冠心病易感性及其与冠状动脉病变严重程度的相关性分析

任 勇，刘 娟，徐 果，汤永谦，刘文卫

(湖北文理学院附属医院、襄阳市中心医院1．心血管内科;2．骨科，湖北 襄阳 441021)

冠状动脉粥样硬化性心脏病简称冠心病，是一种严重危害人类健康的心血管疾病，主要是由冠状动脉发生粥样硬化引起管腔狭窄或闭塞，导致心肌缺血缺氧或坏死而引起的心脏病［1]。冠心病患者冠状动脉病变的严重程度受年龄、血脂异常、吸烟、糖尿病等危险因素的影响。作为一种与冠状动脉痉挛硬化有关的炎性标志物，C反应蛋白(C reactive protein，CRP)是在机体损伤或炎症时肝脏迅速合成的急性时相蛋白。CRP水平与血脂、血压、遗传因素、生活方式、环境因素等有关，其中遗传因素是导致CRP水平个体差异的关键因素［2]。为了探讨冠心病易感性及其与冠状动脉病变严重程度，本文以在我院接受治疗的470例冠心病患者为研究对象进行研究，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取2009年1月至2013年12月在我院治疗的冠心病患者470例，其中男性312例，女性158例，年龄37～80岁，平均(54．28±11．18)岁，同时选取在体检中心体检的健康者157例，其中男性97例，女性60例，年龄35～78岁，平均(53．84±10．26)岁。纳入标准:(1)冠心病患者均经过冠脉造影确诊;(2)患者临床资料保存完好;(3)所有研究对象及家属知情同意，能配合研究。排除标准:(1)严重肝肾功能不全、免疫系统性疾病、肿瘤、既往行冠状动脉搭桥术等疾病;(2)近3个月接受过糖皮质激素治疗;(3)合并细菌、病毒感染，近1月内有手术或创伤史。根据冠脉造影结果，将冠心病组患者再分为粥样硬化组(冠状动脉狭窄程度＜50%)和冠状动脉病变组(有一支以上主要冠状动脉狭窄程度≥50%)，三组研究对象在年龄、性别构成、体重指数等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0．05)，见表1。

1．2 C反应蛋白基因多态性检测 (1)提取外周血基因组DNA 取2 mL外周静脉血，加入3．2%柠檬酸钠抗凝，2 000 rpm离心5 min，分离上层血浆和下层白细胞细胞，用酚－氯仿法提取白细胞基因组DNA，于－70℃下冷冻保存。(2)引物设计与合成参照GENEBANK的CRP基因全DNA序列设计引物，并委托专门的生物公司合成。(3)目的DNA片段PCR扩增使用UVI自动凝胶成像及分析系统观察扩增的结果，并通过DNA分子量标准判断是否为314 bp的目的片段。(4)聚合酶链反应(PCR)扩增产物的限制性酶切 基因型包括TT纯合型(314 bp)、GG纯合型(234和80 bp)和TC杂合型(314，234和80 bp)。用含溴己锭的3%琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统仪判断基因型。抽取部分PCR扩增产物进行测序鉴定。

表1 三组一般资料比较/例(x±s)

1．3 血浆C反应蛋白检测 在所有行冠状动脉造影术患者入院24 h内，对每一位患者取静脉血4 mL，置于试管中，3 000 rpm离心10 min，收集上层血清。选用免疫散射比浊法，使用美国Bec km an CX－V型全自动生化仪检测CRP。

1．4 冠状动脉病变严重程度评价标准 冠状动脉病变严重程度评价采用改良Gensini评分对每支血管病变程度进行评定，冠状动脉左主干狭窄＜25%为2分，25% ～49%为4分，50% ～74%为6分，75% ～99%为8分，100%为10分，冠状动脉左前降支、左回旋支和右冠状动脉狭窄＜25%为1分，25% ～49%为2分，50% ～74%为3分，75% ～99%为4分，100%为5分。每例患者冠状动脉病变程度积分为各分支积分之和。

1．5 统计学处理 应用采用SPSS19．0统计软件进行统计分析，计量资料采用(x±s)表示，比较使用t检验，计数资料比较使用χ2检验，样本遗传平衡采用哈迪 －温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，以 P ＜0．05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2．1 CRP基因多态性检测 +1059G＞C(rs1800947)酶切分型，检测到3种基因型分别为GC型、CC型和GC型，+1444C＞T(rs1130864)酶切分型，检测到3种基因型分别为CT型、CC型和TT型，见图1。

图1 C反应蛋白基因多态性检测

2．2 CRP基因在各组中等位基因及基因型频率分析 冠心病组和对照组C反应蛋白基因等位基因和基因型频率分布见表2、表3，通过统计分析，两组CRP基因 +1059G＞C(rs1800947)和+1444C＞T(rs1130864)等位基因和基因型频率差异无统计学意义(P＞0．05)。

表2 两组+1059G＞C(rs1800947)等位基因和基因型频率分布/n(%)

表3 两组+1444C＞T(rs1130864)等位基因和基因型频率分布/n(%)

2．3 各组CRP以及Gensini评分情况 冠状动脉病变组、粥样硬化组和对照组CRP和Gensini评分差异比较有统计学意义(p＜0．05)，其中冠状动脉病变组CRP水平和Gensini评分最高，分别为(10．13 ±1．22)mmol·L－1和(44．39 ±11．26)分，其次为粥样硬化组，对照组最低，见表4。

表4 各组CRP水平以及Gensini评分(x±s)

2．4 CRP与Gensini评分相关性分析 通过Pearson相关性分析，CRP水平与 Gensini评分呈正相关，r=0．770，P=0．016，见图 2。

图2 CRP与Gensini评分相关图

3 讨论

临床医学普遍把冠心病看做一种炎症性疾病，糖尿病、血脂异常等是患者冠状动脉病变严重程度的主要影响因素。国内外研究报道CRP不仅可以有效地预测心血管事件，而且对炎性反应和动脉粥样硬化有一定的促进作用［3]。CRP是机体出现损伤、感染、炎症时肝细胞在白细胞介素－6的刺激下迅速合成一种急性期蛋白，同时有研究者指出［4]受损的冠状动脉也可以产生CRP。CRP具有稳定性好、不随时间和季节周期性变化、不受饮食影响、检测技术成熟且成本低廉等优点［5]，因此任何时刻C反应蛋白的测定值均具有临床应用价值。遗传、体重指数、血压、血脂等多种因素共同决定着CRP基础水平，其中遗传因素在导致个体基础CRP水平方面所起的作用达到35% ～40%。因此临床上有必要进一步探讨CRP基因多态性和冠心病患者的冠状动脉病变程度的关系。

动脉粥样硬化因动脉外膜上聚集着黄色粥样脂质而得名，一般情况下其发展过程为从动脉内膜开始，然后复合糖类和脂质逐渐聚集，出血、血栓形成，纤维组织增生和钙质沉着，并有动脉中层的逐渐退变和钙化［6]。CRP水平的高低直接反应疾病炎症反应的程度，血清中CRP水平越高表示冠状动脉内粥样硬化斑块的局部炎症反应就越强、范围越大，即冠状动脉的病变程度越严重。CRP主要集中在粥样斑状里，粥样脂核的大小、纤维帽薄弱斑块的数量以及巨噬细胞的密度都对其有一定的影响［7]。CRP可以通过与脂蛋白、溶血卵磷脂等配体结合激活补体系统［8]，释放大量可以损伤血管内膜的反应蛋白和反应复合物。血管损伤主要由高糖化蛋白水平、血管剪切应力、吸烟等因素引起，高水平的CRP对此过程一定的促进作用;同时内皮细胞被激活，有助于增加细胞间黏附分子(ICAM-1)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、E选择素、单核细胞诱导蛋白－1(MCP-1)的表达，导致内皮功能障碍诱发动脉粥样硬化［9－11]。CRP有利于单核细胞诱导蛋白MCP-1和内皮黏附分子的增加［12]，进而对单核细胞的产生和活化有一定的促进作用，并通过诱导单核细胞合成组织因子产生促凝血作用。CRP可以加速纤维蛋白的合成，以及促进巨噬细胞产生促血小板凝集素、纤维蛋白原、组织因子，并通过激活组织纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)和凝血相关因子使机体纤溶和凝血机制失衡，从而促进冠状动脉内血栓形成［13－14]。本研究发现所有研究对象中冠状动脉病变组CRP水平和Gensini评分最高，其次为粥样硬化组，对照组最低，且冠状动脉病变组、粥样硬化组和对照组CRP和Gensini评分差异比较有统计学意义(P＜0．05)，但C反应蛋白基因多态性与冠心病易感性无关。由此可见，CRP可以直接作用于动脉粥样硬化的发生过程。

综上所述，C反应蛋白基因多态性与冠心病的易感性无直接的关系，但血清CRP水平与冠状动脉的病变程度呈正相关。CRP作为一种急性时相蛋白，临床上检测技术成熟、快捷且价格低廉，可以作为预测冠状动脉病变严重程度、病情以及预后的指标在临床上推广应用。

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