Xpert MTB/RIF Assay在结核病诊断中的应用

高 漫，邹远妩，白广红，梁亚萍

（陕西省结核病防治院检验科，陕西 西安 710100）

Xpert MTB/RIF Assay在结核病诊断中的应用

高 漫，邹远妩，白广红，梁亚萍

（陕西省结核病防治院检验科，陕西 西安 710100）

目的对Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌（MTB）方法进行临床研究，评价其在结核病诊治中的应用价值。方法应用Xpert MTB/RIF法检测结核患者的MTB，以BACTEC MGIT 960培养法为参考方法，获得该方法的灵敏度、特异度。结果

对123例结核患者的临床样本进行Xpert MTB/RIF法检测、BACTEC MGIT 960培养及细菌涂片抗酸染色法检查，其灵敏度和特异度分别为65.9%、47.2%、31.2%和100.0%、96.0%、100.0%。结论Xpert MTB/RIF检测MTB速度快，灵敏度高，特异度强，对结核患者的早期诊断及治疗有着重要的意义。

结核分枝杆菌； Xpert MTB/RIF检测； 特异度； 灵敏度

近年来，结核病患者数量呈上升趋势，影像学检查与细菌学实验室检查是结核病诊断的主要依据，但是对于早期的病例，患者特征不明显，影像学检查难以确认，细菌学检查传统的涂片法与漂浮集菌法阳性率低［1］，L－J培养法周期长［2］。由美国BD公司生产的BACTEC MGIT 960系统检测结核分枝杆菌（MTB）阳性率较高、周期较短，但培养周期平均仍需12天左右［3］。为寻求一种特异度强与灵敏度高，检测周期短的实验方法对结核患者早期诊断与治疗至关重要。由美国Cepheid公司研发生产的Xpert MTB/RIF方法操作简单、快捷，可以在2小时内完成MTB复合群和利福平耐药性的检测并得出结果报告［4］，对于结核患者的早发现早诊断早治疗提供了有效的方法。本研究对Xpert MTB/RIF检测MTB方法进行临床研究，以评价其检测能力及在结核病诊治中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究的试验组标本是收集本院2013年8月至2014年1月肺结核住院患者灌洗液标本123例作为试验组，男性78例，年龄19～75岁，平均年龄47岁；女性45例，年龄20～68岁，平均年龄44岁。对照组标本为收集的本院最终确诊为肺结核以外的肺外结核患者灌洗液标本25例。

1.2 仪器与试剂 Xpert MTB/RIF仪器及试剂由美国Cepheid公司研发生产，BACTEC MGIT 960系统及试剂由美国BD公司研发生产。

1.3 方法 Xpert MTB/RIF检测方法采用GeneXpert检测系统，是一种半巢式实时荧光定量PCR体外诊断技术，针对rpoB基因81bp利福平耐药核心区间（RRDR）设计引物、探针，检测其是否发生突变，进而用于诊断患者是否感染MTB，以及是否对利福平耐药（rpoB序列存在突变）。操作步骤：灌洗液与试剂按2∶1混合，加入2mL液体到试剂盒内，试剂盒放入机器（手工操作结束），样品自动洗涤和过滤，自动超声破碎样品，释放核酸，DNA与PCR试剂混合，半巢式荧光定量PCR扩增和检测，打印结果。以H37Rv为阳性对照，同时进行Xpert MTB/RIF检测、BACTEC MGIT 960培养、涂片抗酸染色。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行数据分析，检测结果采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 试验组123例临床灌洗液标本的检测 见表1。

2.2 对照组25例肺外结核患者灌洗液标本的检测 见表2。

3 讨 论

试验组结果显示有统计学意义（P＜0.01），Xpert MTB/RIF检测方法灵敏度高于BACTEC MGIT 960方法与涂片抗酸染色法。对照组显示，Xpert MTB/RIF检测方法与“金标准”BACTEC MGIT 960方法和涂片抗酸染色法特异度强［5］，BACTEC MGIT 960方法对照组中的1例阳性确认为试验过程中造成的污染。

MTB生长周期长，涂片抗酸染色法阳性率低但其成本低，操作简单，适用于基层医院；BACTEC MGIT 960系统培养阳性的菌株还需进一步鉴定是NTM或MTB，为MTB才能进行药敏实验，为NTM则不能进行药敏实验，且成本高，适用于大医院；Xpert MTB/RIF最大程度简化MTB检测，且不受NTM影响［6］，将BACTEC MGIT 960需至少3周才能完成的MTB及其利福平耐药监测缩短为2小时［7］，且一次完成，操作简单、易学，手动时间不超过5分钟，检测结果不会因人而异，整个检测在一个密闭环境中进行，对操作者和周围环境安全，成本与BACTEC MGIT 960成本相当。对于手动操作过多的试验，Xpert MTB/RIF的操作在很大程度上避免了标本的污染和交叉感染，有效防止了假阳性或污染的出现。Xpert MTB/RIF完全整合了传统PCR检测所需的三个步骤，又将样品准备、扩增、定量检测进行统一，只需样品准备，核算提取、核酸扩增、序列检测都是仪器内进行，无需特殊实验室，仪器设备简单。

缺点是Xpert MTB/RIF检测依赖于样品中存在的MTB数目，正确采集、处理和存放标本，才能获得可靠的结果。Xpert MTB/RIF检测结果阳性不一定表示存在有生命力的MTB，经抗菌药物治疗后MTB DNA可能仍存在，BACTEC MGIT 960培养阳性的前提是标本中存在有生命力的MTB［8］，所以，Xpert MTB/RIF不能作为评估治疗成功或失败的指标，但Xpert MTB/RIF检测阳性率高于BACTEC MGIT 960，且检测所需时间仅为2小时，临床可根据患者病情选择检测方法。

［1］ 钱雪琴，吴文娟，卢水华.采用快速离心沉淀法检测初诊肺结核患者痰内抗酸杆菌［J］.中国卫生检验杂志，2009，19（1）：141－142.

［2］吴学兵，陆彬，桂晓虹，等.液体MGIT培养法在结核分枝杆菌检测中的应用评估［J］.检验医学，2013，28（3）：211－214.

［3］梁亚萍，高漫.BACTEC MGIT 960用于结核分枝杆菌快速培养的初步评价［J］.中国预防医学杂志，2011，12（6）：521－522.

［4］ 张治国，欧喜超，孙倩，等.利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究［J］.中国防痨杂志，2013（1）：13－16.

［5］王巍，李洪敏，王安生，等.BACTEC－MGIT960快速培养药敏对肺结核诊治的应用和评价［J］.中国防痨杂志，2003，12（6）：42－44.

［6］唐神结，胡忠义.结核病临床诊治进展年度报告：2012年第一部分结核病临床诊断［J］.中国防痨杂志，2013，6（6）：405－426.

［7］范齐文，郭建，张慧涨，等.M/XDR－TB的快速分子检测和耐药特征分析［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2011，31（12）：1133－1137.

［8］ 中国防痨协会临床专业委员会.结核病临床诊治进展年度报告（2012年）：第一部分结核病临床诊断［J］.中国防痨杂志，2013，35（6）：405－426.

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.058

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1673－4130（2015）03－0413－02

2014－09－24）