，对小肠组织HE染色，光学显微镜下观察染色效果。结果：改良Helly氏固定液能清晰显示小肠的潘氏细胞及细胞核轮廓，染色简单，而Bouin液和Carnoy液制片未见潘氏细胞。结论：改良Helly氏固定液制作切片能更清楚显示潘氏细胞及细胞核轮廓。

小肠；潘氏细胞；固定剂；HE染色

潘氏细胞(Paneth cell)位于小肠腺基底部，三五成群，细胞呈锥体形，顶部胞质充满粗大嗜酸性分泌颗粒，染成红色[1]。经电镜观察，细胞有细胞膜，胞质内含有大量粗面内质网，高尔基复合体较大，分泌颗粒内含有糖蛋白[2]。潘氏细胞是构成肠黏膜屏障的重要细胞成分，能促进食物消化，调控肠道菌群聚集及释放无机盐[3-4]。本实验观察改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液制作小鼠空肠切片对潘氏细胞的显示效果，报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

健康小鼠由贵阳医学院实验动物中心提供，30～40 g, 雌雄兼用。切片机、贴片机和显微镜均为Leica公司产品，苏木素、伊红、重铬酸钾、升汞、甲醛水溶液(40%)、铬酸等试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 取材固定小鼠饥饿24 h后拉断脊柱法处死取空肠，分别采用改良Helly液(2.5 g重铬酸钾+5 g升汞+5 mL 40%甲醛水溶液+ 1%铬酸+1 g硫酸钠+1 000 mL蒸馏水)，Bouin液和Carnoy液固定18 h。

1.2.2 脱水透明乙醇梯度脱水：70%乙醇和80%乙醇各2 h，90%乙醇和95%乙醇各1 h，100%乙醇液体和半乙醇半氯仿中各1 h，在透明剂氯仿中过夜直至包埋；脱水时，严格控制不同梯度乙醇的浓度，进入下一步时用滤纸吸干，使组织脱水更彻底。

1.2.3 浸蜡包埋石蜡和氯仿按1∶1比例混合浸蜡40 min，纯蜡(1)20 min，纯蜡(2)20 min，包埋成蜡块，室温冷却待切。包埋时，石蜡要处于半溶状态，严格控制包埋机温度56～60 ℃，有利于标本浸蜡。

1.2.4 切片及染色用徕卡轮转式切片机切片6 μm,用徕卡贴片机40 ℃展片，40 ℃温箱烤片4 d。小肠组织HE染色：石蜡切片常规化蜡，下行，苏木精染色，分色，兰化，伊红上色，显微镜下镜检，染色明显，95%乙醇分色，上行，冬青油和二甲苯透明，中性树胶封片[5]。

2 结果

镜下观察，采用Bouin液和Carnoy液固定未见潘氏细胞，而改良的Helly液，潘氏细胞又鲜又艳，形态结构清晰，胞质内充满粗大嗜酸性分泌颗粒，染成红色。见图1。

A、B分别采用Bouin液和Carnoy液固定(×400)，C、D采用改良Helly氏液固定(C×400，D×1 000)

3 讨论

潘氏细胞制作是在动物饥饿时取材，这样肠腔干净，利于取材，肠腔不受损，能使潘氏颗粒集聚。组织切片制作时，固定剂是关键，Helly液固定剂对细胞固定较好，特别适用于细胞特殊颗粒固定[6]。本技术对Helly液进行改良，加入1%的铬酸，铬酸穿透力较慢，不会使组织收缩。 Bouin氏固定液、冰醋酸-福尔马林-酒精液(AFA)液、Carnoy液等固定液易破坏细胞，使细胞不易显示。组织脱水和包埋时，严格控制好时间，时间过短或过长，都不利于切片的制作；染色时，分色时间是关键[7]；透明时，最好放入冬青油至切片透明，冬青油浸入速度较慢，可浸数小时，临时镜检也不易干。此法可制作大量的、细胞典型的潘氏细胞，供医学生使用。

[1] 邹仲之，李继承.组织学与胚胎学[M].人民卫生出版社, 2013: 149.

[2] 闫爱华, 任知春, 任秀花. 潘氏细胞固定和染色探讨[J]. 四川解剖学报， 2001(2)：90.

[3] 陶凯忠, 唐庆娟, 郑萍.潘氏细胞研究进展 [J]. 现代生物医学进展， 2009(4)：794-799.

[4] 杨玉荣, 焦喜兰, 梁宏德.潘氏细胞及防御素的研究进展 [J].中国细胞生物学学报， 2010(6)：971-975.

[5] 郑燕璇,王晓鸿,苟新敏. 石蜡切片脱蜡方式比较[J]. 中国实用医学, 2009(2)：211.

[6] 杜卓民.实用组织学技术[M].人民卫生出版社， 1998:30.

[7] 梁燕清.常规HE染色过程中分色方法的比较[J]. 解剖学研究, 2010(5)：封三.

(2015-02-28收稿，2015-04-03修回)

中文编辑：周凌

贵州省科技厅联合基金项目(M2011-28)

时间：2015-05-21

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150521.1244.014.html