微生物检测中培养基的制备及注意事项

刘荣华

(河北省秦皇岛卢龙县疾病预防控制中心 066400)

培养基是提供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料，有液体、半固体或固体形式，用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质。培养基做得好坏，对微生物检测工作是很重要的。培养基自身质量的优劣、保存是否得当、配制使用是否正确都直接关系到检验结果的正确与否。

1 培养基制备前期准备

对新买的培养基，一定要由专人做好接收工作，应仔细核对培养基的名称、规格、数量、成分、外观特征、批号、保质期是否符合要求，并做好记录，过期的培养基一定不能用。

2 培养基的制备

2.1 调配按照培养基的配方，准确称取各种成分于烧杯中。称量时一定要用专用的角匙，避免交叉污染。干粉培养基易吸潮，应注意防潮，用完马上盖好瓶口。如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。

2.2 溶化制备培养基常用蒸馏水，因蒸馏水不含杂质，也可用自来水，但是用自来水配制的培养基因水中常含有钙、镁等，可与蛋白胨或肉浸液中的磷酸盐生成不溶解性的磷酸钙或磷酸镁，经高压灭菌后，可析出很多沉淀。因此，若用自来水配制培养基，最好先将水煮沸，使部分盐类沉淀经过滤后方可使用。溶化时不得用铁锅或铜锅，以防有金属离子混入培养基中，影响细菌的生长。加热溶化过程中应随时搅拌，容器的大小要适当，注意防止烧焦和外溢。烧糊的培养基营养物质被破坏，或可产生有毒物质，如发现烧焦，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基最多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。

2.3 矫正PH值PH比色计应准确可靠，也可用PH试纸来矫正。微生物必须在适宜的PH范围内才能生长繁殖，必须按各种不同培养基的要求准确测定PH值。培养基配方要求的PH值为灭菌或消毒后的PH值。培养基在高压灭菌后，其PH值约降低0.1～0.2，故矫正时应比实际需要的PH值高0.1～0.2。培养基制备过程中，如果需要调整培养基的PH值，应用1mol/L NaOH或1mol/L HCL调整。注意PH不要调过头，以避免回调或反复调，否则会影响培养基内各离子的浓度。

2.4 过滤澄清培养基配成后一般都有沉渣或混浊，需过滤澄清使其清晰透明方可使用。液体培养基常用滤纸过滤，固体培养基如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热用两层纱布中夹脱脂棉过滤，也可采用自然沉淀法。

2.5 分装根据不同的需要，可将制好的培养基分装入不同容量的三角烧瓶、试管等，管口塞上棉塞，用牛皮纸包扎管口。分装的量不宜超过容器的2/3，以免灭菌时外溢。分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染。

2.6 灭菌不同成分、性质的培养基，可采用不同的灭菌方法。一般培养基采用湿热灭菌，即高压蒸气灭菌法，通常是121℃15min，含糖或特殊培养基，按照生产商提供的说明灭菌。配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅要定期进行检定，每次灭菌采用化学变色纸对灭菌效果进行验证。

2.7 检定(即质量的检查)每批培养基制成后必须经检定后方可使用。制备好的培养基应有相应的颜色，一般培养基应澄清、无浑浊、无沉淀，检定时从每批制备的培养基中选取部分培养基放在37℃温箱内培养24小时后，确定无杂菌生长即可待用。同时用已知菌种检查在此培养基上的生长繁殖及生化反应情况，符合要求者方可使用。

3 培养基的保存

制备好的培养基，不宜保存过久，以少量勤做为宜。灭菌后的培养基应该迅速冷却，避免长时间保存在高压锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分。含染料的培养基应避光保存;倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完，应于冷藏保存，如果保存时间超过2天，应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期，应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发［2］。每批培养基应注明制作日期，平日少量分装的培养基均宜存放于4℃冰箱内。

4 讨论

制备培养基是细菌培养中不可缺少的工作，培养基的好坏，直接关系到检测结果的准确性、可靠性，在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在培养基制备过程中疏忽任何一个细小环节，都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此，在日常工作中要不断完善和提高培养基的配制水平，认真对待每一个环节，为检测工作提供高质量的培养基，以便于保证检测结果的科学有效。

［1］王彩玉.常用细菌培养基制备及注意事项.卫生职业教育.2004，(23)∶102 －102.

［2］饶红，陈广全，冯骞，等.微生物实验室培养基的质量保证措施.检验检疫科学，2006，6(4)∶31 ～33.