牛胚胎移植的实践操作

赵家平，韩秀军

(1.黑龙江省克东县昌盛乡畜牧站164800; 2.黑龙江省克东县畜牧兽医局164800)

将良种母牛的早期胚胎取出，或者是通过体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另外一头或数头生理状态相同的母牛体内，使之继续发育成新个体，就叫做胚胎移植［1］。

1 受体牛的选择标准

预先做好计划对于取得满意结果是很必要的。青年牛受体应该满足以下标准: 至少15月龄; 体重至少370 kg(青年奶牛) 或400 kg(青年肉牛) ;体型应该和所移植的胚胎品种相适应，从而可以自然妊娠和分娩; 体况评分2 ～2.5 分(5 分制) ; 呈现有规则的发情周期［2］。经产牛选择标准: 分娩不能多于4 次; 有良好的繁殖历史; 至少距上次分娩6 周; 自上次分娩后已恢复有规律的发情周期;体重处于维持或增长的阶段; 体况评分2.5 ～3;体型应该和所移植的胚胎品种相适应，从而可以自然地妊娠和分娩。

2 营养和管理

在移植前对受体牛加强营养6 ～8 周，而移植后仍需至少加强营养6 周，移植前后加强营养是很重要的。这个时间特别与舍饲及放牧时间相关，舍饲和放牧的转换最好都不要在胚胎移植过程中进行，而应当在移植前的2 个月或移植后至少6 周进行。需要对日料中的热量和蛋白质进行检测，以确认两者的比例达平衡要求，还应提供足够的粗饲料。对于供体，饲料中供给适量矿物质是很重要的。如果有可能发生钼中毒，则应该添加适量的保护铜(比如瘤胃药丸) 。采购受体，混群和日常处理，比如驱虫、投药、防疫、打号和修蹄，都应该至少在移植前6 ～8 周处理完毕，以减少应激。

3 疾病控制

一些感染病原可以严重地影响胚胎移植工程的成功。主要病原包括: 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 、钩端螺旋体病和牛传染性鼻支气管炎(IBR) 。3 种病原都可以通过免疫预防，但是存在于IBR 活苗中的病毒是有危险的，因为它可能危及出口胚胎移植后代的命运或进入到精液采集中心。如果已知一个牧场存在BVDV 感染的问题，则在注射疫苗前需要对受体进行普查，以便确认和除去隐性感染牛。当一个农场已知存在钩端螺旋体病时，则需要在第一次注射疫苗时，对畜群用25 mg/kg双氢链霉素进行治疗，以便减少此种菌的感染携带危险。因为对犬新孢子虫的流行病学了解得比较清楚，但还应谨慎地普查有可能感染此种病原的受体，特别是如果这种原生生物从受体垂直传染给胎儿，将影响胚胎移植后代的生殖能力。

4 同步发情

为了达到成功妊娠的目的，受体需要在移植的前1 周准确一致地进入发情期。因此，要求准确一致的同步期。放置阴道内黄体酮缓释装置或者采取黄体酮植入和注射前列腺素相结合的办法，都是比较好的方法。缓释装置可以放置9 d、10 d 或11 d，前列腺素则在取出前的24 h、48 h 或72 h 注射。这样，发情就可以达到准确一致的同步，并在装置取出后的28 ～56 h 达到高峰。笔者认为，2 次注射前列腺素的办法不能使受体最大限度达到足够的同步发情。管理者应该在移植的前一周，注意受体的发情状况。1 d 内至少观察3 次，每次最少持续20 min。在同步发情装置取出后的3 d 内，都应该进行观察。

5 胚胎移植

在检查到黄体出现，并记录哪一侧卵巢正在排卵后，就应该对受体进行胚胎移植的准备。清洁硬膜外和会阴部位非常重要，可用蘸有医用酒精的棉签进行。当穿过子宫颈后，移植枪应进入有黄体产生的同侧子宫角。将胚胎放置在子宫角内韧带(ICL) 的附近固然可以妊娠，但是如果放置于子宫角的深处则会提高成功率。理论上应该放置到ICL后10 cm 或更深些的位置。操作应该尽量轻柔，避免损伤子宫内膜。有时较肥胖牛的子宫大而下垂，此时宁肯将胚胎放置到不理想的位置，也不能对子宫过度操作，以免造成子宫内膜炎症或者物理性损伤。

6 激素添加

主要有3 种外源性激素添加使用有助于妊娠。

第1 种是外源性的黄体酮或孕激素类。黄体酮注射剂可以提高非同步受体的受孕率。然而，在移植7 ～19 d 时，应用黄体酮的阴道内缓释装置，在原位置对妊娠率没有造成影响，而在移植的7 ～21 d，应用两个此类装置(双倍剂量) 时，则对胚胎发育有直接的损害作用。在移植的第7 天应用其他外源性的黄体酮类药物(甲基炔诺酮) 处理，则可以提高受孕率(对照组受孕率为57.3%和处理组为67.8%) 。应用甲基炔诺酮对非周期性牛进行处理可以促使其妊娠。然而在周期性牛妊娠38 d 中处理，受试组和对照组没有明显差异。现在已经观察到，应用过多的外源性黄体酮可以抑制LH 的分泌，造成黄体物质减少。这样促黄体素受到抑制从而减少了内源性黄体的生成，当缓释装置移出时，造成了受体不能产生足够的黄体酮继续维持妊娠。

第2 种激素添加剂是在不同时间给予不同期间段的人绒毛膜促性腺激素(hCG) 。国外学者曾经在母牛妊娠的第13 ～35 天多次注射，而其他的应用是在胚胎移植的当天，妊娠的第14 天或15 天注射1 次。所有的处理组与对照组相比，处理组的受孕率没有明显的提高。

第3 种应用方法是在妊娠的第11 天和13 天应用GnRH 类似物，这种方法明显地提高了妊娠率。

［1］昝林森.牛生产学［M］.北京: 中国农业出版社，2011: 155.

［2］韩博，苏敬良，吴培副，等.牛病学——疾病与管理［M］.北京: 中国农业大学出版社，2006: 58-87.