APP下载

Survivin 、MMP-2及 P16蛋白在卵巢上皮癌中的表达及其临床意义

2015-03-21刘嗣超邬晋芳

陕西医学杂志 2015年4期
关键词:卵巢癌上皮阳性率

刘嗣超 邬晋芳

西安交通大学(西安 710061)

·临床病理·

Survivin 、MMP-2及 P16蛋白在卵巢上皮癌中的表达及其临床意义

刘嗣超△邬晋芳

西安交通大学(西安 710061)

目的:探讨存活素(Survivin)、基质金属蛋白酶(MMP-2)及P16蛋白在人卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法:选择85例卵巢肿瘤上皮性肿瘤(良性20例、恶性上皮癌65例)及20例正常卵巢组织石蜡标本,运用免疫组化法检测其中Survivin 、MMP-2及 P16蛋白的表达情况,分析三指标间及与卵巢上皮癌病理特征的关系。结果:在卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中urvivin的阳性表达率分别为75.4%、20%、5%,MMP-2阳性率分别为72.3%、15%、10%P16阳性率分别为33.8%、60%、80%。Survivin、MMP-2与临床分期、组织分级有显著正相关性(P<0.05),P16与临床分期、组织分级呈显著负相关性(P<0.05)。结论:Survivin、MMP-2、与P16蛋白在卵巢癌中异常表达在肿瘤的发生发展起重要作用。

卵巢癌占女性生殖系统肿瘤第三位,其中卵巢上皮性恶性肿瘤占85%~90%。由于其原发部位在盆腔,缺乏早期症状,发现时多为晚期。直接蔓延、腹腔种植及淋巴道转移是上皮性卵巢癌转移的主要途径,广泛的盆腹腔种植转移使手术难以切除干净。卵巢上皮性恶性肿瘤早期诊断率低,确诊时有60%~70%患者己属于晚期。因此,早期诊断及筛查在卵巢癌中尤为重要。

资料与方法

1 一般资料 选取西北妇女儿童医院(陕西省妇幼保健院)病理科存档2011年5月至2014年4月收治65例卵巢上皮恶性肿瘤患者手术切除标本,术前均未行放疗、化疗,年龄30~70岁,平均53岁,50岁前发病24例,50岁后(包括50岁)发病25例。按照国际妇产科联盟(FIGO)2000年手术和病理分期标准进行手术分期和病理分级,浆液性癌30例(61.2%),黏液性癌19例(38.8%),I~Ⅱ期18例,Ⅲ~Ⅳ期31例;组织学分型采用1988年国际妇产科病理学会组织学分型标准进行。高中分化癌(G1,-G2级)21例,低分化癌(G3级)28例。术后证实有淋巴结转移者27例,无淋巴结转移者22例。选取同期存档卵巢良性上皮性肿瘤20例,年龄24~57岁,平均38.5岁。卵巢浆液性囊腺瘤11例,粘液性囊腺瘤9例。正常卵巢组织20例,年龄42~68岁,平均48.4岁。三组一般资料无统计学差异(P>0.05)。

2 实验方法 105例石蜡标本均为我院病理科存档,10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,3μm连续切片。采用通用性两步免疫组化染色方法,严格按照说明书实验步骤进行操作。石蜡切片脱蜡至水,3%双氧水室温10灭活内源性酶,拘椽酸盐缓冲液微波抗原修复,正常山羊血清封闭20,滴加一抗、二抗,DAB显色,苏木素复染,脱水,透明,中性树脂封片,显微镜下观察。用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定标准:Survivin、MMP-2采用半定量的方法,在光镜下进行分析,排除非特异性染色的前提下,胞浆或胞膜出现黄色,棕黄色颗粒或棕褐色颗粒为阳性染色。16阳性染色为胞核或胞核、胞浆均有棕黄色颗粒沉着。

3 统计学方法 采用SPSS15.0对三指标间及临床病理学特征间差异卡方检验,三指标间与及病理学特征的关系采用Sperman相关分析法,以P<0.05为差别有显著性意义。

结 果

1 Survivin、MMP-2、与P16蛋白表达 在卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中Survivin的阳性率分别为75.4%、20%、5%,MMP-2阳性率为72.3%、15%、10%P16阳性率分别为33.8%、60%、80%。Survivin 与MMP-2在卵巢癌的阳性表达率明显高于良性肿瘤与正常组织,且良性肿瘤高于正常组织的表达水平,三者之间的阳性表达率具有统计学(P<0.05)。与之相反,P16在正常组织的阳性表达率高于其他组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。

2 Survivin、MMP-2、与P16蛋白表达与卵巢癌临床病理学特征的关系 Survivin、MMP-2在Ⅲ-Ⅳ期阳性表达率高于Ⅰ-Ⅱ期,G1~G2高于G3,有淋巴结转移高于无淋巴结转移。临床分期、组织分级有显著正相关性(P<0.05),相反,P16与临床分期、组织分级呈显著负相关性(P<0.05),见附表。

附表 Survivin、MMP-2、与P16蛋白表达与卵巢癌临床病理学特征的关系

注:*P<0.05

讨 论

卵巢癌病死率居妇科恶性肿瘤之首,且近年来发病率呈上升趋势,随着分子生物学技术的发展,发现了许多与卵巢癌相关的癌基因、抑癌基因,在其发生、发展过程中起到重要的作用,并且早期诊断,治疗方面的应用亦逐步受到重视。

1 Survivin基因及其在卵巢上皮癌中的表达与意义 Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子Sui等[1]用免疫组化和Western印迹方法研究了103例卵巢上皮细胞肿瘤中Survivin的表达,并探讨了Survivin表达与细胞增殖和临床预后的关系结果显示:Survivin表达的阳性率在恶性和交界性肿瘤中分别为51.1%和47.8%显著高于在良性肿瘤中的表达(21.2%),且其表达率的高低与肿瘤的大小密切相关。通过PCNA指数测定提示Survivin的表达与肿瘤细胞的增殖活性呈正相关。本研究中Survivin阳性率在正常卵巢组织及卵巢良性肿瘤中的表达与恶性肿瘤组织中的表达比较有统计学意义。Survivin在卵巢上皮癌组织中所呈现出的高表达说明存活素参与抗恶性肿瘤细胞的凋亡,与卵巢上皮癌的发生、发展之间存在着密切关系。在晚期上皮癌中的表达明显高于早期,有淋巴转移的组织中的表达也明显高于无淋巴转移者,在G3期阳性表达率高于G1~G2期,表明Survivin表达在卵巢上皮癌的恶性进展过程中发挥重要作用,与癌肿增殖、浸润及病程演进关系密切同时预示上皮癌的不良预后。有实验表明,在术后残余肿瘤直径大于和小于1cm的卵巢上皮性癌组织的Survivin阳性表达率进行比较前者为84.6%,明显高于后者的64.1%。日本香川医科大学生理学研究室研究也发现了肿瘤残余的癌肿组织大小和Survivin的过度表达有显著的关联性[2]。这些提示Survivin对卵巢上皮癌预后的评估存在价值。而另一方面李媛[3]等发现:Survivin蛋白与卵巢上皮性癌的组织分级及组织学类型、临床分期和是否存在淋巴结转移等均无相关性。Survivin细胞周期进行、肿瘤血管生成中有重要作用,与肿瘤的放射性治疗及化学药物关系密切。它在多种肿瘤组织中呈现高表达,而在正常组织及癌肿旁组织中无或低表达,是进行基因靶向治疗的理想靶点

2 MMP-2蛋白在卵巢上皮癌中表达及意义 肿瘤的侵袭与转移必须要求两个条件:肿瘤血管生成及破坏细胞外基质(Xtra-cellular matrix,ECM)。在众多影响肿瘤侵袭和转移的因素中,ECM是阻止肿瘤转移的第一道屏障。而经研究证实MMP-2功能与其降解ECM有关,同时还参与了新生血管生成过程,在正常组织中,内皮细胞表达呈低水平或阴性。但在病理生理状态下,新生组织内皮细胞的MMP-2表达则明显增加。Liotta[4]提出的肿瘤细胞浸润转移的三步骤假说仍被广为接受。本研究中MMP-2蛋白在卵巢恶性上皮肿瘤中的表达明显高于良性肿瘤组织及正常卵巢组织,在晚期上皮癌中的表达明显高于早期,有淋巴转移的组织中的表达也明显高于无淋巴转移者,在G3期阳性表达率高于G1~G2期,(上述四项对比均有统计学差异)。说明明胶酶A可能与卵巢上皮癌的发生、发展有关。且提示在卵巢癌的进展、侵袭转移过程中发挥重要作用,MMP-2的高表达可能成为有无癌细胞转移的一个参考标志。

3 P16在卵巢上皮癌中的表达与意义 本研究中P16蛋白在卵巢上皮癌肿的表达明显低于良性卵巢上皮肿瘤及正常卵巢组织,说明P16蛋白在上皮癌中的低表达使P16不能发挥其在细胞周期中的负调节作用,导致细胞异常增殖,形成肿瘤。P16蛋白在晚期上皮癌中的表达低于早期;在有淋巴转移的组织中表达低于无淋巴转移的组织;在G3期表达率低于G1~G2期中的表达,三项均有统计学差异。提示P16对卵巢上皮肿瘤进展和判断预后方面具有一定的价值。Kommoss等[5]采用免疫组化试验对FIGO中300例IIb-Ⅳ期卵巢癌患者进行P16蛋白表达的检测发现,94%(283/300)患者P16呈阳性表达,6%(17/300)呈阴性表达,在低表达、中等表达和高表达的病例中,呈中等表达者存活率较高。Surowiak等[6]的研究也证实P16的蛋白低表达是卵巢癌不利的预后指数,同时证实P16低表达与卵巢癌患者产生化疗耐药相关与本研究结果类似。

4 Survivin、MMP-2、P16蛋白在卵巢癌中表达的相关性 目前,癌基因过表达与抑癌基因失活被越来越多的学者所关注,癌变的多阶段多基因共同作用促使肿瘤的发生、发展。存活素是现阶段发现的唯一具有抑制凋亡并促血管生成作用的细胞因子,对于肿瘤血管形成具有刺激其生长,并且保护肿瘤血管内皮细胞减少化疗药物诱导凋亡的作用[7~9]。MMP-2也为肿瘤的生长和血管发生提供适宜的环境,而P16通过形成存活素/细胞周期素依赖激酶4复合物, 直接或间接地激活细胞周期素依赖激酶2/细胞周期蛋白E复合物, 导致RB蛋白磷酸化, 以启动细胞有丝分裂,表现为抑癌基因作用[10]。本组研究中Survivin 、MMP-2在卵巢上皮癌肿的表达呈正相关,提示二者可能共同作用于肿瘤微环境并相互协助,P16与Survivin蛋白在卵巢上皮癌中表达呈现负相关,我们推测在卵巢上皮癌的发展发生过程中Survivin的过度表达与P16的缺失联合使肿瘤细胞获得更大的生长优势形成是促进肿瘤发生发展的基础。

综上,本研究表明P16在卵巢上皮癌中表达下调,Survivin和MMP-2在卵巢上皮癌组织中表达上调,与正常卵巢组织以及良性卵巢上皮肿瘤有显著性差异。且P16在卵巢上皮癌中表达下调和Survivin、VMMP-2表达上调与卵巢上皮癌临床病理特征有一定的相关性。这表明Survivin、MMP-2与P16在卵巢癌的发生、发展过程中起到了重要的作用,可能成为疾病转归及判断预后的指标,也为卵巢癌的筛查及基因靶向治疗提供了分子生物学基础。

[1] Sui L, Dong Y, Ohno M,etal. Survivin expression and its correlation with cell proliferation and prognosis in epithelial ovarian tumors[J]. Int J Oncol, 2002, 21 (2): 315-320.

[2] Yoshida H, Ishiko O, Sumi T,etal. Survivin, bcl-2 and matrix metalloproteinase-2 enhance progression of clear cell- and serous-type ovarian carcinomas[J]. Int J Oncol, 2001, 19 (3): 537-542.

[3] 李 媛. Survivin在卵巢肿瘤中的表达及其与血管生成的关系2007[J]. 中国妇幼保健, 2007, 22 (9): 1 208-201 210..

[4] Liotta LA. Tumor invasion and metastases-role of the extracellular matrix: Rhoads Memorial Award lecture[J]. Cancer Res, 1986, 46 (1): 1-7.

[5] Kommoss, Sdu-Bois A, Ridder R. Independent prognostic significance of cell cycle regulator proteins P16(INK4a)and pRb in advancedstage ovarian carcinoma including optimally debulked patients:A translational research subprotocol of a randomised study of the Arheitsgemeinschaft Gynaekologische Onkolugie Ovarian Cancer Study Group[J]. Br J Cancer, 2007, 96 (2): 306-313.

[6] Surowiak P, Materna V, Maciejczyk A,etal. Decreased expression of P16 in ovarian cancers represents an unfavourable prognostic factor[J]. Histol Histopathol, 2008, 23 (5): 531-538.

[7] Cohen C,Lohmann CM, Cotsonis G,etal. Survivin expression in ovarian carcinoma:correlation with apoptotic markets and prognosis[J]. Modern Pathology, 2003, 6 (6): 574-583.

[8] Blanc-Brude OP, Mesri M, Wall NR,etal. Therapeutic targeting of the survivin pathway in cancer: initiation of mitochondrial apoptosis and suppression of tumor-associated angiogenesis[J]. Clin Cancer Res, 2003, 9 (7): 2683-2692.

[9] Suzuki A, Ito T, Kawano H,etal. Survivin initiates procaspase 3/p21 complex formation as a result of interaction with Cdk4 to resist Fas-mediated cell death[J]. Oncogene, 2000, 19 (10): 1346-1353.

[10] 徐 全,张 平,刘 勇. 细胞周期调控因子P16和CDK4在肺癌中的表达[J]. 江西医学院学报, 2004, 44 (4): 17.

(收稿:2014-10-30)

卵巢肿瘤/病理学 @存活素 基质金属蛋白酶 免疫组织化学

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.053

△西北妇女儿童医院

猜你喜欢

卵巢癌上皮阳性率
miR-181a在卵巢癌细胞中对顺铂的耐药作用
自身免疫性肝病诊断中抗核抗体与自身免疫性肝病相关抗体检测的应用价值
Wnt3 a和TCF4在人卵巢癌中的表达及临床意义
不同类型标本不同时间微生物检验结果阳性率分析
CXXC指蛋白5在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义
卵巢癌脾转移的临床研究进展
手部上皮样肉瘤1例
肌电图在肘管综合征中的诊断阳性率与鉴别诊断
50例面颈部钙化上皮瘤误诊分析
microRNA与卵巢癌转移的研究进展