五味子对产金属β－内酰胺酶鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用研究

李艳红，张景皓，李 巍，季 萍△

（1.新疆医科大学第一附属医院医学检验中心，新疆 乌鲁木齐 830054，2.上海复旦大学附属华东医院检验科，上海 200040）

五味子对产金属β－内酰胺酶鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用研究

李艳红1，张景皓2#，李 巍1，季 萍1△

（1.新疆医科大学第一附属医院医学检验中心，新疆 乌鲁木齐 830054，2.上海复旦大学附属华东医院检验科，上海 200040）

目的研究五味子对鲍曼不动杆菌，包括产金属β－内酰胺酶（MBL）细菌和不产MBL鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用。方法对临床分离的75株鲍曼不动杆菌进行初步筛选，然后对这些菌株进行产MBL确证试验；检测75株鲍曼不动杆菌对14种抗菌药物的耐药情况；采用体外抑菌试验检测五味子水煎液对75株鲍曼不动杆菌（包括产MBL和不产MBL鲍曼不动杆菌）的MIC。结果结果MBL确证试验表明筛选出的50株菌株中，有38株阳性，占试验菌株的76%（38/50）。结论五味子对鲍曼不动杆菌，特别是产MBL酶的鲍曼不动杆菌有一定的抑菌作用，可以将西药与五味子联合应用在抗鲍曼不动杆菌的治疗中。

五味子； 鲍曼不动杆菌； 金属β－内酰胺酶

鲍曼不动杆菌是目前临床上较为常见的条件致病菌，研究表明其耐药性尤其是对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性近年来增加迅速［1］，甚至出现了仅对多黏菌素敏感而对其他抗菌药物均耐药的菌株［2］，然而现代药理研究表明，五味子在诸多方面都有较好的效果，如兴奋中枢神经系统、镇咳祛痰、强心、降低转氨酶水平、抗菌、抗衰老、抗病毒、兴奋平滑肌和促进代谢等［3］。本研究选取了75株从临床标本分离得到的鲍曼不动杆菌作为研究对象，对五味子的抑菌作用进行了研究；使用了14种抗菌药物对产金属β－内酰胺酶（MBL）和非产MBL的菌株进行了体外抑菌试验；旨在为临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 25株敏感的鲍曼不动杆菌分离自来自新疆乌鲁木齐市儿童医院的临床送检标本；50株多重耐药的鲍曼不动杆菌分离自新疆医科大学第一附属医院医学检验中心的临床标本。上述临床标本为2013年3～10月门诊和住院患者留取的各种标本，其中痰液标本的43例，尿液13例，分泌物9例，血液6例，腹水3例，脑脊液2例。

1.2 仪器与试剂 使用的仪器主要包括生物梅里埃公司Vitek－2Compact细菌鉴定仪及配套比浊仪、SHINVALMQ－R全自动立式灭菌器（购自山东新华医疗器械股份有限公司），Sanyo公司NUS430型生物安全柜、DHP－500型电热恒温培养箱（北京市乐光明医疗仪器厂）。肉汤培养基由本中心自行配制。药敏纸片均购自英国Oxoid公司；阴性鉴定卡GN09、阴性药敏卡AST－GN09均购自生物梅里埃公司。

1.3 方法

1.3.1 细菌鉴定 试验所用菌株均经生物梅里埃公司Vitek－2Compact细菌鉴定仪鉴定到种；标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922。

1.3.2 中药水煎液的制备 取五味子中药材100g，加水1～2L，浸泡30min后煎煮，煮沸后文火煎30min，经100目筛网过滤，相当于生药1g/mL，灭菌后，－20℃冰箱保存备用。

1.3.3 MBL检测 从75株鲍曼不动杆菌中选出产MBL和不产MBL的菌株。参照文献［3］，采用头孢他啶、亚胺培南、头孢他啶＋EDTA、亚胺培南＋EDTA双纸片法测定这四种纸片的抑菌环直径。加入EDTA的量均为10μL，物质的量浓度为500mmol/L。头孢他啶＋EDTA与头孢他啶或亚胺培南＋EDTA与亚胺培南抑菌环直径之差大于或等于5mm者为MBL确证试验阳性。

1.3.4 五味子体外抑菌试验 采用2倍稀释法进行体外抑菌试验［4］。将收集菌种复苏，配制0.5麦氏单位菌悬液，取试管750支，分为75组，10支/组。分别向各试管中加入1mL肉汤培养基，再向每组第1支试管中加入1mL五味子水煎液，混匀，倍比稀释至第9管，即第1～9支试管（试验组）中的五味子水煎液浓度依次为0.500、0.250、0.125、0.063、0.032、0.016、0.008、0.004、0.002g/mL。第10支试管不加五味子水煎液（只加入肉汤培养基）作为阳性对照组。75组试管中每支加入100μL细菌悬液。另取5支试管，只加1mL五味子水煎液作为阴性对照组。将试管置于37℃温箱，培养24h，次日观察试验组和对照组检测结果。结果判定按照2010年美国临床实验室标准化协会（CLSI）标准执行。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行统计分析，组间比较选用配对资料χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MBL的检测 从75株鲍曼不动杆菌挑选50株多重耐药产MBL的菌株做MBL确证试验，阳性菌株占76%（38/50）。

2.2 产MBL和非产MBL菌株对抗菌药物的耐药情况 见表1。

2.3 五味子体外最小抑菌浓度（MIC） 观察试管，阳性对照组试管浑浊，说明有细菌生长，用“＋”表示；阴性对照组试管清亮，说明无细菌生长，用“－”表示。五味子对鲍曼不动杆菌的MIC为0.016g/mL，见表2。

3 讨 论

鲍曼不动杆菌是一种革兰阴性杆菌，与人类健康有密切关系，是社区获得性感染的主要细菌之一［5－6］。这种细菌是重要的院内感染病原体，可出现在肺炎，血液病，伤口感染，脑膜炎等患者中［7－8］。在过去的10年中，鲍曼不动杆菌出现多重耐药的概率也在逐年增加［9－10］。因此，对其耐药性的研究也越来越多。本研究用五味子对产MBL和非产MBL的鲍曼不动杆菌进行了体外抑菌试验，旨在为临床用药提供参考。

我国中医药历史悠久，经研究发现，传统中药有清热解毒、抗菌等作用［11－13］且具有相对安全、不良反应小、价格低廉、不易产生耐药等优点，在抗感染治疗中存在巨大的开发潜力。本试验在前人研究的基础上进行了进一步研究，通过体外抑菌试验发现五味子水煎液对鲍曼不动杆菌的MIC为0.016g/mL。产MBL的鲍曼不动杆菌占所研究细菌株数的76%。虽然本研究表明五味子对产MBL的鲍曼不动杆菌有一定的抗菌作用，但其在体内的抑菌效果究竟如何尚有待研究，还需要进一步分析并提取五味子的抗菌活性成分，进行体内实验，从而高效地应用于临床产MBL鲍曼不动杆菌感染的治疗。

由于多重耐药菌株的大量产生，导致临床抗菌药物治疗失败，本研究尝试采用一种中药——五味子来进行体外抗菌试验。五味子具有资源丰富、价格低廉、不良反应小等优点。将中药和西药在抗感染治疗中进行联合应用可以最大限度地发挥中药在临床抗菌治疗过程中的优势。本研究显示，五味子对产和非产MBL的鲍曼不动杆菌均有不同程度的抑菌作用。

［1］于亮，王梅，李玉臣，等.2007～2010年泰安医院临床主要病原菌分布及两种主要非发酵菌的耐药分析［J］.中华临床医师杂志：电子版，2011，5（16）：4766－4769.

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［5］ 张景皓，肖明霞，季萍.黄芩、黄连、五味子对5种多重耐药菌抑菌作用的实验研究［J］.新疆医学，2012，42（2）：4－7.

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Antibacterial activity of Schisandra to metallo－β－lactamase－producing Acinetobacter baumannii in vitro

Li Yanhong1，Zhang Jinghao2#，Li Wei1，Ji Ping1△
（1.Center for Clinical Laboratory，the first Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Xinjiang Urumqi 830054，China；2.Department of Clinical Laboratory，Huadong Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai 200040，China）

ObjectiveTo investigate the antibacterial activity of Schisandra to Acinetobacter baumannii including metallo－β－lactamase（MBL）－producing and non－MBL－producing stains in vitro.Methods75strains of Acinetobacter baumannii were preliminary screened for clinical isolates of MBL－producing strains，to which confirmatory tests of MBL producing were performed.Drug sensitivities of the Acinetobacter baumannii to 14antibacterial drugs were tested.In vitro antibacterial tests was adopted to determine the MIC of schisandra to 75strains of Acinetobacter baumannii（including MBL and non－MBL－producing Acinetobacter baumannii）.ResultsMBL confirmatory test showed that among the 50strains selected 38strains were positive accounted for 76%（38/50）.ConclusionSchisandra has some antibacterial effect on Acinetobacter baumannii especially MBL－producing Acinetobacter baumannii，and can be combined with western medicine in the treatment of Acinetobacter baumannii infection.

Schisandra； Acinetobacter baumannii； metallo－β－lactamase

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.008

A

1673－4130（2015）03－0306－02

2014－12－08）

李艳红，检验技师，主要从事微生物检验方面的研究。△

，Email：jiping4847860＠163.com。#共同第一作者。