早发2型糖尿病和糖尿病前期患者Pax6基因突变/变异的临床特点*

韩仰东

西安市第一医院老年科内分泌病区(西安 710002)

早发2型糖尿病和糖尿病前期患者Pax6基因突变/变异的临床特点*

韩仰东

西安市第一医院老年科内分泌病区(西安 710002)

目的：探讨早发2型糖尿病和糖尿病前期Pax6基因突变/变异的特点。方法：选早发2型糖尿病(A组)、糖尿病前期(B组)和非糖尿病(对照组)共260例患者，筛查Pax6基因突变/变异，分析临床特点。结果：A组和B组各检出Pax6基因外显子6的Arg67Arg(A-G)/7的Thr166Thr(T-C)突变。结论：Pax6基因突变/变异可引发和推进早发2型糖尿病和糖尿病前期的发展。

据相关研究结果显示，早发2型糖尿病或糖尿病前期患者中可能存在Pax6基因的突变/变异，从而推进糖尿病的发展[1]。本研究选105例早期2型糖尿病、35例糖尿病前期以及120例非糖尿病，筛查Pax6基因外显子，分析Pax6基因突变的临床表型及可能引发早发2型糖尿病和糖尿病前期的致病机制。

资料与方法

1 一般资料 选我院2011年2月至2012年2月收治的105例早发2型糖尿病患者(A组)和35例糖尿病前期患者(B组)，均为常染色体显性遗传，谷氨酸脱羧酶抗体(GAD抗体)和胰岛素自身抗体(IA2抗体)均呈阴性，发病年龄均低于40岁；120例非糖尿病患者(对照组)，无家族遗传病，年龄高于50岁。所有患者均知情同意参与本次研究，两组一般资料比较，见表1。

2 方 法

2.1 收集资料:收集3组患者的临床资料和各项临床指标，包括性别、年龄、发病年龄、发病病程、体质量指数、吸烟、收缩压、舒张压、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、空腹胰岛素(FINS)、空腹C肽(FCP)、餐后2h胰岛素(2hINS)、餐后2hC肽(2hCP)。

表1 3组患者临床资料对比分析

2.2 基因检测:以PCR产物直接测序法筛查A组、B组与对照组患者Pax6基因突变/变异，抽取2ml外周静脉血，利用苯酚/氯仿法抽提基因组DNA，选取Pax6基因中14个外显子和外显子-内含子拼接区基因片段，用PCR法扩增合成PCR反应引物，反应物体积为20μL[2]。分别在95℃、68℃、72℃下对目的片段依次进行PCR扩增，每次时间为30s，共循环30次[3]。使用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离处理扩增后PCR产物，并用溴乙锭染色，观察结果。纯化回收处理PCR产物，同时测序和判断所有个体基因型。

3 统计学方法 本次所有研究资料均采用SPSS18.0统计学软件处理，计量资料采用均数±标准差表示，计数资料采用χ2检验，组间对比采用t检验，P<0.05为差异具有显著性，具有统计学意义。

结 果

A组可见Pax6基因外显子6的Arg67Arg(A-G)突变，突变型等位基因G的频率为1.5%，野生型A频率为98.5%，其中突变型3例(AG基因型)，野生型102例(AA基因型)；AG基因型患者的2hINS低于AA基因型，差异比较有统计学意义(P<0.05)； B组可见Pax6基因外显子7的Thr166Thr(T-C)突变，突变型等位基因C的频率为4.3%，野生型等位基因T的频率为95.7%，其中突变型3例(TC基因型)，野生型32例(TT基因型)，TC基因型患者的2hCP和2hINS低于TT基因型，差异有统计学意义(P<0.05)，对照组中未观察到以上2种基因突变,如表2所示。

表2 A组与B组内突变位点基因型分组

讨 论

人类11号染色体短臂中含有Pax6基因，该基因包含外显子(14个)和内含子(13个)[4]。Pax6转录因子包含同源结构域和配对结构域等2个DNA结合区域[5]。根据相关研究报道，Pax6基因在胰岛β细胞分化与成熟中的作用非常重要，除此之外，其在α细胞的分化和成熟中会调控髙血糖素的转录，起到一定的调节作用[6]。本次研究结果发现，A组患者中可观察到Pax6基因外显子6的Arg67Arg(A-G)突变，AG基因型患者的2hINS低于AA基因型；B组患者可观察到Pax6基因外显子7的Thr166Thr(T-C)突变，并且TC基因型患者的2hCP和2hINS低于TT基因型，这说明突变基因会抑制胰岛素基因转录与表达，从而降低胰岛素的分泌，造成糖代谢发生障碍，从而使糖尿病前期患者和早发2型糖尿病患者发生糖调节受损。而研究中两组突变基因发生位置均与氨基酸相关，这提示了Pax6调控糖代谢相关的靶基因两种突变基因起到抑制该基因的转录与表达。

[1] 沈 洁,尹立雪,陆 景,等.超声血流向量成像评价糖尿病前期左心室舒张期流场状态[J].中华超声影像学杂志,2012,21(2):93-98.

[2] 庄前玲,郭桂芳,李湘萍,等.糖尿病前期的临床研究进展[J].中华护理杂志,2011,46(8):832-834.

[3] 赵 娜,曹永吉,师爱香,等.2型糖尿病周围神经病变的早期诊断[J].临床合理用药杂志,2013,6(22):18-20.

[4] 魏洪军,程 飞.2型糖尿病患者慢性并发症临床特点及相关因素分析[J].河北医药,2011,33(18):2742-2743.

[5] 王晓春,葛庆峰,王蔓莉,等.2型糖尿病合并高血压前期患者颈动脉内膜中层厚度的变化[J].中国综合临床,2011,27(8):815-816.

[6] 曾龙驿,邹丽媛.从多重危险因素管理看阿司匹林在糖尿病患者心血管一级预防中的作用[J].中华糖尿病杂志,2013,5(1):55-57.

(收稿：2014-09-09)

*西安市卫生局科研项目(J2011003)

糖尿病，非胰岛素依赖型 @Pax6基因 对比研究

R587.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.018