埃博拉出血热疫苗及新药的研究进展

刘子琪 孙同文 万有栋 阚全程

(郑州大学第一附属医院 河南郑州 450052)

埃博拉出血热(ebola hemorrhagic fever，EBHF)是由埃博拉病毒引起的致命病毒性出血热，为人兽共患传染病，病死率高达90%。1976年该病首次于前扎伊尔和苏丹发现，距今已爆发疫情9次[1－2]。截止到2015年3月1日，疫情最严重的利比里亚、塞拉利昂和几内亚3国共感染23 934例，死亡9 792例[3]，至此西非EBHF流行造成的感染及死亡人数均达历史最高。WHO宣布进入国际紧急状态，各国派遣医疗卫生支队进行援非行动，医药研究机构加快疫苗及最新药物的研发，EBHF疫情逐渐得到控制，死亡人数较前明显降低。目前由于对EBHF的发病机制还不够清楚，在治疗方面还没有针对EBHF的特异性治疗，有少量疫苗与药物被批准用于临床紧急状况，其余仍处于包括非灵长类动物等实验研究中。

1 综合治疗

在治疗方面，目前尚无特效治疗方法，主要采用对症支持治疗，包括维持水电解质平衡，预防和控制出血，控制继发感染，有效维护各脏器功能，积极处理肾衰竭、出血和DIC等并发症，可提高EBHF患者的治愈率。WHO表示，恢复期患者的血清与免疫球蛋白可作为疾病爆发阶段的经验性治疗药物[4]。

2 病毒疫苗

现阶段，处于研发和临床试验阶段的疫苗共20多种，可分为传统疫苗和新型疫苗两大类，这些疫苗几乎只针对病死率最高的扎伊尔埃博拉病毒。

2.1 传统病毒疫苗 传统的病毒疫苗包括灭活病毒疫苗和减毒活病毒疫苗。在1976年发现埃博拉病毒后，灭活疫苗的研究和实验就已经开展，把灭活的埃博拉病毒注入实验动物体内，诱导机体产生免疫反应，进而达到保护作用。不过，在非人灵长类动物的实验中基本以失败告终[5－6]，而且考虑到灭活不彻底可能对人体造成的伤害，灭活疫苗在后续的疫苗研发过程中基本不予考虑。减毒活疫苗是一种病毒缺陷株。2008年Halfmann等[7]用反向遗传学研发的一种基因重组的减毒活疫苗证明与野毒株有95%的相似性，能够模拟病毒完整的感染过程，对人体的保护力比较强，且在遗传学上十分稳定，这点并不同于传统意义上的减毒活疫苗。目前的实验已充分证明该疫苗能使小鼠和豚鼠免遭埃博拉病毒的感染，且十分安全，不过对于非人灵长类动物，它的保护作用还未得到验证，需要进一步跟踪研究。

2.2 新型疫苗 新型疫苗种类较多，主要可分为亚单位疫苗、核酸疫苗和病毒载体疫苗等。亚单位疫苗是通过化学分解或有控制性的蛋白质水解方法，提取细菌、病毒的特殊蛋白质结构，筛选出不含有核酸，具有免疫活性的片段制成的疫苗，包括重组表达出的特定的病毒抗原蛋白和病毒样颗粒两类疫苗。Konduru等[8－9]实验研究证明，两种疫苗都是高效且安全的，亚单位疫苗仅有几种主要表面蛋白质，避免产生许多无关抗原诱发的抗体，从而减少疫苗的副反应和疫苗引起的相关性疾病。不足之处是该疫苗的免疫原性较低，需与佐剂合用才能产生好的免疫效果。不过，该疫苗在非人灵长类动物中的保护作用还不得而知。病毒载体疫苗包括非复制型载体疫苗和复制型载体疫苗。在这类疫苗研发的研究报道中，学者们[10－12]关注的重点围绕在腺病毒载体疫苗、DNA疫苗、复制缺陷型病毒疫苗这几个方面。目前发展最快的两种潜在疫苗ChAd 3－eboz和VSV－ZEBOV已进入Ⅲ期临床试验，且预计2015年上半年进行大规模的商业化生产[13]。但迄今为止，尚无美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)批准的可用于人体的疫苗[14]。

3 抗病毒药物

根据抗病毒药物作用靶标的不同，抗病毒药物可分为抑制病毒入侵细胞和抑制病毒复制两类药物。

宿主细胞膜蛋白为病毒侵入抑制剂药物的重要靶点，NPC1蛋白与糖蛋白GP是埃博拉病毒的特异性受体。体外研究显示，尼曼－匹克病患者的神经母细胞以及雌激素受体调节剂、胆固醇合成酶抑制剂、抗抑郁药均可抑制埃博拉病毒进入细胞，其作用机制可能就与NPC1蛋白有关[15]。

研究证明，糖蛋白GP可作为抑制病毒进入宿主细胞的结合性受体[16]。单克隆抗体就是从不同位置与病毒的糖蛋白GP结合，从而抑制病毒基因组进入宿主细胞，并结合新生病毒，阻碍其芽生或从细胞表面释放，从而达到抑制病毒入侵的目的。目前世界上已得到认可的单克隆抗体包括ZMapp、TKMEbola和法匹拉韦，美国FDA已经批准ZMapp和TKM－Ebola在紧急情况下可用于确诊或者疑似感染埃博拉病毒的患者。2015年2月27日美国政府宣布，2014年埃博拉疫情高峰期名声大噪的药物ZMaPP，正式于利比里亚开始临床试验[17]。

目前有研究得出，组织蛋白酶抑制剂(E64/CA074)可抑制病毒侵入，但因研究人群数较少，作用机理不够清楚，其疗效无法得到充分验证。Geisbert等[18]研究发现，Small interfering RNA能够在埃博拉病毒的聚合酶L、VP24和VP35区域与基因序列结合，干扰病毒的转录和复制。

在我国，科研人员历时5 a研制出一种新型抗病毒药物JK－05。研究表明，该药在细胞和动物水平感染试验中均具有抗埃博拉病毒活性。该药物虽已完成临床前研究，并在适用于广谱抗流感时完成了临床安全性评价，但对于EBHF的治疗仍仅限于紧急情况下使用[19]。

4 中药治疗

中医几千年来在防治疫病中积累了丰富的经验，特别在抗击非典和禽流感过程中发挥了重大作用，受到普遍认可。但是埃博拉对国内来说，了解较少，还无临床治疗经验或实验室数据，只能在理论上进行探讨。目前，对于埃博拉的治疗也主要是针对病症，通过调动全身抗病能力，阻止或逆转器官衰竭和病理损害，同时兼抗病毒起到一定的治疗作用。国家中医药管理局专家组为本病制定了相关指导性意见，可供临床参考。

发病初期患者出现高热、畏寒、腹痛、腹泻，可参考方药银翘散合升降散、葛根芩连汤加减。患者高热不退，出现皮肤瘀斑，参考方药清瘟败毒饮、升降散加减。患者病情加重，出现全身多部位出血，可参考方药凉血地黄汤加减。患者出血不止，并发肾功能障碍时可参考方药生脉饮加减，冲服安宫牛黄丸。

除此之外，在预防方面，除按WHO发布的隔离防护措施外，鉴于初期以湿热邪毒为主还可以采用芳香避秽、健脾祛湿的方法来加大预防的效果。在温热病恢复期，多见皮疹消褪并脱屑，出血逐渐停止，以口渴、纳呆、关节疼痛等为主要不适，可以护胃益气健脾等辨证调治。

5 小结

总体上讲，目前对于EBHF的治疗方法较多，疫苗及新药研发仍在继续。在全球化日益明显的今天，尤其是在传染性疾病大流行时，世界各国的联系更显紧密。因此，在研发诸如治疗EBHF的药物方面，全球应加强协作、加大投入、实现共赢。

[1]Pourrut X，Kumulungui B，Wittmann T，et al.The natural history of Ebola virus in Africa[J].Microbes Infect，2005，7(7 － 8):1005－1014.

[2]Colebunders R，Borchert M.Ebola haemorrhagic fever—a review[J].J Infect，2000，40(1):16 － 20.

[3]World Health Organization.Ebola Situation Report[EB/OL].(2015 －03 －11)[2015 －03 －15].http://apps.who.int/ebola/current－ situation/ebola－situation－report－4－march－2015.

[4]World Health Organization.Use of convalescent whole blood or plasma collected from patients recovered from Ebola virus disease for transfusion as an empirical treatment during outbreaks[EB/OL].(2014 －09 －01)[2015 －04 －02].http://www.who.int/csr/resources/publications/ebola/convalescent－ treatment/en/.

[5]Geisbert T W，Pushko P，Anderson K，et al.Evaluation in nonhuman primates of vaccines against Ebola virus[J].Emerg Infect Dis，2002，8(5):503－507.

[6]Chupurnov A A，Chernukhin I V，Ternovoi V A，et al.Attempts to develop a vaccine against Ebola fever[J].Vopr Virusol，1995，40(6):257－260.

[7]Halfmann P，Kim J H，Ebihara H，et al.Generation of biologically contained Ebola viruses[J].Proc Natl Acad Sci USA，2008，105(4):1129－1133.

[8]Konduru K，Bradfute S B，Jacques J，et al.Ebola virus glycoprotein Fc fusion protein confers protection against lethal challenge in vaccinated mice[J].Vaccine，2011，29(16):2968 － 2977.

[9]Mellquist－ Riemenschneider J L，Garrison A R，Geisbert J B，et al.Comparison of the protective efficacy of DNA and baculovirus－derived protein vaccines for EBOLA virus in guinea pigs[J].Virus Res，2003，92(2):187 －193.

[10]Richardson J S，Pillet S，Bello A J，et al.Airway delivery of an adenovirus－based Ebola virus vaccine bypasses existing immunity to homologous adenovirus in nonhuman primates[J].J Virol，2013，87(7):3668－3677.

[11]Grant－ Klein R J，Van Deusen N M，Badger C V，et al.A multiagent filovirus DNA vaccine delivered by intramuscular electroporation completely protects mice from ebola and Marburg virus challenge[J].Hum Vaccin Immunother，2012，8(11):1703 －1706.

[12]Jones S M，Stroher U，Fernando L，et al.Assessment of a vesicular stomatitis virus－based vaccine by use of the mouse model of Ebola virus hemorrhagic fever[J].J InfectDis，2007，196(Suppl 2):S404－S412.

[13]Manicassamy B，Wang J，Jiang H，et al.Comprehensive analysis of ebola virus GP1 in viral entry[J].J Virol，2005，79(8):4793 －4805.

[14]Cote M，Misasi J，Ren T，et al.Small molecule inhibitors reveal Niemann － Pick C1 is essential for Ebola virus infection[J].Nature，2011，477(7364):344 －348.

[15]US.Liberia kick off trial of Ebola drug Zmapp[EB/OL].(2015 －02－27)[2015 －04 －02].http://www.channelnewsasia.com/news/world/us－liberia－kick－off－trial/1685432.html.

[16]Basu A，Li B，Mills D M，et al.Identification of a small－ molecule entry inhibitor for filoviruses[J].J Virol，2011，85(7):3106 － 3119.

[17]Schornberg K，Matsuyama S，Kabsch K，et al.Role of endosomal cathepsins in entry mediated by the Ebola virus glycoprotein[J].J Virol，2006，80(8):4174 －4178.

[18]Geisbert T W，Lee A C，Robbins M，et al.Postexposure protection of non－human primates against a lethal Ebola virus challenge with RNA interference:a proof － of － concept study[J].Lancet，2010，375(9729):1896－1905.

[19]中国科技网.我国首个抗埃博拉病毒药物获批[EB/OL].(2014－08 －30)[2015 －04 －02].http://www.wokeji.com/jbsj/yb/201408/t20140830 －805294.shtml.