HLA－B27抗原检测在强直性脊柱炎诊断中的意义

林 蔚，肖 平，吴祖常

（佛山市第一人民医院临床医学研究所，广东 528000）

HLA－B27抗原检测在强直性脊柱炎诊断中的意义

林 蔚，肖 平，吴祖常

（佛山市第一人民医院临床医学研究所，广东 528000）

目的探讨HLA－B27抗原表达与强直性脊柱炎（AS）的相关性，及其对AS诊断和鉴别诊断的意义。方法采用流式细胞术检测人类白细胞抗原B27（HLA－B27），纳入研究的包括354例疑似AS患者、35例确诊AS患者和30例确诊类风湿性关节炎（RA）患者。结果354例疑似AS患者的HLA－B27总阳性率为22.0%，确诊AS患者HLA－B27的阳性率为85.7%，均高于RA组（P＜0.05）。AS患者中男性占77.1%，女性占22.9%，且发病年龄主要集中在青壮年时期；AS患者HLA－B27抗原检测用于AS诊断的灵敏度为85.7%，特异度为100.0%。结论HLA－B27抗原的检测对AS患者的早期诊断和鉴别诊断具有重要意义。

强直性脊柱炎； 人类白细胞抗原B27； 流式细胞术

强直性脊柱炎（AS）是一种高致残性的自身免疫性疾病，病因未明，主要症状为骶髂关节痛，其次是髋关节痛，腰腿痛常伴晨僵，夜间加重，活动后减轻等，多见于青壮年男性，16～32岁发病较多，多数患者呈隐匿发病，常常不能引起人们的重视。该疾病的诊断主要依据临床症状和影像学检查，但在疾病早期骨骼未发生改变，影像学特征不明显，临床症状与其他骨性疾病相似，容易发生漏诊和误诊，且误诊者以类风湿性关节炎（RA）患者居多。国内的流行病学调查表明，AS在中国汉族人群中的发病率为0.2%～0.45%［1］。家族调查结果显示，HLA－B27阳性的AS患者一级亲属中，近半数HLA－B27抗原阳性，其中又有近半数罹患本病；同卵双生子HLA－B27阳性和AS的一致率则超过50%，提示本病与HLA－B27阳性具有相关性。因此，HLA－B27抗原的检测在该病的诊断及鉴别诊断中有重要意义。流式细胞仪使用单克隆抗体及荧光素，可多参数同时测定，不需要分离淋巴细胞，操作简便，具有高灵敏度、特异度，标本之间、不同实验室之间可重复性好，因此被广泛用于HLA－B27抗原的检测。本研究旨在探讨本地区AS发病与HLA－B27抗原表达的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 按照1984年纽约修订的AS诊断标准［2］，选取2012年在本院确诊为AS的35例患者，其中男28例、女7例，作为AS组；按照1987年美国风湿学会所修正的RA诊断标准，选取同期于本院确诊为RA的30例患者，其中男12例、女18例，作为RA组。另外，选取具有腰腿疼痛症状的本院同期疑似AS患者354例作为疑似AS组。

1.2 仪器与试剂 使用的主要仪器为美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪。试剂主要为美国Becton Dickinson公司的HLA－B27试剂盒，其中包括单克隆荧光抗体HLA－B27 FITC/CD3PE，HLA－B27标准微球，溶血素。

1.3 方法

1.3.1 标本采集与处理 采集静脉血2mL，用肝素抗凝。在测定管中加入30μL抗HLA－B27FITC/CD3PE抗体和60 μL肝素抗凝全血，混匀后室温避光染色15min。加入2mL溶血素，300×g离心5min，弃上清。用PBS洗涤1次，300×g离心5min，弃上清。加0.5mL含1%多聚甲醛的PBS悬浮细胞，置于4～8℃冰箱待测。

1.3.2 检测与结果判断 （1）用HLA－B27试剂盒中的标准微球调整仪器设置，设定界值。（2）流式细胞术法结果判定：用HLA－B27软件获取15 000个细胞，HLA－B27自动软件首先通过FSC－SSC这两个参数的组合，区分经裂解红细胞处理后外周血白细胞中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三个群体。然后在前向角FSC－荧光FL2点图上确定CD3强阳性细胞群体的位置，设定一个CD3＋T淋巴细胞门，软件随后自动检测T淋巴细胞B27的表达强度，如果大于或等于仪器设定的界值报告阳性，否则报告阴性。见附图1（见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”）。

1.4 统计学处理 数据分析采用SPSS19.0统计软件，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 AS患者的年龄及性别分布情况 AS患者中男性多于女性，男女比例为3.4∶1.0，其中以青壮年的发病率比较高，见表1。

2.2 HLA－B27阳性率的比较 AS患者HLA－B27阳性率为85.7%，高于RA患者（P＜0.05）。AS患者HLA－B27抗原的阴性率为14.3%。HLA－B27抗原的灵敏度为85.7%，特异度为100.0%。见表2。

3 讨 论

HLA－B27抗原是一种免疫遗传标记抗原，为显性遗传。在免疫系统中主要负责细胞间的相互识别，诱导免疫反应和调节免疫应答。HLA－B27分子可以和一些自身肽段结合，形成复合体在自身细胞膜上表达后，能被相应的CD8＋T细胞识别，从而导致T细胞对自身靶细胞的杀伤，造成组织变性，器官受损。AS的病因目前尚未完全阐明，大多认为与遗传、感染、免疫、环境等因素有关［3－4］。AS呈常染色体显性遗传，家族聚集性是该病的重要特征，由此表明遗传因素在发病机制中的重要作用［5］。HLA－B27抗原阳性的患者应进行家系调查，有利于AS的早期发现，并对早期患者采取预防或治疗措施［6］，如对HLA－B27抗原阳性但无症状者或AS患者的子女可及时预防和治疗呼吸道，消化道的细菌感染以免诱发本病。

本研究中确诊为AS的受检者男女之比为3.4∶1.0，而我国近年男、女发病比例从2∶1至10∶1均有报道，这种差异除可能与地区、种族的不同有关外，还可能与女性AS患者病情相对较轻，医生对女性患者的临床表现认识不足导致诊断率低有关［7－8］。在不同年龄组中，＜40岁的AS患者占77.1%，≥40岁AS患者占22.9%，这提示AS的发病与年龄和性别有重要关联，即青壮年男性的发病率比较高。本研究中，HLA－B27抗原与AS高度相关，因此建议腰背痛3个月以上，伴晨僵及活动后疼痛减轻的患者应及时进行HLA－B27抗原的检测，若阳性者，则进行骶髂关节CT检查，以达到早期诊断和早期治疗。

AS以脊柱为主要病变部位，累及骶髋关节和周围大关节，该病起病隐匿、病程长、迁延不愈、致残率高［9］，因临床症状不典型，而纽约标准的条件又过于严格，当影像学有所表现时，往往疾病已存在相当长时间，造成该病误诊漏诊率高，因此HLA－B27的检测已成为临床诊断和鉴别诊断AS的重要指标［10］。目前检测HLA－B27的方法有微量淋巴细胞毒试验（MLCT）、ELISA法、流式细胞仪法、序列特异引物引导的PCR反应等。其中MLCT方法操作虽较为简单，但实验条件难以控制，加之HLA高度多态性等因素的影响，易出现误判错判；ELISA法操作简单、快速，无需特殊仪器，适合用于大样本量的筛选试验［11］；后2种方法实验要求高，且均需价格昂贵仪器而难以普及。洪俊等［12］认为流式细胞仪检测HLA－B27抗原的表达无须分离淋巴细胞且操作简单，比传统的MLCT节约时间，且检测结果更敏感、准确、客观、容易判读，标准化程度高［13］。因此，目前国际上常规用流式细胞法检测 HLAB27。本研究中检测HLA－B27抗原的灵敏度和特异度均较高，分别为85.7%和100.0%。

应用流式细胞术检测HLA－B27为AS的早期诊断、鉴别诊断、早期治疗提供一个重要手段，但不是特异的，并不能对AS确诊，X线平片、CT等影像学表现具有肯定的诊断意义。本研究显示，虽然HLA－B27阳性结果与临床确诊结果具有较高的一致性，但是在目前临床诊断过程中，HLA－B27检测结果并不起决定性作用，阳性结果中仍有一定数量的病例未被确诊为AS、本实验室未被确诊为AS的病例HLA－B27均为阴性，可能与病例数和地域有关，同时，被确诊的病例中，也有一定数量为阴性结果。虽然HLA－B27阳性不能作为AS的诊断依据，但对早期及不典型AS的诊断有重要的参考价值，对于1级和轻度的2级改变X线平片往往难以肯定诊断，需要结合临床病史和HLA－B27检测结果才能确诊。所以对疑为AS患者进行HLA－B27抗原的检测有助于提高早期诊断AS的可能性，为此类患者的诊断和鉴别诊断提供线索，可弥补X线不能早期诊断AS的不足［11］，可见HLA－B27和影像学检测对AS的诊断是互补的。

总之，通过用流式细胞仪来检测HLA－B27抗原，结合临床表现和影像学检查，不仅可以提高诊断AS的准确性，还可以作为早期诊断AS和鉴别诊断的指标，使更多的患者得到早期诊断，尽早进行预防或及时治疗。

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The clinical significance of HLA－B27 antigen detection in the diagnosis of ankylosing spondylitis

Lin Wei，Xiao Ping，Wu Zuchang
（Institute of Clinical Medicine，the First People′s Hospital of Foshan City，Foshan，Guangdong，528000，China）

ObjectiveTo investigate the correlation between the expression of human leukocyte antigen B27（HLA－B27）antigen and ankylosing spondylitis（AS），and its implications for the diagnosis and differential diagnosis of AS.MethodsFlow cytometry was used to detect HLA－B27.354suspected AS patients，35patients final diagnosed with AS and 30patients diagnosed with rheumatoid arthritis（RA）were enrolled in the study.ResultsThe positive rate of HLA－B27in 354patients with suspected AS was 22.0%，in patients diagnosed with AS was 85.7%，which was higher than the RA group（P＜0.05）.In AS patients，Males accounted for 77.1%，females accounted for 22.9%，and the patients′age mainly concentrated in youth.The sensitivity and specificity of HLA－B27test was 85.7%and 100.0%respectively in the diagnosis of AS.ConclusionHLA－B27antigen detection is important for early diagnosis and differential diagnosis of AS patients.

ankylosing spondylitis； human leukocyte antigen B27； flow cytometry

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.036

A

1673－4130（2015）03－0371－02

2014－10－08）

林蔚，女，主管检验技师，主要从事流式细胞技术的研究。